扁蒴藤素调节Shh/Gli1信号通路对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和血管生成拟态的影响

目的:探讨扁蒴藤素(Pris)调节Shh/Gli1信号通路对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和血管生成拟态(VM)的影响及其机制。方法:采用MTT法检测不同浓度Pris对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用,以选取合适的干预浓度。将HeLa细胞分为对照组、环巴胺组、Pris组、Pris+pc-NC组和Pris+pc-Shh组。采用MTT法、EdU法检测各组细胞的增殖能力,Transwell小室法、流式细胞术检测各组细胞的迁移及侵袭能力和细胞凋亡率,体外血管生成实验观察VM形成情况,qPCR法检测各组细胞中Shh和Gli1 mRNA表达水平,WB法检测细胞中血管内皮生长因子A(VEGF-A)、血管内皮钙黏素(VE-cadherin)、Ki-67、caspase-3及与Shh/Gli1信号通路相关蛋白表达水平。结果:0.25~2.5μmol/L的Pris对HeLa细胞增殖均有显著抑制作用,选择1.5μmol/L的Pris进行后续实验。对照组细胞形成良好的管腔结构,与对照组相比,环巴胺组、Pris组和Pris+pc-NC组HeLa细胞管腔结构被明显破坏,细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵袭细胞数目、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3表达均显著升高(均P<0.05);环巴胺组与Pris组HeLa细胞各项检测指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05);与Pris+pc-NC组相比,Pris+pc-Shh组细胞管腔结构形成明显改善,细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵袭细胞数、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显著升高(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3表达均显著降低(均P<0.05)。结论:Pris抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移与侵袭和VM的形成并促进细胞凋亡,可能与阻断Shh/Gli1信号通路有关。

中药砒霜上调E-钙黏蛋白抑制宫颈癌Hela细胞生长、侵袭、迁移机制研究

目的:研究中药砒霜的主要成分三氧化二砷(As_(2)O_(3))抑制宫颈癌Hela细胞生长、侵袭、迁移的机制,观察As_(2)O_(3)对宫颈癌Hela细胞组蛋白脱乙酰基酶1(HDAC1)、E-钙黏蛋白表达的影响,以及联合HDAC1抑制剂伏立诺他(SAHA)的协同作用。方法:以宫颈癌Hela细胞作为载体,随机分为空白对照组、As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组4组,采用CCK-8法测定不同药物浓度对Hela细胞活性的抑制情况,并筛选后续实验药物浓度;采用Transwell法、划痕法检测各组药物对Hela细胞侵袭、迁移能力的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应及蛋白免疫印迹法检测HDAC1和E-钙黏蛋白的mRNA表达情况与蛋白表达情况。结果:随着各组药物浓度增加,Hela细胞的活性逐渐降低。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的Hela细胞活性均低于空白对照组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组穿越Transwell小室膜的细胞数量均少于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的细胞数量少于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05);As_(2)O_(3)组的细胞数量少于SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的Hela细胞迁移百分比均低于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的Hela细胞迁移百分比低于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05);As_(2)O_(3)组的Hela细胞迁移百分比低于SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的HDAC1 mRNA表达水平均低于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)组的HDAC1 mRNA表达水平高于SAHA组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的HDAC1 mRNA表达水平低于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的E-钙黏蛋白mRNA表达水平均高于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的E-钙黏蛋白mRNA表达水平高于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的HDAC1蛋白表达水平均低于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的HDAC1蛋白表达水平低于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组E-钙黏蛋白的蛋白表达水平均高于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组E-钙黏蛋白的蛋白表达水平高于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05)。结论:As_(2)O_(3)抑制Hela细胞的最佳浓度为8μmol/L,联合SAHA时,最佳抑制浓度为4μmol/L。As_(2)O_(3)可能通过抑制HDAC1的表达,同时促进升高E-钙黏蛋白的表达,与SAHA发挥协同作用抑制Hela细胞生长、侵袭、迁移。

MACC1的表达对宫颈癌Hela细胞凋亡特异核酸酶及细胞周期的影响

探讨MACC1的表达对宫颈癌Hela细胞凋亡特异核酸酶及细胞周期的影响。方法 将宫颈癌Hela细胞进行培养;扩增MACC1基因;检测MACC1、cyclinD1、MMP2、MMP9、caspase-3基因表达水平、凋亡特异核酸酶水平、Hela细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭水平以及Hela细胞的周期(G1期、S期、G2期)。结果 siRNA;MACC1组的MACC1、cyclinD1、MMP2、MMP9基因表达水平低于siRNA;NC组;caspase-3基因表达水平高于siRNA;NC组(P<0.05)。siRNA;MACC1组的Hela细胞中凋亡特异核酸酶水平为(1.85±0.18);显著高于siRNA;NC组(1.01±0.09)(P<0.05)。siRNA;于细胞侵袭及细胞迁移数量和Hela细胞A值、等方面,相比siRNA,MACC1组更低;NC组;细胞凋亡率高于siRNA;NC组(P<0.05)。siRNA;MACC1组的Hela细胞中G1期细胞比例高于siRNA;NC组;S期细胞、G2期细胞的比例低于siRNA;NC组(P<0.05)。结论 MACC1的表达能够改善宫颈癌Hela细胞的凋亡特异核酸酶水平,调控细胞周期,将Hela细胞阻滞在G1期,诱导细胞凋亡。

斑蝥酸钠在诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡相关基因表达中的作用机制研究

目的:探讨斑蝥酸钠在诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡相关基因表达中的作用机制。方法:2023年1月—2023年12月购买1株人宫颈癌Hela细胞,培养至对数生长期后开始实验,将其分为4组,分别加斑蝥酸钠0μmol/L(空白对照组)、4μmol/L(4μmol/L组)、8μmol/L(8μmol/L组)和16μmol/L(16μmol/L组),每个浓度分别设置5个复孔(每组样本量为5),以细胞活力试验(CCK-8)检测细胞增殖情况,以流式细胞仪检测细胞凋亡情况,以实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤2(BCL-2)、人细胞凋亡调节因子(Bax)、人半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达情况。结果:4μmol/L组、8μmol/L组和16μmol/L组的细胞增殖抑制率、凋亡率和Caspase-3相对表达量水平均高于空白对照组,BCL-2/Bax相对表达量水平低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着斑蝥酸钠浓度的升高,人宫颈癌Hela细胞增殖抑制率、凋亡率和Caspase-3随之也升高,BCL-2/Bax相对表达量逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。经斑蝥酸钠处理后可见细胞皱缩、变圆,细胞边缘出芽形成多花环结构的凋亡小体。结论:斑蝥酸钠具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖、促进其凋亡的作用,具有剂量依赖性,其对细胞凋亡的调控作用可能与调控BCL-2,Bax和Caspase-3表达有关。

MLN4924对宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响

目的 观察选择性神经前体细胞发育相关受控表达分子(NEDD8)活化酶(NAE)抑制剂MLN4924对人宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响。方法 使用不同浓度MLN4924(0.5、1.0、2.0μmol·L^(-1))加入Hela细胞株处理24 h,以不加MLN49240为对照组。免疫印迹法(WB)检测泛素连接酶蛋白(Cullins-1)、S期激酶相关蛋白(Skp2)、磷酸化核因子κB抑制蛋白α(P-IκBα)及p50的表达水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌水平。MTT比色法检测经MLN4924处理的Hela细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率。结果 MLN4924对宫颈癌Hela细胞增殖有显著的抑制作用,随着剂量的加大抑制作用更明显,且有剂量依赖性;Hela细胞Cullins-1、Skp2及p50表达下调,P-IκBα上调(P<0.05);各处理组IL-6、TNF-α较对照组降低(P<0.05),S期细胞百分率较对照组升高(P<0.05),大量四倍体细胞形成,细胞生长周期受阻;细胞凋亡率也随MLN4924剂量增大而升高。结论 NAE抑制剂MLN4924对人宫颈癌Hela细胞的增殖有明显抑制作用,诱导Hela细胞周期阻滞和凋亡。

微小染色体维持蛋白2基因诱导性敲除宫颈癌HeLa细胞系的建立及对DNA复制的影响

目的利用诱导性CRISPR/Cas9技术建立微小染色体维持蛋白2(MCM2)基因敲除的宫颈癌HeLa细胞系,并探究MCM2对DNA复制及复制压力的影响。方法使用诱导性CRISPR/Cas9系统TLCV2,构建MCM2敲除HeLa细胞系;并分为对照组(Control)、敲除1组(KO1)和敲除2组(KO2)。通过Western blot、EdU掺入实验、实时定量PCR、免疫荧光、CCK-8等实验,分析MCM2敲除对DNA复制和羟基脲诱导复制压力的影响。结果经过诱导后CRISPR/Cas9系统有效地敲除MCM2基因,并影响MCM2-7复合物的稳定。与对照细胞相比,MCM2敲除细胞DNA复制能力显著下降,同时Cyclin A1、Cyclin E1和CDK4的mRNA表达水平降低。在DNA复制压力下,MCM2敲除降低了细胞的存活能力、DNA损伤修复能力,并增加基因组的不稳定性。结论MCM2基因敲除降低正常条件下HeLa细胞的DNA复制能力,并降低复制压力后细胞的存活能力。本研究成功地构建了诱导性MCM2基因敲除HeLa细胞系,为进一步研究MCM2基因在宫颈癌中的作用及其生物学功能奠定了基础。

雄黄溶液对Hela和Caski宫颈癌细胞增殖抑制作用的研究

宫颈癌是一种高发病率和高死亡率的女性恶性肿瘤。雄黄,一种传统的中草药成分,近年来由于其潜在的抗肿瘤活性受到关注。本研究旨在探究雄黄溶液对宫颈癌细胞株Hela和Caski的抑制作用。通过制备不同浓度的雄黄溶液,对两种细胞株进行处理,并使用CCK-8检测细胞活力。结果显示,随着雄黄浓度的增加,Hela细胞的增殖抑制率逐渐上升。这为雄黄在宫颈癌治疗中的潜在应用提供了初步的实验依据。

宫颈癌HeLa细胞外泌体与Wnt/β-catenin信号通路相关性研究

分析宫颈癌HeLa细胞外泌体对Wnt/β-catenin信号通路的作用机制。方法 选取对数生长期宫颈癌Hela细胞并以超速离心法将Hela细胞外泌体分离出来,外泌体标志蛋白通过Westernblotting检测,将Hela细胞分为实验组和对照组,细胞培养基分别含Hela细胞外泌体及无Hela细胞外泌体,细胞侵袭能力通过Transwell小室实验检测,细胞迁移能力通过细胞划痕实验检测,Wntl及β-catenin蛋白表达水平通过Westernblotting法进行检测。结果 相比于对照组,Hela细胞中有着更多的侵袭细胞数,迁移距离更长(P<0.05)。两组对比,Hela细胞中Wnt/β-catenin信号通路有着更高的Wntl及β-catenin蛋白表达水平(P<0.05)。结论 宫颈癌HeLa细胞外泌体可导致宫颈癌细胞侵袭能力以及迁移能力增强,原因可能在于Hela细胞来源外泌体可激活Wnt/β-catenin信号通路。

鸦胆子苦醇通过TLR9-MyD88信号通路调控Hela细胞凋亡的机制研究

目的探究鸦胆子苦醇(Brusatol,BRU)通过TLR9-MyD88信号通路调控Hela细胞凋亡的分子机制。方法针对本实验室保存的Hela细胞,使用不同浓度(0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 nmol·L^(-1))的鸦胆子苦醇处理细胞。并将Hela细胞分为Control组(正常培养的Hela细胞)、BRU-L组(使用10.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇处理细胞)BRU-H组(使用20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇处理细胞)、BRU+pcDNA-NC组(转染pcDNANC+20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇)、BRU-H+pcDNA-TLR9组(转染pcDNA-TLR9+20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇)。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和EdU法检测各组细胞增殖情况;TUNNEL染色法,经流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹(Western blot)检测各组细胞TLR9、MyD88、Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)情况、ELISA检测各组细胞三磷酸腺苷(ATP)和活性氧基团(ROS)含量。结果与0 nmol·L^(-1)组比较,10 nmol·L^(-1)组细胞活存活率、IC50值开始显著降低(P<0.05)。不同浓度的BRU刺激细胞后,细胞增殖能力显著降低,且呈剂量依赖(P<0.05)。。与Control组比较,BRU-L、BRU-H组、BRU-H+pcDNA-NC组细胞5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)阳性细胞率、缺口末端标记法(TUNEL)阳性细胞率、细胞凋亡率、细胞Bcl-2蛋白均显著降低,TLR9和MyD88蛋白、Bax、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平均明显增加(P<0.05);Control组、BRU-L、BRU-H组/BRU-H+pcDNA-NC呈持续递减/递减趋势(P<0.05);与BRU-H+pcDNA-NC组比较,BRU-H+pcDNA-TLR9组EDU阳性细胞率、TUNEL阳性细胞率、细胞凋亡率、细胞Bcl-2蛋白均显著升高,TLR9和MyD88蛋白、Bax、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平均明显降低(P<0.05)。与Control组比较,BRU-L、BRU-H组、BRU-H+pcDNA-NC组细胞JC-1水平和ATP含量显著降低,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平显著增加(P<0.05);与BRU-L组比较,BRU-H组、BRU-H+pcDNANC组JC-1水平和ATP含量进一步降低,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平进一步增加(P<0.05);与BRU-H+pcDNA-NC组比较,BRU-H+pcDNA-TLR9组细胞JC-1水平和ATP含量增加,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平降低(P<0.05)。结论鸦胆子苦醇可通过调控TLR9-MyD88信号通路制Hela细胞增殖。

顺铂通过增加HeLa人宫颈癌细胞中Nrf2入核促进细胞自噬和凋亡

目的:探讨顺铂对HeLa人宫颈癌细胞中Nrf2蛋白表达及核转位的影响,并观察细胞自噬和凋亡的变化。方法:使用不同浓度的顺铂(0、2.5、5、10μmol/L)干预HeLa人宫颈癌细胞,MTT法检测细胞活性,Transwell实验观察细胞迁移能力,mCherry-GFP-LC3B融合蛋白腺病毒转染HeLa细胞观察自噬水平的变化,流式细胞术检测细胞凋亡水平,免疫蛋白印迹检测Nrf2在细胞质和细胞核内的表达情况,免疫荧光法观察Nrf2的核转位情况。结果:与对照组相比,2.5、5、10μmol/L的顺铂均可抑制HeLa细胞的活性及细胞迁移能力(P<0.05),且随着药物浓度增高抑制作用增强(P<0.05)。与对照组相比,2.5、5、10μmol/L的顺铂均可促进HeLa细胞中LC3B的表达、细胞凋亡及Nrf2的核转位(P<0.05),降低细胞质中Nrf2的蛋白表达水平(P<0.05),并升高细胞核中Nrf2的蛋白表达水平(P<0.05)。结论:顺铂通过增加HeLa人宫颈癌细胞中Nrf2入核促进细胞自噬和细胞凋亡,并抑制细胞的活性和迁移能力。

褪黑素联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

探究了褪黑素(melatonin,MLT)联合顺铂(cisplatin,DDP)对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。体外培养宫颈癌HeLa细胞,利用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定MLT、DDP及其联合使用对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响;将HeLa细胞分为对照组、褪黑素组、顺铂组和联合组;其中褪黑素组采用2.5 mmol·L^(-1)的褪黑素处理细胞;顺铂组采用5μg·mL^(-1)的顺铂处理细胞;联合组采用2.5 mmol·L^(-1)的褪黑素+5μg·mL^(-1)的顺铂联合处理。采用克隆形成实验、流式细胞仪、划痕实验和Transwell小室实验分别检测各组HeLa细胞的增殖、凋亡、侵袭情况,蛋白质印迹法检测Ki-67、PCNA、Bcl-2、Bax、N钙粘蛋白(N-cadherin)、E钙粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达情况。MTT结果显示MLT、DDP可以显著抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖(P<0.05),且随着使用浓度的升高抑制率显著升高;相比单独使用MLT、DDP,联合使用MLT和DDP可以显著升高对HeLa细胞增殖的抑制率(P<0.05)。相比对照组,褪黑素组和顺铂组细胞克隆形成率、单位面积侵袭细胞数目、划痕愈合率以及Ki67、PCNA、Bcl-2、E-cadherin蛋白相对表达水平均降低(P<0.05),细胞凋亡率和蛋白Bax、N-cadherin、Vimentin相对表达水平升高(P<0.05)。相比褪黑素组和顺铂组,联合组细胞克隆形成率、单位面积侵袭细胞数目、划痕愈合率、Ki67、PCNA、Bcl-2、E-cadherin蛋白相对表达水平均降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达水平升高(P<0.05)。结果表明,MLT和DDP均可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭并促进其凋亡,且联合使用效果更为显著。

黄芩茎叶总黄酮对人宫颈癌Hela细胞株体外生长的影响

目的探讨黄芩茎叶总黄酮(SSTF)治疗人宫颈癌的可行性。方法配制含人宫颈癌细胞的细胞悬 液(4×105个／ml),取96孔板,每孔接种细胞悬液100μl,阴性对照组设6个孔均不点药,阳性对照药为5-氟尿嘧 啶(5-Fu),取0.01、0.1、1、10、100μg／ml5个浓度,SSTF选取浓度与5-Fu相同,每个浓度点3个孔,37℃5％CO2 培养48-72小时后采用MTT法在酶标仪上以570nm波长测定吸光度(A),计算SSTF和5-Fu抑制Hela细胞 株体外生长的抑制率和半数抑制浓度(IC50)。结果 SSTF、5-Fu均可明显抑制肿瘤细胞的生长,其IC50分别为 20.5、10.5μg／ml。结论SSTF能抑制人宫颈癌Hela细胞体外生长,具有一定细胞毒性作用,可作为临床治疗宫 颈癌的药物进一步深入研究。

卵叶娃儿藤生物碱对宫颈癌细胞株HeLa的体外作用

为了观察卵叶娃儿藤总生物碱[Tylophora ovata(Lindl.)Hook.ex Steud,alkaloids TOHa]体外抑制人宫颈癌细胞株HeLa增殖、诱导细胞凋亡的作用,将不同浓度的TOHa与HeLa细胞在体外培养,用MTT法观察TOHa对HeLa细胞的生长抑制作用,测定其在490nm的OD值;用细胞形态学、AnnexinV/PI双标记检测细胞凋亡。结果表明,TOHa能抑制HeLa细胞的增殖和活力,呈现作用时间和剂量的依赖关系。HeLa细胞经TOHa作用后,Annexin V+/PI-表达升高,Giemsa染色后出现凋亡细胞的特征性改变。

黄连素对人宫颈癌Hela细胞株的体外作用研究

目的研究黄连素对人宫颈癌Hela细胞株的体外作用,探讨其可能的作用机制。方法采用MTT法测定细胞生长抑制率;原位末端标记技术法(TUNEL)检测细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测药物作用前后细胞(COX-2)、Bcl-2蛋白水平表达的变化。结果黄连素在体外能以时间和剂量依赖的方式对宫颈癌Hela细胞产生细胞毒作用并诱导其凋亡;免疫细胞化学法证实黄连素作用Hela细胞后Bcl-2蛋白表达下调,COX-2的表达无明显变化。结论黄连素在体外对宫颈癌Hela细胞具有生长抑制作用,并可诱导细胞凋亡,其诱导凋亡作用可能与Bcl-2蛋白表达下调有关。

氯丙嗪对体外培养人宫颈癌Hela细胞株的生长抑制作用

目的:探讨氯丙嗪对人宫颈癌Hela细胞株的体外抑制作用。方法:采用MTT测定法,观察不同浓度氯 丙嗪(0μmol/L,3.0μmol/L,6.0μmol/L,12.5μmol/L,25.0μmol/L,50.0μmol/L,100.0μmol/L)作用后体外培养 的人宫颈癌Hela细胞的细胞增殖抑制率,并于用药后不同时间点观察细胞形态学变化。结果:不同浓度的氯丙嗪 对Hela细胞生长均有抑制作用,随药物浓度的增加,抑制作用加强。氯丙嗪浓度为3.0μmol/L即呈现明显的生长 抑制作用,抑制率为7.91%;浓度为100.0μmol/L时抑制率最高,达59.39%。用药4h后镜下即可见部分细胞贴 壁性降低,肿胀呈球形,核膜溶解,不见核的轮廓;部分细胞裂解呈碎片状;用药8h后碎片明显增多。结论:氯丙嗪 对人宫颈癌Hela细胞株具有体外生长抑制作用。

CXCL12-CXCR4生物轴对宫颈癌Hela细胞株的影响

目的:探讨CXCR4在宫颈癌细胞株Hela细胞中的表达情况,及CXCL12-CXCR4生物轴对Hela的增殖、迁移和侵袭能力的影响,并研究CXCR4的特异性拮抗剂AMD3100对CXCR4的特异性阻断效果。方法:将宫颈癌Hela细胞株细胞进行体外培养。免疫组化检测Hela细胞中CXCR4的表达情况。采用MTT法研究不同浓度CXCL12对Hela细胞增殖的影响;Transwell法进行实验,判断在无血清培养液的生长条件下,不同浓度的CXCL12和CXCR4拮抗剂AMD3100对Hela细胞迁移、侵袭的影响。结果:CXCR4在Hela细胞的细胞膜、细胞质中有表达。1组Hela细胞的增殖数与2组及3组两两比较,差异有统计学意义(P<0.05),4组Hela细胞的增殖数较2组、3组低,差异有统计学意义(P<0.05)。与A组Hela细胞的迁移数和侵袭数相比,B组明显更高(P<0.05);而C组Hela细胞的迁移数和侵袭数明显高于A组和B组;D组Hela细胞的迁移数和侵袭数均低于A、B、C3组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CXCR4在Hela细胞的细胞膜、细胞质中均表达。CXCL12-CXCR4生物轴可促进宫颈癌Hela细胞株的迁移及侵袭,而CXCR4拮抗剂AMD3100能抑制这一过程,CXCL12-CXCR4生物轴在宫颈癌Hela细胞生长和转移过程中可能起着重要作用。

乌头碱调控miR-181d-5p/DDX3轴对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨乌头碱通过调控微小RNA-181d-5p(miR-181d-5p)/DEAD-box RNA解旋酶3(DDX3)轴对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡的影响。方法使用不同剂量乌头碱处理宫颈癌HeLa细胞,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖确定给药剂量。将HeLa细胞分为对照组(正常培养,不进行处理),乌头碱低剂量组(4 mg/L)、中剂量组(8 mg/L)、高剂量组(16 mg/L),顺铂组(5 mg/L),乌头碱高剂量+miR-NC组[16 mg/L乌头碱+转染miR-181d-5p siRNA阴性对照(miR-NC)质粒]及乌头碱高剂量+miR-181d-5p低表达组[16 mg/L乌头碱+转染miR-181d-5p小干扰RNA(siRNA)质粒]。平板克隆形成实验及流式细胞仪分别检测各组HeLa细胞克隆形成数与凋亡情况;实时荧光定量PCR检测HeLa细胞中miR-181d-5p和DDX3 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法检测HeLa细胞中DDX3、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平;双萤光素酶报告基因实验验证miR-181d-5p与DDX3的靶向关系。结果以0.5~64 mg/L的乌头碱分别处理HeLa细胞24 h、48 h、72 h后,对HeLa细胞均有不同程度的抑制作用,选择剂量为4 mg/L、8 mg/L、16 mg/L的乌头碱用于后续实验。与对照组比较,乌头碱低、中、高剂量组及顺铂组HeLa细胞克隆形成数、DDX3 mRNA和蛋白、Cyclin D1、PCNA、Bcl-2蛋白表达水平依次降低(P<0.05),凋亡率、miR-181d-5p、Bax、Caspase-3蛋白表达水平依次升高(P<0.05);与乌头碱高剂量组和乌头碱高剂量+miR-NC组比较,乌头碱高剂量+miR-181d-5p低表达组HeLa细胞克隆形成数、DDX3 mRNA和蛋白、Cyclin D1、PCNA、Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05),凋亡率、miR-181d-5p、Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.05);双萤光素酶报告基因检测证实miR-181d-5p与DDX3存在靶向关系。结论乌头碱可调控miR-181d-5p/DDX3轴,促进miR-181d-5p表达,抑制DDX3表达,进而抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,促进细胞凋亡。

miR-145负向调控宫颈癌细胞株Hela中C-myc的表达

目的观察mi R-145对宫颈癌Hela细胞C-myc表达的影响,探讨mi R-145对C-myc的调控作用。方法以RT-PCR检测法检测Hela细胞中mi R-145和C-myc m RNA的表达。运用West Blot检测法检测C-myc蛋白的表达情况;设计并合成mi R-145的模拟物和mi R-145的抑制剂,以及两者的空白对照序列(模拟对照,抑制剂对照),用脂质体Liposome2000分别包裹二者后以使其转染,同时设立空转Liposome2000用作对照。转染后24 h分别检测C-myc m RNA和蛋白的表达变化。实验数据采用单因素方差分析和t检验进行统计分析。结果Hela细胞中mi R-145和C-myc的表达呈阳性。转染24 h后,模拟组,模拟对照组,抑制剂组,抑制剂对照组及脂质体组中C-myc m RNA相对表达水平分别为(0.40±0.32)、(0.59±0.18)、(1. 22±0.38)、(0.73±0.25)和(0.48±0.15);蛋白相对表达水平分别为(0.30±0.17)、(0.50±0.17)、(1. 35±0.59)、(0.71±0.14)和(0.72±0.29);模拟组C-myc的m RNA和蛋白相对表达水平显着低于模拟对照组和脂质体组(P<0.05)。而C-myc的m RNA和蛋白在抑制剂组中的相对表达水平显着高于抑制剂对照组和脂质体组(P <0.05)。结论人宫颈癌Hela细胞株中, C-myc是mi R-145的靶基因, mi R-145通过下调C-myc m RNA及其蛋白的表达水平,发挥负向调控C-myc的作用。

miR-21负向调控宫颈癌HeLa细胞株中hTERT的表达

目的通过观察在miR-21作用下hTERT的表达情况,探讨在宫颈癌HeLa细胞中miR-21对hTERT的调控作用。方法利用RT-PCR法及West Blot法分别检测HeLa中miR-21的表达,以及hTERT蛋白的表达情况;通过实验设计,生成miR-21模拟物和miR-21抑制剂,并分别设立两组的空白对照序列;将空转liposome2000(lipo2000)设为对照组,利用脂质体liposome2000包裹宫颈癌细胞株HeLa并予以转染。在转染后24 h及时检测hTERT及蛋白的表达量。结果HeLa细胞株中miR-21及hTERT表达阳性;转染后24 h模拟物组、模拟物对照组、抑制剂组、抑制剂对照组、脂质体组hTERT mRNA相对表达水平分别为(0.51±0.33)、(0.69±0.19)、(1.33±0.39)、(0.83±0.26)和(0.58±0.16);蛋白相对表达水平分别为(0.41±0.18)、(0.62±0.18)、(1.45±0.60)、(0.83±0.15)和(0.82±0.30);模拟物组与其对照组及脂质体组相比较,hTERT mRNA及蛋白表达情况均较低且差异有统计学意义(P<0.05);相反,在抑制剂组与其对照组及脂质体组相比较中,hTERT mRNA及蛋白表达情况明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过检测发现miR-21及hTERT基因在HeLa细胞株中均呈现高表达状态;miR-21可以调节hTERT mRNA和蛋白表达水平,从而发挥负向调控hTERT的作用。

小白菊内酯对人宫颈癌Hela细胞株生长与迁移的影响及其相关分子机制的研究

目的探讨小白菊内酯对人宫颈癌Hela细胞株生长与迁移的影响及其相关分子机制，为小白菊内脂的进一步抗肿瘤药物研发提供实验基础。方法应用CCK-8检测细胞活性，HE染色观察细胞形态学变化，细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化；细胞免疫化学染色检测BCL-2和NF—κB基因在细胞内表达，Western—blot方法检测细胞迁移相关蛋白Twist—relatedprotein1（Twistl）表达的变化。结果小白菊内酯作用后的Hela细胞的生长受到抑制，并诱导细胞凋亡。肿瘤细胞的迁移能力受到明显的抑制，实验组和对照组差异显著（P〈0．05），但是24h和48h差别并不明显；BCL-2和NF—κB基因在细胞内表达明显下调，Twistl表达明显下调，和Oh比较区别显著（P〈0．05），但是24h和48h并无明显区别。结论小白菊内酯能够抑制Hela细胞株生长与迁移能力，可能和抑制BCL-2，NF—κB基因与Twistl表达有关。