HIV-1糖蛋白gp120激发人小胶质细胞钙内流效应和ERK磷酸化

目的:探讨HIV-1糖蛋白gp120对人小胶质细胞钙离子内流和ERK磷酸化的作用及其机制。方法:用钙离子探针Fluo-4标记粘附在盖玻片上的人小胶质细胞,运用共聚焦显微镜以荧光强度为指标实时观察各种条件下的细胞内钙离子水平的变化;用gp120处理并用anti-gp120-FITC进行染色,运用共聚焦显微镜术和流式细胞术分析人小胶质细胞与gp120结合情况;用抗磷酸化ERK抗体免疫荧光方法进行染色,运用共聚焦显微镜术和流式细胞术进行ERK磷酸化水平分析。结果:共聚焦显微镜检测结果显示HIV-1糖蛋白gp120能够激发人小胶质细胞钙离子内流效应;共聚焦显微镜和流式细胞仪分析结果显示gp120可以与人小胶质细胞结合;共聚焦显微镜和流式细胞仪分析结果显示gp120刺激可增加人小胶质细胞ERK磷酸化。结论:HIV-1糖蛋白gp120能在人小胶质细胞激发钙离子内流并且增加胞内ERK的磷酸化,从而导致了小胶质细胞的活化,这一效应提示,在HIV-1相关性脑炎中,gp120可能参与了某些发病机制。

miR-146a对LPS/Aβ_(1-42)诱导的人小胶质细胞系HMC3炎症反应及细胞凋亡调节作用观察

目的观察转染miR-146a对脂多糖(LPS)或β-淀粉样多肽1-42(Aβ_(1-42))诱导的人小胶质细胞系HMC3炎症反应及凋亡的调节作用。方法将HMC3细胞分为LPS诱导组和Aβ_(1-42)诱导组,各组下设3个小组。将LPS诱导组分为A、B、C组,A组转染10 nmol/L的阴性对照错义链(mimics NC);B组转染10 nmol/L的mimicis NC,继续培养24 h后,加入100 ng/mL的LPS诱导72 h;C组转染10 nmol/L的miR-146a激动剂模拟物(miR-146a mimics),继续培养24 h后,加入100 ng/mL的LPS诱导72 h。将Aβ_(1-42)诱导组分为a、b、c组,a组转染10 nmol/L的mimicis NC;b组转染10 nmol/L的mimicis NC,继续培养24 h后,加入5μmol/L的Aβ_(1-42)诱导12 h;c组转染10 nmol/L的miR-146a mimi⁃cis,继续培养24 h后,加入5μmol/L的Aβ_(1-42)诱导12 h。取各组细胞,采用ELISA法检测各组细胞中炎症因子白介素-6(IL-6),使用流式细胞仪测算各组细胞凋亡率。结果A、B、C组细胞中炎症因子IL-6表达水平分别为(1.73±0.04)、(15.80±0.58)、(10.73±0.43)ng/mL,其中B组与A、C组相比,P均<0.05。a、b、c组细胞中IL-6表达水平分别为(2.85±0.14)、(4.32±0.39)、(3.01±0.25)ng/mL,其中b组与a、c组相比,P均<0.05。A、B、C组细胞凋亡率分别为7.90%±0.80%、13.00%±0.64%、9.47%±0.35%,其中B组与A、C组相比,P均<0.05。a、b、c组细胞凋亡率分别为2.00%±0.60%、5.70%±0.49%、2.60%±0.70%,其中b组与a、c组相比,P均<0.05。结论转染miR-146a对LPS或Aβ_(1-42)诱导的HMC3炎症反应具有调节作用,并可降低其凋亡率。

小胶质细胞培养上清液对鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:研究未活化和活化态人小胶质细胞系CHME-5培养上清液对鼻咽癌细胞CNE-2迁移、侵袭能力的影响。方法:采用1μg/mL LPS活化人小胶质细胞系CHME-5,收集未活化和LPS活化的CHME-5培养上清液。分为对照组(无血清培养基)、45%上清组、90%上清组、LPS组(LPS干预的小胶质细胞上清)、45%LPS上清组、90%LPS上清组。使用划痕实验和Transwell小室建立鼻咽癌细胞CNE-2的迁移模型,观察不同浓度的未活化/活化小胶质细胞培养上清液对鼻咽癌细胞迁移能力的影响;使用Transwell小室建立鼻咽癌细胞CNE-2的侵袭模型,用结晶紫染色观察不同浓度的未活化/活化小胶质细胞培养上清液对鼻咽癌细胞侵袭能力的影响。结果:低浓度(45%)和高浓度(90%)未活化/活化的小胶质细胞培养上清液均促进鼻咽癌细胞迁移和侵袭。结论:无论小胶质细胞是否活化,其培养上清液均促进鼻咽癌细胞的迁移和侵袭。

一种从新鲜脑胶质瘤标本中分离小胶质细胞的改良方法

目的建立一种快速有效从脑胶质瘤组织中分离小胶质细胞的改良方法。方法采用密度梯度离心法联合磁珠分选法从脑胶质瘤组织中分离小胶质细胞。用流式细胞术、Westernblot和细胞免疫荧光检测细胞纯度，流式检测免疫表型，趋化及吞噬实验检测其生物学功能；对从不同级别胶质瘤组织分离的小胶质细胞产量进行定量分析。结果收获细胞具有小胶质细胞典型形态及Ibal染色阳性，纯度可达（95．1±4．2）％；流式细胞术检测显示其表达CDllb、HLA—DR等，并对ATP的趋化作用呈浓度依赖性，且在体外具有良好的吞噬乳胶微球（1atexbeads）的功能。此外，每克胶质瘤组织分离小胶质细胞细胞产量：低级别组（／I=4），（4．0±0．5）×10^5；高级别组（n=8），（4．3±0．4）×10^5，两组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论利用改良的分离小胶质细胞方法能从新鲜脑胶质瘤组织中快速获得大量高纯度小胶质细胞。