人工伴侣和盐酸胍促进溶菌酶复性的协同效应

研究了表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵 (CTAB)加 β -环糊精 (β -CD) (人工伴侣系统 )和盐酸胍对高浓度变性 -还原溶菌酶氧化复性的影响 ,利用基于二态复性模型的表观动力学模型分析了溶菌酶的复性过程 .结果表明 ,存在最佳盐酸胍浓度 ,使酶的复性率最大 ;当盐酸胍浓度一定时 ,提高人工伴侣系统的浓度使复性反应速率常数增大、逆反应速率常数降低 ,从而提高复性收率 ,证明人工伴侣和盐酸胍对促进变性溶菌酶复性具有协同效应 .在最佳盐酸胍浓度和较高浓度的人工伴侣存在下 ,6 0min内可使浓度为 1.0 5mg·ml-1的变性酶复性收率达到81% ,而相同条件下的自发复性收率仅为 49% .

人工伴侣促进溶菌酶复性动力学

利用复性和聚集竞争反应动力学模型描述自发复性和人工伴侣系统（十六烷基三甲基溴化铵与β-环糊精）促进溶菌酶复性动力学。在酶浓度为0．5－2．0mg·mL^-1、盐酸胍浓度为0．52．2mol·L^-1范围内，系统分析了盐酸胍浓度和人工伴侣浓度对复性动力学的影响。与自发复性相似，人工伴侣促进溶菌酶复性亦符合3级聚集反应动力学。人工伴侣系统的主要作用是抑制聚集体的生成速率，人而达到提高复性收率的效果。在盐酸胍浓度小于1．2mol·L^-1时。人工伴侣系统和盐酸胍对促进变性溶菌酶复性具有协同作用，两者共同作用对促进蛋白质复性具有显著效果。

人工伴侣与凝胶过滤色谱耦合作用促进高浓度溶菌酶复性研究

研究了人工伴侣系统,即十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和β 环糊精(β CD)促进高浓度变性 还原溶菌酶的氧化复性。确定CTAB与β CD的浓度比为1∶4,CTAB与变性溶菌酶的结合时间在10—50min内复性收率较高。同时发现,利用人工伴侣和凝胶过滤色谱的耦合作用可有效提高溶菌酶的复性收率,在连续复性操作条件下可使进料质量浓度为1mg/mL的变性酶获得87%的总复性收率。

人工伴侣条件下谷胱甘肽浓度对溶菌酶复性的影响

利用盐酸胍变性、二硫苏糖醇还原的溶菌酶为模型蛋白,考察人工伴侣一步法辅助溶菌酶复性时的最佳谷胱甘肽浓度。结果表明,当复性体系中溶菌酶浓度不同时,得到最大复性收率的GSSG与GSH的浓度有所差异。酶的质量浓度在0.06,0.1,0.2 mg/mL的条件下,随酶带入的还原型DTT的作用可以不予考虑,GSSG与GSH物质的量浓度比维持在1∶1时可以得到最大复性收率;酶的质量浓度在0.6 mg/mL的条件下,应当考虑DTT的作用,此时,需将变化后的GSSG与GSH物质的量浓度比维持在1∶1时,才能得到较大复性收率。

人工伴侣辅助溶菌酶复性的影响因素

为了获得人工伴侣辅助蛋白质复性方法的广泛应用,本文以二硫苏糖醇还原、盐酸胍变性的溶菌酶为目标蛋白质,优化复性过程中的一些条件。首先确定了溶菌酶浓度为0.06mg/mL时,复性的最佳氧化还原体系GSSG/GSH均为3 mmol/L;然后证明了要达到较高的复性收率,在水浴环境下,需要较长的时间和较大的β-CD浓度(24 h,CTAB/β-CD为1.2mmol/L:14.4 mmol/L),收率可达90%以上。而在摇床环境下,利用较短时间和较低的β-CD浓度(1 h,CTAB/β-CD为1.2 mmol/L:4.8 mmol/L)就可以达到一定的复性收率(70%以上);进一步实验证明,若想在1 h内达到理想的复性效果,可以选用1.2 mmol/L:4.8 mmol/L的CTAB/β-CD,摇动10 min,然后保持静止,可达到70%以上的收率。

渗透剂与人工伴侣耦合辅助苹果酸脱氢酶包含体的复性

苹果酸脱氢酶不仅是一种重要的糖代谢酶,而且具有较高的经济价值和理论研究价值。为了获得苹果酸脱氢酶包含体的有效体外复性方法,本文将渗透剂(蔗糖,甜菜碱,海藻糖)与人工伴侣体系(CTAB/β-CD)耦合,进行了大肠杆菌苹果酸脱氢酶(eMDH)包含体的体外复性研究。结果发现,人工伴侣与蔗糖或甜菜碱耦合,可明显提高eMDH包含体的复性效果,复性后产物的活性较稀释复性提高了2倍以上;但未发现海藻糖与人工伴侣存在这种耦合作用。同时发现,耦合作用还可降低人工伴侣体系中CTAB与β-CD的最佳配比(从1∶8下降到1∶6),从而可提升人工伴侣体系的总用量,实现较高酶浓度条件下的有效复性。另外,利用渗透剂对蛋白质的热保护作用,实现了在较高温度(15℃)下eMDH包含体的复性。对复性产物结构的初步分析发现,耦合作用可使eMDH分子的α-螺旋及二聚体含量明显增多,因此复性产物的活性也显著提高。

自主生成式亲密关系:青年与人工智能伴侣的互动体验

人工智能正在推动情感消费的转变,青年通过使用人工智能伴侣自主生成亲密关系,重塑了亲密关系的边界。本研究通过考察青年与人工智能伴侣的互动体验尝试理解自主生成式亲密关系的建构逻辑与现实影响。研究发现,青年使用人工智能伴侣的目的包括生成情感代餐、关系克隆和生成原生伴侣;在共享和独享两种情境中,青年通过训练智能体、调整预期和转换角色等策略主动控制与人工智能伴侣的亲密程度,最终形成了与智能体退出互动、间断互动和持续互动三种结果。文章最后讨论了自主生成式亲密关系实践与现实关系的互构过程,分析自主生成式亲密关系带来的影响与潜在风险。

人工分子伴侣辅助鸡白细胞介素18重组蛋白的复性

目的:研究表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和β-环糊精(β-CD)组成的人工分子伴侣系统辅助鸡IL-18重组蛋白的复性,以提高鸡IL-18重组蛋白复性率,获得更多具有良好活性的蛋白。方法:将重组原核表达质粒pGEX-mChIL-18转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG于37℃诱导培养获得表达。表达产物主要以包涵体的形式存在。包涵体经超声波破碎、洗涤后以6mol/L的盐酸胍溶解,使蛋白彻底变性,然后利用人工分子伴侣系统辅助蛋白复性。复性产物经透析纯化后,利用淋巴细胞增殖试验来检测其活性。结果:经SDS-PAGE分析表明,表达产物是与ChIL-18重组蛋白相符的Mr约44000的蛋白条带。利用人工分子伴侣系统辅助复性,鸡IL-18重组蛋白获得了42·54%复性率。鸡淋巴细胞增殖试验表明,表达产物对鸡淋巴细胞具有明显诱导增殖作用。结论:人工分子伴侣系统能够较好地辅助鸡IL-18重组蛋白复性,获得较高的复性率。其产物具有良好的生物学活性,为下一步鸡IL-18重组蛋白的应用研究奠定了试验基础。

人工分子伴侣介导液相体系中肌球蛋白热稳定性的研究

为了进一步提高鱼蛋白的热稳定性，扩大水产蛋白的应用范围，本研究以罗非鱼鱼肉为原料来提取肌球蛋白，并对其进行了热处理，同时以浊度、溶解度、总巯基含量和表面疏水性为指标，试验了十二烷基硫酸钠（SDS）和β-环糊精（β-CD）的添加对肌球蛋白热变性聚集的抑制效果，探讨人工分子伴侣（SDS-β-CD）介导液相体系中肌球蛋白热稳定性的改善．单因素影响的分析表明，在试验范围内，在pH6．0，SDS添加量为5mmol·L-1和蛋白质量浓度2g·L-1的条件下，于50℃热处理30min后添加β-CD（SDS与β-CD的比例为1：2），可以有效抑制肌球蛋白的热变性聚集；热变性抑制机理的分析显示，添加SDS和SDS-β-CD均能有效地抑制热升温处理（升温速率1℃·min-1，30～80℃）对肌球蛋白溶解度和浊度的影响（P≥0．05），抑制热处理对蛋白分子巯基的破坏作用，降低蛋白质分子间的相互作用，由此抑制肌球蛋白热处理过程中的变性聚集，从而改善体系的热稳定性．

人工分子伴侣系统辅助鸡IL-18重组蛋白复性过程中研究的影响因素

将重组原核表达质粒pGEX-mChIL-18转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG于37℃诱导培养获得表达。表达的包涵体经超声波破碎、洗涤后以6 mol/L的盐酸胍溶解,使蛋白彻底变性。然后按照试验设计,考察不同浓度组成的人工分子伴侣体系对不同浓度鸡IL-18重组蛋白复性率的影响。试验结果表明,利用人工分子伴侣系统辅助鸡IL-18重组蛋白的复性存在最佳的条件,优化该条件能够提高该融合蛋白的复性率,且产物都具有良好的生物学活性,为鸡IL-18重组蛋白的进一步应用研究奠定了基础。

人工分子伴侣复性体系辅助溶菌酶复性的研究

研究了人工分子伴侣复性体系中各种因素对溶菌酶复性效果的影响。当缓冲液浓度为23 mmol/L、pH值为8.1、以半胱氨酸为二硫键重排剂时,对人工分子伴侣辅助复性效果较佳。人工分子伴侣体系(CTAB、β-CD和Cysteine)的复性率比只加Cysteine的体系提高约40%,比添加β-CD和Cysteine的体系提高约20%。同时发现当溶菌酶浓度较高时,增加盐酸胍浓度可以提高蛋白质的复性率。

人工分子伴侣对重组内抑素的复性探讨

目的 初步探讨 pH、Tris-HCl浓度、十二烷基硫酸钠 (SDS)与 β-环糊精 (β -CD)浓度的比值三者变化对重组内抑素复性的影响。方法 根据人工分子伴侣对重组蛋白质的复性机理 ,采用人工分子伴侣方法应用于重组内抑素的复性。结果 通过优化后确定了其最佳复性时条件为 :pH为 8 0 ,Tris -HCl浓度为 10 0mM ,SDS∶β -CD为 1∶4 ,复性回收率可达89 %。

复合胶束辅助蛋白酶复性的研究

提出了一种使用复合胶束模拟分子伴侣来辅助蛋白质折叠的方法.制备了3种由不同比例的嵌段共聚物聚乳酸-b-聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PLA-b-PNIPAM)与聚乳酸-b-聚乙二醇(PLA-b-PEG)组成的温敏性的复合胶束(mixed-shell polymeric micelles,MSPMs),通过动态光散射考察了复合胶束在37℃以及在变性剂存在下的稳定性.以碳酸酐酶(CAB)和脂肪酶(Lipase)作为模型蛋白,研究了MSPM辅助蛋白质折叠的能力.结果表明,在高浓度变性剂存在下,PNIPAM仍具有温敏性,并且摩尔比为1∶1的PLA-b-PNIPAM和PLA-b-PEG制备的MSPM具有非常好的稳定性.不同比例的MSPM对于CAB和Lipase都具有辅助复性效果,远远高于没有MSPM时的自发复性.其中,摩尔比为1∶1的MSPM使CAB的复性率高达92.1%,Lipase的复性率也达到50%.