重组人对氧磷酶1K192亚型对毒死蜱所致SD大鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨重组人对氧磷酶1K192亚型(r Hu PON1K192)对毒死蜱中毒导致的大鼠急性肝脏损伤的保护作用。方法将健康成年SD大鼠50只随机分为正常组(A组)、r Hu PON1K192对照组(B组)、毒死蜱染毒组(C组)、低剂量r Hu PON1K192预处理组(D组)、高剂量r Hu PON1K192预处理组(E组),每组10只。C、D、E组均给予毒死蜱灌胃,D组在灌毒30 min前予以r Hu PON1K192 4 500 U/kg尾静脉注射,E组予以9 000 U/kg r Hu PON1K192尾静脉注射,A组予以与毒死蜱同体积生理盐水灌胃,B组则单纯予以r Hu PON1K192尾静脉注射。8 h后取血,采用速率法检测谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)的活性,采用ELISA法检测苹果酸脱氢酶(MDH)及谷氨酸脱氢酶(GLDH)的活性;取肝脏组织行免疫组化检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达,采用光镜、透射电镜检查超微结构的改变。比较各组之间相关指标的差异。结果比较A组与B组各项指标,差异均无统计学意义(P>0.05)。C组肝功能指标ALT、AST、GLDH及MDH较A组均有明显升高(P<0.01),HIF-1α呈重度表达,电镜与光镜下肝细胞膜、线粒体等出现明显损伤。D组及E组上述指标较A组轻度升高,E组改变程度较D组稍轻,2组各指标相比无统计学差异(P>0.05)。D组及E组上述指标改变较C组轻,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 r Hu PON1K192对毒死蜱中毒肝损伤具有保护作用。

巴斯德毕赤酵母表达重组人对氧磷酶1的发酵条件优化

本研究采用响应面方法优化重组人对氧磷酶1(Recombinant Human Paraoxonase 1,rhPON1)在毕赤酵母中的表达。首先通过研究甲醇浓度、p H、培养基装液量3个单因素对rhPON1表达的影响,然后以rhPON1单位体积酶活力为响应值进行响应面分析。结果显示:甲醇浓度1.42%,p H值5.91,培养基装液量9.39%是最优发酵条件。在此优化条件下,rhPON1的单位体积酶活力预测值为0.737U/mL,与验证值(0.735U/mL)基本一致。人对氧磷酶1可以水解多种有机磷化合物,被认为是一种有机磷农药中毒的解毒剂。

人对氧磷酶1在巴斯德毕赤酵母中的表达与纯化

人对氧磷酶1(Human Paraoxonase 1,hPON1)是人体血液中的一种非专一性酯酶,可以水解多种有机磷化合物,被认为是一种有机磷农药中毒的解毒剂。为了得到较纯的具有活性的hPON1,本文采用巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris表达系统,对hPON1进行胞内表达。hPON1基因经过密码子优化后克隆至pPICZA表达载体上,构建得到pPICZA-PON1重组表达质粒,经线性化后转化至巴斯德毕赤酵母X33菌株中,筛选得到阳性重组菌株。将重组菌株进行摇瓶发酵120 h,酶活达0.15 U/mL。收集发酵液并细胞裂解后,用Ni-NTA螯合亲和层析的方法进行纯化,得到纯化的hPON1,SDS-PAGE结果显示表达产物的大小约37 ku,与预期的蛋白分子量相符。表达的重组hPON1的最适反应温度为45℃,最适pH为9.0。以上结果表明,本研究成功地表达并得到较纯的有活性的hPON1蛋白。

全真一气汤通过PON1抑制COPD大鼠气道炎症-氧化应激反应的机理研究

目的探讨全真一气汤抑制慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织氧化应激和气道炎症的机制。方法随机将18只大鼠分成两组,中药干预治疗组、模型组各9只。利用LPS联合烟熏构建COPD大鼠模型,中药干预治疗组予全真一气汤灌服,模型组予生理盐水灌服;RT-PCR检测大鼠肺组织对氧磷酶-1(PON1)mRNA水平,Western blot检测大鼠肺组织中PON1蛋白表达水平。结果中药干预治疗组较模型组PON1 mRNA水平明显上调,其表达丰度分别为后者的5.353倍;中药组较模型组PON1蛋白表达增多。结论全真一气汤能上调PON1基因及蛋白表达,这是其抑制COPD患者气道炎症的可能机制之一。

小鼠骨骼肌电转移hPDN1Q基因可以减轻CCl_4诱导的急性肝损伤

目的研究人Q型对氧磷酶1(human paraoxonase 1 Q,hPON1Q)转基因表达对小鼠四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_4)诱导急性肝损伤的缓解效果,为防治肝脏疾病寻找新的途径。方法小鼠骨骼肌直接注射含hPON1Q的真核表达质粒裸DNA并用电刺激介导表达,测量血清芳香酯酶的活性变化显示hPON1Q转基因表达效果,并使用血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)为指标及肝组织病理切片检测肝损伤的程度。结果hPON1Q转基因表达小鼠血清中芳香酯酶活性提高约50%,并可持续到16d以后。使用PON1裸DNA电刺激治疗组比对照组小鼠在用CCl_4诱导24h后血清芳香酯酶活性高60%,两种血清转氨酶指标及肝组织切片的病理学分析表明肝脏损伤程度有明显的减轻。结论电刺激介导的重组人PON1Q基因裸DNA在小鼠体内的表达对CCl_4诱导的肝损伤具有显著的防护作用。