斑蝥酸钠在诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡相关基因表达中的作用机制研究

目的:探讨斑蝥酸钠在诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡相关基因表达中的作用机制。方法:2023年1月—2023年12月购买1株人宫颈癌Hela细胞,培养至对数生长期后开始实验,将其分为4组,分别加斑蝥酸钠0μmol/L(空白对照组)、4μmol/L(4μmol/L组)、8μmol/L(8μmol/L组)和16μmol/L(16μmol/L组),每个浓度分别设置5个复孔(每组样本量为5),以细胞活力试验(CCK-8)检测细胞增殖情况,以流式细胞仪检测细胞凋亡情况,以实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤2(BCL-2)、人细胞凋亡调节因子(Bax)、人半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达情况。结果:4μmol/L组、8μmol/L组和16μmol/L组的细胞增殖抑制率、凋亡率和Caspase-3相对表达量水平均高于空白对照组,BCL-2/Bax相对表达量水平低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着斑蝥酸钠浓度的升高,人宫颈癌Hela细胞增殖抑制率、凋亡率和Caspase-3随之也升高,BCL-2/Bax相对表达量逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。经斑蝥酸钠处理后可见细胞皱缩、变圆,细胞边缘出芽形成多花环结构的凋亡小体。结论:斑蝥酸钠具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖、促进其凋亡的作用,具有剂量依赖性,其对细胞凋亡的调控作用可能与调控BCL-2,Bax和Caspase-3表达有关。

藻岩黄质对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨藻岩黄质对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,分析其抑制肿瘤生长的机制。方法:体外培养HeLa细胞,设为给药组和空白对照组,空白对照组采用常规细胞培养,给药组加入一定浓度的藻岩黄质培养。采用MTT法检测不同浓度(0.1、0.5、1μmol/L)藻岩黄质处理HeLa细胞24 h及0.5μmol/L藻岩黄质处理HeLa细胞12、24、48 h后,HeLa细胞存活率的变化;采用Annexin V/PI流式细胞仪分别检测0.1μmol/L、0.5μmol/L藻岩黄质刺激HeLa细胞24 h及48 h后的凋亡情况;测定0.1、0.5、1μmol/L的藻岩黄质刺激HeLa细胞后培养基中ATP的生成和总氧摄取量。结果:与空白对照组相比,随着药物浓度增加,HeLa细胞生长逐渐缓慢(P<0.05);随着药物浓度和刺激时间增加,HeLa细胞凋亡率显著增加(P<0.05);随着药物刺激浓度增加,HeLa细胞ATP的产生率也显著下降(P<0.05)。结论:藻岩黄质能够抑制宫颈癌HeLa细胞活力并诱导其凋亡。

乙酰紫草素对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及周期的影响

目的探讨乙酰紫草素对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及周期的影响。方法将对数生长期HeLa细胞随机分为对照组及乙酰紫草素低、中、高剂量组,分别给予0、5、10、20μmol/L乙酰紫草素干预,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及周期,Western blot法检测细胞cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyclin A、CDK2、p21蛋白表达。结果与对照组比较,乙酰紫草素各剂量组24、48、72 h时细胞存活率均降低(P<0.05,P<0.01);细胞凋亡率、G 0/G 1期细胞比例升高(P<0.05,P<0.01),S期及G 2/M期细胞比例降低(P<0.01);细胞cleaved caspase-3、Bax蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),而Bcl-2、Cyclin A、CDK2和p21蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论乙酰紫草素具有抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的作用,该作用与诱导细胞凋亡及周期阻滞有关。

蛴螬石油醚提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的研究蛴螬石油醚提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法MTT法检测蛴螬石油醚提取物对体外培养的HeLa细胞株增殖抑制作用及细胞毒活性;末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸缺口末端标记(TdT-mediateddUTPnickendlabeling,TUNEL)法检测细胞凋亡;通过免疫细胞化学S-P法测定凋亡相关基因产物Bcl-2、Bax蛋白与凋亡相关蛋白caspase-8和caspase-3的表达情况。结果蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性(P<0.01)。蛴螬石油醚提取物作用细胞后凋亡细胞数目随时间延长而增多;凋亡指数与药物处理呈时间依赖性和剂量依赖性。蛴螬石油醚提取物作用后Bcl-2蛋白表达均下降,Bax、caspase-8和caspase-3表达上升,4种蛋白表达各组间比较均差异显著(P<0.01)。结论蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞具有抑制增殖及诱导凋亡作用。蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞抑制增殖作用(50μg/mL作用48h之前)主要以诱导凋亡为主。蛴螬石油醚提取物诱导凋亡作用可能与下调Bcl-2表达,上调Bax、caspase-8和caspase-3表达有关。

花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其机理研究

目的观察和探索花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其作用机理。方法结晶紫染色法检测花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测与肿瘤细胞凋亡相关基因的表达。结果花旗松素能够抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,呈剂量依赖关系;花旗松素不能诱导Bcl-2 mRNA和Bax mRNA的表达,但能使P53和P21的mRNA表达量增加。结论花旗松素具有良好的体外抑制人宫颈癌Hela细胞增殖作用;花旗松素诱导Hela细胞死亡与细胞凋亡相关,其分子机制可能与升高P53和P21mRNA表达有关,而与Bcl-2和Bax的蛋白转录无关。

紫草素通过ROS/p38信号通路诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的探讨紫草素(shikonin)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制。方法以MTT法检测shikonin的细胞毒性;相差显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生及凋亡率;Western blot检测相关蛋白的表达。结果 Shikonin时间和剂量依赖性的抑制HeLa细胞的生长;35μmol.L-1的shikonin作用于细胞24 h后可使细胞皱缩、变圆,并出芽形成明显的凋亡小体,且其可时间依赖性的诱导procaspase-3的剪切。35μmol.L-1的shikonin作用于细胞12 h和24 h均可以诱导细胞产生ROS。ROS清除剂NAC和p38抑制剂SB203580可以明显降低shikonin诱导的HeLa细胞的生长抑制和凋亡率;并且5 mmol.L-1 NAC可以上调由shikonin引起的pro-caspase-3的表达降低,下调由shikonin引起的p38蛋白的磷酸化。结论 Shikonin可以诱导HeLa细胞发生凋亡,ROS/p38信号通路参与了其凋亡的过程。

枸杞多糖诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的形态学研究(英文)

采用热水法提取药材枸杞子中的枸杞多糖。本研究通过MTT实验发现3.125～200mg/L质量浓度范围内的枸杞多糖能显著抑制宫颈癌Hela细胞的增殖;采用荧光显微镜、透射电镜和激光共聚焦扫描显微镜观察发现经枸杞多糖处理过的Hela细胞呈现出典型的凋亡特征;原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法进一步证实经枸杞多糖处理过的Hela细胞呈现凋亡特征。结果提示枸杞多糖是一种潜在的抗癌复合物,其关键作用机制是诱导癌细胞凋亡。

改良的甲基化特异PCR法在人宫颈癌Hela细胞检测中的应用

目的介绍一种CpG岛甲基化分析方法,即甲基化特异PCR法(methylation-specific PCR,MSP)以及对该方法的改良。方法用亚硫酸氢盐修饰被测DNA后,进行甲基化与非甲基化特异PCR的扩增,并对MSP法进行改良。应用该法分析人宫颈癌Hela细胞中RASSF1A、p16基因5'CpG岛甲基化状态。结果发现人宫颈癌Hela细胞中有RASSF1A、p16基因的甲基化,改良后的MSP更容易获得较好的效果。结论MSP法是一种较为简便、灵敏和具特异性的甲基化检测方法,改良后该方法更加简便可行。

白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞生长的影响

目的研究白花蛇舌草多糖对体外培养的人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞生长的影响。方法常规法体外培养人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞,设空白对照组、阳性对照组和供试药物组(大、中、小剂量),分别采用MTT法和流式细胞仪检测白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞的生长抑制率和凋亡率;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化。结果白花蛇舌草多糖可抑制人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞的生长,并促进其凋亡,其作用效果与其浓度正相关,与空白对照组相比具均有显著性差异(P﹤0.01)。结论本研究结果提示,白花蛇舌草多糖具有较好的抗肿瘤活性。

青果多糖组分对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用研究

目的探讨青果多糖不同组分对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用。方法以乙醇除脂、水提、醇沉法制备青果粗多糖,经DEAE-琼脂糖凝胶FF离子交换色谱分离,得CFW(蒸馏水溶液洗脱部位)、CF1(0. 5 mol/L氯化钠溶液洗脱部位)、CF2(1. 0 mol/L氯化钠溶液洗脱部位)和CF3(2. 0 mol/L氯化钠溶液洗脱部位),测定总多糖和总蛋白含量;将不同浓度的上述组分作用于人宫颈癌Hela细胞,以细胞培养液作空白对照,采用四氮唑盐(MTT)法检测Hela细胞增殖程度。结果 4组分总糖含量均大于70%,总蛋白含量均大于0. 87%;与空白对照比较,62. 5,125,250,500,1 000μg/m L CFW,500,1 000μg/m L CF1,1 000μg/m L CF2和CF3的吸光度值显著降低(P <0. 05或P <0. 01)。结论青果CFW组分可显著抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖。

花旗松素对人宫颈癌Hela细胞形态及DNA片段的影响

目的:探讨花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的影响及其机理。方法:通过倒置显微镜观察花旗松素对人宫颈癌HeLa细胞形态的影响;通过花旗松素诱导肿瘤细胞DNA特征梯度实验,观察其对DNA片段的影响。结果:大部分细胞逐渐形成凋亡小体,且花旗松素能诱导Hela细胞产生200 bp的DNA片段,表明花旗松素诱导Hela细胞死亡与细胞凋亡有关。结论:花旗松素诱导HeLa细胞死亡与细胞凋亡相关。

蛴螬粗提物对人宫颈癌Hela细胞抑制作用的形态学观察

目的研究蛴螬粗提物对体外培养的人宫颈癌Hela细胞株抑制作用引起的形态学改变。方法应用MTT法、HE染色、油红O染色、透射电镜的方法检测蛴螬粗提取物对体外培养的人宫颈癌Hela细胞抑制作用的影响及观察细胞的形态学改变。结果蛴螬3种粗提取物中以石油醚粗提物增殖抑制率最高。蛴螬石油醚粗提物对人宫颈癌Hela细胞株的增殖抑制作用呈剂量依赖性(P<0.01),同时呈时间依赖性(P<0.01)。倒置显微镜下蛴螬石油醚粗提物50μg/m l作用后早期细胞出现凋亡形态学变化;作用晚期细胞发生膜破裂坏死。HE染色和透射电镜观察细胞出现典型凋亡形态变化。油红O染色和透射电镜观察到细胞发生脂肪变性。结论蛴螬粗提物对人宫颈癌Hela细胞株具有抑制增殖及诱导凋亡作用。蛴螬3种粗提物中以石油醚粗提物抑制增殖作用效果最佳。蛴螬石油醚粗提物对Hela细胞抑制增殖作用在粗提物50μg/m l作用48 h之前主要以诱导凋亡为主,在其后时间以诱发肿瘤细胞脂肪变性和坏死为主。

白杨素和它的四乙基二磷酸酯对人宫颈癌Hela细胞增殖和核基质蛋白影响的研究

探讨白杨素和它的四乙基二磷酸酯对人宫颈癌细胞的增殖、分化和核基质蛋白的影响。用终浓度为10μmol/L的白杨素(chrysin,CR)和四乙基白杨素二磷酸酯(tetraethyl bis-phosphoric ester of chrysin,CP)分别处理人人宫颈癌Hela细胞,记录细胞生长数目,进行增殖分化型细胞染色,测定软琼脂集落形成率,应用SDS-PAGE技术分析细胞核基质蛋白成分的变化。CR/CP能明显抑制Hela细胞的增殖,处理组与对照组之间差异有显著性(P<0.05);处理组与对照组比较增殖型细胞减少,分化型细胞数增加,双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制,对照组集落普遍比药物组集落大,且单个集落中细胞数目多(P<0.05);通过Quantity One软件分析,实验组(CR组与CP组)与对照组(C组)比较,相对分子质量70 0006、8 000、13 000为增加的条带,14 000、17 000、18 000为增强的条带,58 000、43 000是减弱的条带。两实验组相比,以CP组变化显著。CR和CP对Hela细胞具有增殖抑制和诱导分化作用。同时还可以诱导Hela细胞核基质蛋白成分改变,这可能对肿瘤细胞基因表达调控、分化及凋亡起重要作用。

珠母贝糖胺聚糖PG-Ⅱ诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的:探讨珠母贝糖胺聚糖PG-II诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡,从而抑制其增殖。方法:MTT法检测珠母贝糖胺聚糖PG-II对人宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用。倒置显微镜、荧光显微镜观察HeLa细胞凋亡的形态学特征,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂片段,流式细胞仪定量检测细胞凋亡的百分率及对其细胞周期的影响。结果:MTT法显示PG-II可抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖。倒置显微镜和荧光显微镜形态学观察可见HeLa细胞凋亡的形态明显变化。琼脂糖凝胶电泳显示PG-II作用HeLa细胞24h,出现分子质量为200bp到2000bp不等的细胞凋亡的特征性DNA梯状条带。流式细胞术测试表明:PG-II可使HeLa细胞阻滞于G1期,剂量为100mg/L作用24h阻滞作用最明显,凋亡指数为42.6%。结论:珠母贝糖胺聚糖PG-II可能通过诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡而抑制其增殖。

土贝母苷甲在人宫颈癌HeLa细胞内对线粒体的影响

目的:探讨线粒体在土贝母苷甲(TBMS1)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中的作用。方法:流式细胞仪测定线粒体膜电位(ΔΨm)、琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂片和蛋白质免疫印迹法检测细胞色素c(cyt c)的表达。结果:TBMS1引起人宫颈癌HeLa细胞凋亡,使得ΔΨm下降,释放入胞质的cyt c增加,并具有时间、剂量依赖性;TBMS1还可直接作用于分离的鼠肝脏线粒体,使之释放cyt c;TBMS1的这种作用部分能够被线粒体膜保护剂环孢菌素A(CsA)阻断。结论:线粒体途径是TBMS1诱导的HeLa细胞凋亡的途径之一。

熊果酸对人宫颈癌hela细胞体外抗肿瘤作用的形态学观察

目的:观察熊果酸对人宫颈癌hela细胞抗肿瘤作用的形态学变化,探讨熊果酸抑制人宫颈癌hela细胞生长的可能作用机制。方法:在培养基中加入不同浓度的DMSO作用24h,用hochest 33342荧光染料染色,通过细胞死亡率判断DMSO的使用浓度;人宫颈癌hela细胞传代的同时加入熊果酸,混匀,贴壁培养细胞24h,采用分别采用hochest 33342、DAPI标记细胞,观察肿瘤细胞形态;人宫颈癌hela细胞传代后,第2天换液的同时再加入熊果酸,培养24h,采用hochest 33342、DAPI标记细胞,观察肿瘤细胞形态。结果:DMSO最大浓度为1.0%;与正常肿瘤细胞组比较,两种不同加药方式的熊果酸都能影响人宫颈癌hela细胞的生长状态,细胞形态小,核膜皱缩,核变形,凋亡形态细胞增多。结论:熊果酸不仅明显抑制人宫颈癌hela细胞的生长,而且人宫颈癌hela细胞传代的同时加入熊果酸的方式,对肿瘤细胞生长的影响更明显,推测熊果酸可能存在细胞毒性。

STAT3反义寡核苷酸对人宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭的影响

目的观察转染信号转导与转录激活因子3(STAT3)的反义寡核苷酸对人宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭功能的影响。方法针对人STAT3的基因序列设计并合成反义寡核苷酸,用阳离子脂质体介导转染人宫颈癌He-La细胞。应用RT-PCR和Western blot法分别检测STAT3基因mRNA及蛋白表达水平,软琼脂集落培养检测细胞的定植功能,体外侵袭实验检测HeLa细胞的侵袭能力。结果转染STAT3反义寡核苷酸HeLa细胞(HeLaSTAT3-ASODN)STAT3基因的mRNA和蛋白表达水平均明显低于对照组(HeLaSTAT3-SODN)和正义组(HeLa),P<0.05;各组细胞在软琼脂中形成的克隆数和穿透Matrigel膜的细胞数分别为:HeLa组(74.31±7.62)、(44.85±6.26)个,HeLaSTAT3-SODN组(71.57±6.92)、(45.46±6.79)个,HeLaSTAT3-ASODN组(45.18±7.69)、(22.41±5.98)个。与HeLa组、HeLaSTAT3-SODN组比较,HeLaSTAT3-ASODN组克隆形成数和透膜细胞数明显减少(P<0.05)。结论 STAT3基因特异反义寡核苷酸可通过下调STAT3基因表达抑制细胞的定植和侵袭。

γ-分泌酶抑制剂DAPT对人宫颈癌Hela细胞体外增殖的影响

目的探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT对人宫颈癌Hela细胞系增殖和凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞;MTT法检测不同浓度DAPT(1.0、5.0、10.0μmol/L)对Hela细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析不同浓度DAPT对Hela细胞凋亡率及细胞周期分布的影响。结果 3种浓度的DAPT均能显著抑制Hela细胞的增殖,抑制率分别为22.847%、32.492%、46.565%,作用呈明显剂量依赖性;不同浓度的DAPT能使Hela细胞凋亡率明显增加,分别为,且使S期、G2/M期细胞比例减少,G0/G1期细胞比例显著增加,作用呈剂量依赖性。结论 DAPT对体外培养的人宫颈癌Hela细胞具有抑制增殖、调节细胞周期、诱导凋亡的作用。

大黄素对人宫颈癌Hela细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达的影响

1材料大黄素：美国Sigma公司。人宫颈癌细胞Hela：ATCC。Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3和β-actin一抗：美国CellSig-naling Technology公司;荧光标记的二抗：Invitrogen公司。电泳仪和电转仪：美国Bio-Rad公司;扫膜仪：购自美国LI-COR公司。2方法人宫颈癌细胞Hela培养和传代：于含10%胎牛血清、100μg/ml链霉素和100U/ml青霉素的DMEM中培养,细胞在相对湿度为95%、

白英生物碱对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用

目的探讨白英生物碱(STA)对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用。方法提取STA并制备4.0、8.0、16.0mg/L等3种浓度的STA反应体系,分别定义为反应体系A、B、C,设置空白对照,培养24h后通过MTT法检测各反应体系光密度(OD)值和对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制效果。结果不同浓度STA反应体系的OD值比较,差异均有统计学意义(P<0.05);反应体系C的OD值显著低于空白对照、反应体系A及B,差异均有统计学意义(P<0.05);反应体系B的OD值显著低于空白对照和反应体系A,差异均有统计学意义(P<0.05);反应体系A的OD值显著低于空白对照,差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度STA反应体系的细胞生长抑制率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);反应体系C的细胞生长抑制率显著高于反应体系A和B,差异均有统计学意义(P<0.05);反应体系B的细胞生长抑制率显著高于反应体系A,差异有统计学意义(P<0.05)。结论STA对人宫颈癌HeLa细胞增殖有一定的抑制作用。