钙激活性钾通道是人小肠上皮细胞的容积调节性通道(英文)

目的 :研究细胞容积调节机制 ,探讨人类小肠上皮细胞调节性容积减小 (RVD)过程中离子通道的作用及其种类。方法 :膜片钳全细胞记录和单通道记录法记录培养的人类小肠上皮细胞 RVD过程中电流的变化 ,细胞容积测定法观察 RVD过程中特异性钙激活性钾通道阻断剂 (clotrimazole)的作用。结果 :全细胞记录法证实细胞 RVD过程中 K+通道和 Cl-通道电流同时被激活 ,该 K+通道电流具有明显的钙依赖性并可被 clotrim azole阻断。单通道记录法进一步证实 RVD过程中激活的 K+通道为 Interm ediate- conductance钙激活性钾通道。结论 :人类小肠上皮细胞在低渗溶液作用下具有 RVD过程 ,钙激活性钾通道在 RVD过程中具有十分重要的作用。

在人小肠上皮细胞膜上检出钙激活性钾通道(英文)

目的 :研究人类小肠上皮细胞 (Intestine40 7cell lines)膜上钙激活性钾通道的分子生物学特征及其电生理学特性。方法 :用 RT- PCR方法检测培养的人类小肠上皮细胞膜上钙激活性钾通道的表达形式 ,用膜片钳的全细胞记录及单通道记录法探讨了该通道的电生理学特点。结果 :RT- PCR证实该细胞系有 interm ediate- conductance(IK)钙激活性钾通道表达 ,而没有 large- conductance(BK)和 small- conductance(SK)钙激活性钾通道的表达。电生理学研究表明 ,Ionom ycin引导的全细胞电流显示该钙激活性钾电流具有内向整流性并可被特异度 IK钙激活性钾通道阻断剂 clotrimazole所抑制 ,但特异度 SK钙激活性钾通道阻断剂 apam in对该电流无明显抑制作用。单通道记录法证实该通道的电导为 30± 2 p S,通道活性对细胞内 Ca2 +浓度有明显依赖性。结论 :分子生物学和电生理研究证实了人类小肠上皮细胞膜上有 IK钙激活性钾通道 。

环状RNA hsa_circZDHHC21_004对60Coγ射线照射后人小肠上皮细胞HIEC-6增殖能力的影响

目的探讨环状RNA hsa_circZDHHC21_004对电离辐射照射后人小肠上皮细胞HIEC-6增殖能力的影响。方法60Coγ射线照射人小肠上皮细胞HIEC-6,吸收剂量为0、5、10和15 Gy,剂量率为1 Gy/min。检测HIEC-6中hsa_circZDHHC21_004的表达水平随照射剂量的变化趋势。构建hsa_circZDHHC21_004稳定敲低细胞系,通过CCK-8实验和克隆形成实验,检测hsa_circZDHHC21_004表达水平的变化对辐射照射后HIEC-6增殖能力的影响。结果HIEC-6中hsa_circZDHHC21_004表达水平随辐射剂量的增高而增高(1.00±0.24、1.34±0.28、1.85±0.31、2.80±0.64,F=10.86,P=0.008)。10和15 Gy照射后,hsa_circZDHHC21_004的表达水平与0 Gy之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。CCK-8结果显示,hsa_circZDHHC21_004稳定敲低细胞的增殖在照射10 Gy后24、48、72 h均高于对照细胞的增殖,且差异具有统计学意义(t=-6.25、-5.83、-7.75,P<0.001)。Hsa_circZDHHC21_004稳定敲低细胞经2和5 Gy照射后,其克隆形成率均高于对照细胞的克隆形成率,且差异均有统计学意义(t=-7.45、-8.83,P<0.01)。结论电离辐射可上调人小肠上皮细胞HIEC-6中hsa_circZDHHC21_004表达水平。Hsa_circZDHHC21_004影响了电离辐射照射后HIEC-6的增殖。

CpG-ODN对辐射所致人小肠隐窝上皮细胞微核形成的影响

研究了CpG-ODN(CpG oligonucleotides)对非免疫细胞人小肠隐窝上皮细胞(HIEC)照射后微核变化的影响。采用MTT法检测不同浓度的CpG-ODN对HIEC的细胞毒性,检测CpG-ODN预处理后的HIEC细胞在不同剂量辐射后微核率和微核细胞率的变化。结果表明,CpG-ODN在0.00-1.25μmol/L浓度范围内对细胞的存活率没有显著影响,CpG-ODN能显著降低微核率和微核细胞率。实验结果提示CpG-ODN对HIEC有较小的毒性且能减少细胞辐照后的微核形成,具有一定的辐射保护作用。

9-硝基喜树碱在Caco-2细胞模型中的体外摄取、转运及外排动力学(摘要)

目的研究9-硝基喜树碱(9-NC)的细胞摄取、转运及外排特性。方法一种体外培养的人小肠上皮细胞模型Caco-2应用于9-NC的小肠上皮细胞的摄取、跨膜转运及外排动力学研究。评价了时间、温度、pH，P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)抑制剂对细胞摄取的影响。采用HPLC测定药物含量。结果9-NC以被动扩散为主要方式被细胞摄取和转运。药物的摄取与时间呈正相关，与温度、pH呈负相关。

霍乱弧菌毒力基因zot的克隆表达及生物活性

目的对霍乱弧菌zot毒力基因进行表达并研究重组蛋白的生物活性。方法从霍乱弧菌(Vibrio cholerae)MO45中克隆zot的全基因序列,构建其原核表达质粒pET-32a(+)-zot并转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中,通过诱导表达和亲和层析纯化重组蛋白,研究zot表达蛋白对人小肠上皮细胞的凋亡作用。结果纯化蛋白的浓度为0.324mg/mL,经Western blot验证表达蛋白为目的蛋白,用流式细胞仪检测经表达蛋白作用的人小肠上皮细胞显示重组zot蛋白能引起人小肠上皮细胞的早期凋亡。结论成功克隆表达了霍乱弧菌毒力基因zot,重组蛋白能引起人小肠上皮细胞的早期凋亡。