血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原N端肽和Ⅳ型胶原辅助诊断原发性肝癌的临床意义分析

目的 分析血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP)和Ⅳ型胶原(CⅣ)辅助诊断原发性肝癌的可行性和临床价值。方法 选取82例原发性肝癌患者、33例肝硬化患者及127例健康对照者作为研究对象,分别作为原发性肝癌组、肝硬化组及健康对照组。检测并比较三组血清HA、LN、PⅢNP、CⅣ水平;分析血清HA、LN、PⅢNP、CⅣ的受试者工作特征曲线(ROC曲线)及曲线下面积(AUC);分析血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ的诊断界值及诊断效能。结果 原发性肝癌组血清HA 80.32(42.18, 165.50)ng/ml、LN 42.91(31.47, 74.91)ng/ml、PⅢNP 16.15(10.93, 31.33)ng/ml和CⅣ126.00(73.16, 236.60)ng/ml均显著高于健康对照组的26.83(17.25, 40.02)、30.46(25.02, 40.95)、6.38(4.93, 7.86)、48.49(40.24, 57.57)ng/ml(P<0.05);原发性肝癌组血清HA、LN、PⅢNP水平显著低于肝硬化组(P<0.05),原发性肝癌组血清CⅣ水平与肝硬化组比较无统计学差异(P>0.05);肝硬化组血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ水平均显著高于健康对照组(P<0.05)。ROC曲线及AUC分析血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ的诊断效能显示:血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ诊断原发性肝癌的AUC分别为0.8453、0.7195、0.9310和0.8842;血清HA、LN和PⅢNP鉴别原发性肝癌和肝硬化的AUC分别为0.7749、0.6208和0.6384。根据ROC曲线计算原发性肝癌和肝硬化的诊断界值,血清HA+LN+PⅢNP+CⅣ诊断原发性肝癌的灵敏度为92.7%。结论 血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ可用于原发性肝癌的辅助诊断,具有重要的临床价值。

绝经后女性盆底脏器脱垂患者阴道前壁组织中层粘连蛋白、胶原蛋白及雌激素受体的表达

目的研究绝经后女性盆底脏器脱垂患者阴道前壁组织中层粘连蛋白(LN)、胶原蛋白及雌激素受体(ER)的表达。方法选择2016年1月至2018年12月于上海市嘉定区妇幼保健院因绝经后盆底脏器脱垂行阴式全子宫切除术+阴道壁修补术的40例患者作为观察组;另选择同期因其他子宫良性病变行阴式子宫全切术的40例患者作为对照组。术前采用酶联免疫吸附试验检测2组患者血清LN水平;术中取2组患者阴道前壁组织,采用荧光定量聚合酶链反应法检测LN mRNA表达,采用免疫组织化学法检测LN、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ及ER表达。结果术前,观察组与对照组患者血清LN水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。观察组患者阴道前壁组织中LN mRNA的相对表达量显著低于对照组(P<0.05)。观察组和对照组患者阴道前壁组织中LN阳性表达率分别为12.5%(5/40)、27.5%(11/40),观察组患者阴道前壁组织中LN阳性表达率显著低于对照组(χ2=45.262,P<0.01)。观察组患者阴道前壁组织中胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ及ER表达评分均显著低于对照组(P<0.05)。结论LN、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ及ER在绝经后女性盆底脏器脱垂患者阴道前壁组织中的表达降低,推测绝经后女性盆底脏器脱垂与以上因素有关。

MMP-9和层粘连蛋白受体在乳腺癌组织中的表达及其与转移和预后的关系

背景与目的:以往对乳腺癌细胞外基质与肿瘤转移及患者预后之间关系的研究尚少,且结论不一。本研究探讨乳腺癌组织中基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)及层粘连蛋白受体(lamininreceptor,LM-R)表达与肿瘤转移及患者预后的关系。方法:应用免疫组化方法检测80例乳腺癌组织及10例乳腺增生病组织中MMP-9、LM-R的表达,并用计算机图像分析系统测定表达的吸光度值。采用t检验、方差分析及相关分析方法分析它们与肿瘤转移和患者预后的关系。结果:乳腺癌组织中MMP-9表达显著高于乳腺增生病(t=8.87,P<0.05);在乳腺增生病组织中,LM-R表达于基底膜及部分腺泡和导管的腔缘,在乳腺癌组织中表达于细胞质及胞膜;17例癌间质血管基底膜有LM-R表达的癌组织中,LM-R表达高于血管基底膜无LM-R表达组(t=2.02,P<0.05);LM-R表达与组织学分级有关,分化低者,表达水平高(F=3.27,P<0.05);MMP-9及LM-R表达均与淋巴结转移有关,它们在有3个以上淋巴结转移组的表达低于3个以下及无转移组(tMMP-9=3.42,tLM-R=4.31,P<0.05),原发灶与转移灶的表达呈正相关(rMMP-9=0.654,rLM-R=0.755,P<0.001);MMP-9与孕激素受体负相关性(r=-0.363,P<0.05);MMP-9与LM-R之间呈正相关(r=0.503,P<0.01)。

胆管癌细胞层粘连蛋白受体表达下调对蛋白水解酶MMP-2、MMP-9 mRNA表达的影响

研究层粘连蛋白受体 (lamininreceptor,LNR)反义寡核苷酸硫代修饰片段 (AS OD)对人胆管癌QBC939细胞MMP 2、MMP 9基因表达的调节。应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法分析 12 μmol/L浓度的LNRAS OD在作用 72h后对QBC939细胞MMP 2、MMP 9mRNA表达水平的影响。结果显示 ,LNRAS OD能明显抑制人胆管癌细胞表达MMP 2、MMP 9的作用 ,与正常对照相比 ,其MMP 2、MMP 9mRNA相对丰度分别下降了 33 2 %和 2 3 9% (P <0 0 5 )。研究表明 ,LNRAS OD是胆管癌细胞表达MMP 2和MMP 9基因的调节剂 ,能抑制胆管癌细胞MMP 2、MMP 9基因的表达。

67kD层粘连蛋白受体的克隆、表达及其对肝癌细胞侵袭能力的影响

探讨细胞膜表面 6 7kD层粘连蛋白受体 (6 7kDlamininreceptor ,6 7LR)在肝癌细胞侵袭转移中的作用 ,从肝癌细胞中提取RNA ,通过RT PCR扩增 6 7LR的前体——— 37kD层粘连蛋白受体前体(37kDlamininreceptorprecursor,37LRP)基因并定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1 myc His(- )A ,采用脂质体将重组质粒转染到HepG2肝癌细胞中 ,通过G4 1 8筛选和RT PCR、流式细胞术鉴定 ,获得了细胞膜表面 6 7LR高表达 (阳性率为 6 9.2 % )和低表达 (阳性率为 1 1 .7% )的细胞克隆 ,采用体外细胞侵袭实验测定不同细胞的侵袭能力 ,发现膜表面 6 7LR高表达的细胞侵袭能力明显高于低表达及不表达细胞 ,说明 6

肝癌细胞67kDa层粘连蛋白受体的表达

背景与目的:本实验室最近发现人肝癌细胞SMMC-7721表达的67kDa层粘连蛋白受体(67kDaLamininreceptor,67LR)与层粘连蛋白的结合能力明显高于正常肝细胞L-02表达的67LR,而67LR在肝癌细胞和正常肝细胞中的表达水平尚不清楚。本研究旨在探讨67LR在肝癌细胞中的表达,及其与层粘连蛋白结合能力的关系。方法:以人肝癌细胞SMMC-7721、HepG2和正常肝细胞L-02为材料,采用131I标记的层粘连蛋白测定其与细胞的结合能力;采用流式细胞术和RT-PCR分析67LR蛋白和mRNA的表达水平。结果:(1)相同条件下SMMC-7721、HepG2细胞与层粘连蛋白特异结合量分别为(17.54±0.49)ng/105cell、(11.18±0.53)ng/105cell,而L-02细胞的特异结合量为(8.36±0.48)ng/105cell,表明肝癌细胞与层粘连蛋白的结合能力明显高于正常肝细胞(P<0.01);(2)流式细胞术分析,SMMC-7721细胞的67LR阳性表达率为34.7%,L-02细胞的67LR阳性表达率为55.3%,而HepG2细胞则几乎不表达67LR;(3)RT-PCR产物进行半定量分析发现,两株肝癌细胞的67LRmRNA表达水平明显高于L-02细胞。结论:肝癌细胞与层粘连蛋白的结合能力明显高于正常肝细胞L-02,而细胞膜表面的67LR水平却低于L-02细胞,提示SMMC-7721细胞67LR的亲和力可能高于L-02细胞,而且还涉及其它层粘连蛋白受体。

层粘连蛋白及其受体在人正常绒毛、葡萄胎组织中的表达及意义

目的 探讨层粘连蛋白 (LN) ,层粘连蛋白受体 (LN R)与葡萄胎发生的关系。方法 采用免疫组织化学方法 ,观察正常人胚胎早期绒毛、葡萄胎组织中LN、LN R的表达情况。结果 LN在正常绒毛组织、葡萄胎组织基底膜着色呈连续线状 ,其表达与妊娠周数有关 ,随着妊娠周数的增加LN的表达呈下降趋势。正常绒毛组织、葡萄胎组织中LN R的表达位于上皮组织细胞膜上 ,呈阳性包绕状 ,且在偏离基底膜细胞表面着色较深。结论 推测LN R在细胞膜表面的分布可反映细胞的生长、浸润的方向 ,葡萄胎组织中LN、LN R的表达在研究葡萄胎发病机制上有一定的参考价值。

层粘连蛋白受体单克隆抗体对人肺癌细胞形态、粘着及铺展的影响

应用体外细胞培养，观察了层粘连蛋白受体单克隆抗体（ＭｃＢ＿１）加入培养液或预处理人肺巨细胞癌（ＰＧ）和肺腺癌（ＰＡａ）后某些生物学行为的改变。在体外ＭｃＢ＿１预孵育可抑制ＰＧ和ＰＡａ在层粘连蛋白基质上的粘着和铺展。培养液中加入ＭｃＢ＿１经扫描电镜观察，ＭｃＢ＿１明显改变该两种细胞的表面形态。说明层粘连蛋白受体在肿瘤浸润和转移中可能起重要作用。层粘连蛋白受体单克隆抗体在阻断肿瘤转移的发生上可能具有应用价值。

层粘连蛋白受体及微血管密度与甲状腺癌转移的关系

目的 探讨微血管密度 (MVD)层粘连蛋白受体(L N- R)表达水平及其与甲状腺癌转移的关系。方法 采用免疫组织化学 SP法检测 33例原发性甲状腺癌中 L N - R的表达及 MVD计数。结果 33例原发性甲状腺癌中 L N- R表达阳性者 19例 ,表达率为 5 7.6 %。在有转移的 14例甲状腺癌中 12例 L N - R表达阳性 ,表达率为 85 .7%。在无转移的19例中 ,L N- R表达阳性者 7例 ,表达率为 36 .8%。在有转移的甲状腺癌中 L N- R阳性表达率明显高于无转移的甲状腺癌 (P<0 .0 0 1)。MVD计数在有淋巴结转移的甲状腺癌中为 88.6 9± 18.2 6 ,在无转移的甲状腺癌中为 31.18± 14.42 ,后者 MVD计数明显低于前者 (P<0 .0 0 1)。在无淋巴结转移的甲状腺癌中 L N- R表达阳性者的 MVD计数为 43.16±10 .71,明显高于 L N- R表达阴性者 (P<0 .0 5 )。结论 L N- R表达及 MVD计数与甲状腺癌的侵袭转移有关 。

层粘连蛋白及其受体在妊娠滋养细胞肿瘤中的表达及意义

目的 了解葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌组织中层粘连蛋白(L N )及其受体(L N - R)的表达,并探讨L N、L N - R与妊娠滋养细胞肿瘤(GTT)侵袭和转移的关系。方法 以4 4例恶性GTT为研究组,2 4例葡萄胎为对照组,采用免疫组化方法对两组患者首次清宫标本组织进行L N,L N- R检测。结果 L N在绒毛膜癌组织中临床分期越晚,表达率越高,其表达与绒毛膜癌细胞的浸润转移以及恶性程度有一定关系。结论 化疗对L N、L N- R在妊娠滋养细胞肿瘤中的表达有一定的影响,推测L N和L N- R在妊娠滋养细胞肿瘤抗侵袭和转移治疗方面具有潜在的应用价值。

层粘连蛋白受体及其在肿瘤转移中的作用

本文重点介绍近几年来国内外有关层粘连蛋白受体的研究进展:层粘连蛋白受体的分离纯化及理化性质;它在正常细胞中的功能,尤其是在癌转移中的作用。

乳腺癌组织层粘连蛋白受体表达的预后意义

目的：为了观察层粘连蛋白受体与乳腺癌临床和病理参数之间的关系，以及对患者生存的影响。方法：用免疫组织化学ＬＳＡＢ法检测了１０９例乳腺癌原位灶组织和其中３７例淋巴结转移灶组织中层粘连蛋白受体（ＬＲ）的表达情况。结果：在乳腺癌原发灶中有６０例（５５．０４％）阳性，淋巴结转移灶中有３１例（８３．７８％）阳性，两者表达率之间的差异有显著性意义（Ｐ＜０．０１）。ＬＲ表达与患者年龄、组织分级、肿瘤坏死和核分裂无显著关系。有淋巴结转移者ＬＲ表达率（６３．６３％）高于无淋巴结转移者（４６．２９％）。在３年以上随访材料中，８０％的死亡病例有ＬＲ表达，而生存者中仅有３５．１７％表达ＬＲ，其差异有极其显著性意义（Ｐ＜０．０１）。结论：ＬＲ与癌细胞的浸润和转移潜能关系密切，是推测患者预后差异的生物学参数之一。

层粘连蛋白受体Ⅰ与hPeriod1相互作用的研究

目的寻找与节律蛋白hPeriod1(hPer1)相互作用的蛋白,并对筛选出的层粘连蛋白受体Ⅰ(Lamr1)在节律系统中的功能作初步研究。方法分别构建pGAD rec脑/cDNA文库和pGBKT7/hPer1bH LH-PAS重组诱饵蛋白质粒,酵母双杂交筛选下丘脑里与hPer1相互作用的蛋白。利用RT-PCR技术检测新蛋白在脑、肺、心、肝、肾组织中的表达及在SH-SY5Y细胞中的节律性质。通过RNA干扰技术研究新蛋白与hPer1的关系。结果通过酵母双杂交筛选,证明Lamr1能与hPer1蛋白发生相互作用。该蛋白在脑、肺、心、肝、肾组织广泛表达,灰度比较显示经马血清诱导后的SH-SY5Y细胞的hPer1表达呈现近日节律,而Lamr1表达无节律变化。RNA干扰显示hPer1表达下调不影响Lamr1的表达。结论Lamr1能与hPer1蛋白发生相互作用,但其表达在RNA水平无节律变化。Lamr1参与细胞的黏附、转移和侵袭。其前体蛋白作为核蛋白参与细胞蛋白的合成。Lamr1可能参与hPer1相关的生物节律系统的信号传出。

层粘连蛋白及其受体在涎腺腺样囊性癌表达的意义

目的 :研究涎腺腺样囊性癌中层粘连蛋白 (laminin ,LN)及其受体 (lamininreceptor ,LN R)表达特征及其与腺样囊性癌的某些临床病理指标的关系。方法 :用超敏S P免疫组化方法检测 3 4例涎腺腺样囊性癌LN和LN R的表达。结果 :LN R的表达与涎腺腺样囊性癌组织分型、临床分期有关 (P <0 .0 5 ) ,LN的表达仅与腺样囊性癌的组织分型有关 (P <0 .0 5 ) ,而与临床分期无关 (P >0 .0 5 )。结论 :LN及其受体LN R的表达可作为涎腺腺样囊性癌恶性程度的一个指标。

SMMC-7721肝癌细胞67kD层粘连蛋白受体的分离纯化

分离纯化肝癌细胞的 6 7kD层粘连蛋白受体 (6 7LR) ,以便进一步研究 6 7LR的结构、功能及其在肝癌浸润、转移过程中的作用 .以SMMC 772 1肝癌细胞和L 0 2正常肝细胞为材料 ,采用13 1I标记的层粘连蛋白测定其与细胞的结合能力 ;亲和层析法分离纯化层粘连蛋白受体 ,用SDS PAGE、放射自显影及体外竞争结合实验进行鉴定 .在相同条件下SMMC 772 1肝癌细胞与层粘连蛋白特异结合量为 17 5 4± 0 4 9ng 10 5细胞 ,而L 0 2正常肝细胞与层粘连蛋白的特异结合量为 8 36± 0 4 8ng 10 5细胞 .经过亲和层析 ,从SMMC 772 1肝癌细胞和L 0 2正常肝细胞均可获得纯化受体 ,SDS PAGE显示为单一条带 ,分子量为 6 7kD ,放射自显影及体外竞争结合实验表明其具有较强的与层粘连蛋白结合的活性 .体外竞争结合实验表明 ,SMMC 772 1肝癌细胞层粘连蛋白受体 (772 1LnR)的抑制率可达到 96 2 7± 2 2 9% ,而L 0 2正常肝细胞层粘连蛋白受体 (L 0 2LnR)的抑制率为 4 8 71± 3 79% ,这说明 772 1LnR与层粘连蛋白的亲和力明显高于L 0 2LnR(P <0 0 0 1) .结果表明 ,与L 0 2肝细胞比较 ,SMMC 772 1肝癌细胞具有与层粘连蛋白较强结合能力的特异受体 ,并从肝癌细胞膜上分离纯化到与层粘连蛋白有较强亲和力的 6

人胎盘绒毛层粘连蛋白及其受体的定位与定量研究

目的：研究层粘连蛋白（ｌａｍｉｎｉｎ，ＬＮ）及其受体（ｌａｍｉｎｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＬＮＲ）在早、中、晚期人胎盘绒毛的定位及其相对含量变化。方法：取早期、中期和晚期胎盘绒毛，常规制作石蜡组织切片，采用免疫组织化学ＡＢＣ法和图像分析技术进行ＬＮ及ＬＮＲ定位和定量测定。结果：ＬＮ阳性反应主要位于绒毛上皮基膜和绒毛血管内皮基膜；ＬＮＲ的阳性反应位于绒毛上皮合体滋养层表面及合体滋养层和细胞滋养层的细胞质内，细胞核呈阴性。ＬＮ及ＬＮＲ的含量以早期胎盘绒毛中最高，中期及晚期含量明显降低。结论：人胎盘绒毛含有ＬＮ及ＬＮＲ，随着胎盘周龄的增加。

层粘连蛋白受体与配体在C6胶质瘤细胞中的表达及意义

目的检测层粘连蛋白受体与配体在C6胶质瘤细胞中的表达水平,探讨两者在胶质瘤细胞侵袭性生长和诱导神经干细胞迁移中的意义。方法从新生3～5 d的SD大鼠大脑皮层中分离和培养星形胶质细胞为对照,同时培养C6胶质瘤细胞。采用半定量RT-PCR方法分析层粘连蛋白受体和配体mRNA在星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞中表达的差异。结果星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞中均表达层粘连蛋白受体和配体mRNA,而C6胶质瘤细胞呈明显高表达(P<0.05,P<0.01)。结论C6胶质瘤细胞中表达上调的层粘连蛋白受体和配体可能是胶质瘤细胞侵袭性生长和诱导神经干细胞迁移的因素之一。

层粘连蛋白及其受体与子宫内膜癌关系的初探

了解层粘连蛋白 (laminin ,LN)和层粘连蛋白受体 (laminin -re ceptor ,LN -R)在正常子宫内膜、子宫内膜增殖症、子宫内膜癌中的分布规律 ,探讨内源性LN与LN -R表达间的关系。方法 :用LSAB免疫组化法 ,检测 16例正常子宫内膜、12例子宫内膜增殖症、2 7例子宫内膜癌组织中LN和LN -R的表达。结果 :LN在腺上皮基底膜 (EBM)、腺上皮细胞 /腺癌细胞 (EC)、间质细胞 (SC)中均有表达 ,LN -R仅在EC中有表达。 3组内膜组织间EBM表达构成比、EC及SC内LN表达率及EC内LN -R表达率比较差异均有显著性 (P均 <0 0 1)。 3种内膜LN -R与EC及SC内LN表达明显相关 (P <0 0 1,P <0 0 5)。LN、LN -R表达与子宫内膜病理分级、手术病理分期、绝经状态、雌激素受体有关。结论 :LN及LN -R表达与子宫内膜癌发生、预后有关 ;LN和LN -R的表达间存在内源性的相互调节关系。

层粘连蛋白及其受体在葡萄胎、侵蚀性葡萄胎中的表达及意义

目的 :探讨层粘连蛋白 ( L N)、层粘连蛋白受体 ( LN- R)与葡萄胎、侵蚀性葡萄胎发生的关系。方法 :采用免疫组织化学方法 ,观察正常人胚胎早期绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎组织中 L N、LN- R的表达情况。结果 :LN在正常绒毛组织、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎组织基底膜着色呈连续线状 ,且正常绒毛与葡萄胎组织中 LN的表达与妊娠周数有关 ,随着妊娠周数的增加 L N的表达呈下降趋势。正常绒毛组织、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎组织中 L N- R的表达位于上皮组织细胞膜上 ,呈阳性包绕状 ,且在偏离基底膜细胞表面着色较深。结论 :LN在预测妊娠结局方面有一定的应用价值 ;LN- R在细胞膜表面的分布可反映细胞的生长、浸润的方向 ,葡萄胎、侵蚀性葡萄胎组织中 LN、LN- R的表达在研究葡萄胎。

67kD层粘连蛋白受体对HepG2细胞增殖的影响

目的探讨67kD层粘连蛋白受体(67LR)与肝癌细胞生长增殖的关系。方法流式细胞术检测67LR转染的HepG2细胞稳定株细胞膜表面67LR的表达,采用CCK-8试剂盒测定细胞生长曲线,将不同细胞接种于裸鼠皮下,观察其成瘤能力的差异,采用免疫组织化学分析细胞增殖核抗原Ki-67的表达。结果67LR高表达的HepG2细胞株其细胞增殖速度明显降低,从第2d开始有明显差异(P<0.01,n=3),在裸鼠体内成瘤能力下降,瘤体平均质量仅为对照组的35.7%,为67LR低表达组的42.9%(P<0.01,n=10)。移植瘤的Ki-67表达明显减少。结论67LR可以降低肝癌细胞的生长增殖。