人工分子伴侣辅助鸡白细胞介素18重组蛋白的复性

目的:研究表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和β-环糊精(β-CD)组成的人工分子伴侣系统辅助鸡IL-18重组蛋白的复性,以提高鸡IL-18重组蛋白复性率,获得更多具有良好活性的蛋白。方法:将重组原核表达质粒pGEX-mChIL-18转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG于37℃诱导培养获得表达。表达产物主要以包涵体的形式存在。包涵体经超声波破碎、洗涤后以6mol/L的盐酸胍溶解,使蛋白彻底变性,然后利用人工分子伴侣系统辅助蛋白复性。复性产物经透析纯化后,利用淋巴细胞增殖试验来检测其活性。结果:经SDS-PAGE分析表明,表达产物是与ChIL-18重组蛋白相符的Mr约44000的蛋白条带。利用人工分子伴侣系统辅助复性,鸡IL-18重组蛋白获得了42·54%复性率。鸡淋巴细胞增殖试验表明,表达产物对鸡淋巴细胞具有明显诱导增殖作用。结论:人工分子伴侣系统能够较好地辅助鸡IL-18重组蛋白复性,获得较高的复性率。其产物具有良好的生物学活性,为下一步鸡IL-18重组蛋白的应用研究奠定了试验基础。

人工分子伴侣介导液相体系中肌球蛋白热稳定性的研究

为了进一步提高鱼蛋白的热稳定性，扩大水产蛋白的应用范围，本研究以罗非鱼鱼肉为原料来提取肌球蛋白，并对其进行了热处理，同时以浊度、溶解度、总巯基含量和表面疏水性为指标，试验了十二烷基硫酸钠（SDS）和β-环糊精（β-CD）的添加对肌球蛋白热变性聚集的抑制效果，探讨人工分子伴侣（SDS-β-CD）介导液相体系中肌球蛋白热稳定性的改善．单因素影响的分析表明，在试验范围内，在pH6．0，SDS添加量为5mmol·L-1和蛋白质量浓度2g·L-1的条件下，于50℃热处理30min后添加β-CD（SDS与β-CD的比例为1：2），可以有效抑制肌球蛋白的热变性聚集；热变性抑制机理的分析显示，添加SDS和SDS-β-CD均能有效地抑制热升温处理（升温速率1℃·min-1，30～80℃）对肌球蛋白溶解度和浊度的影响（P≥0．05），抑制热处理对蛋白分子巯基的破坏作用，降低蛋白质分子间的相互作用，由此抑制肌球蛋白热处理过程中的变性聚集，从而改善体系的热稳定性．

人工分子伴侣系统辅助鸡IL-18重组蛋白复性过程中研究的影响因素

将重组原核表达质粒pGEX-mChIL-18转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG于37℃诱导培养获得表达。表达的包涵体经超声波破碎、洗涤后以6 mol/L的盐酸胍溶解,使蛋白彻底变性。然后按照试验设计,考察不同浓度组成的人工分子伴侣体系对不同浓度鸡IL-18重组蛋白复性率的影响。试验结果表明,利用人工分子伴侣系统辅助鸡IL-18重组蛋白的复性存在最佳的条件,优化该条件能够提高该融合蛋白的复性率,且产物都具有良好的生物学活性,为鸡IL-18重组蛋白的进一步应用研究奠定了基础。

人工分子伴侣复性体系辅助溶菌酶复性的研究

研究了人工分子伴侣复性体系中各种因素对溶菌酶复性效果的影响。当缓冲液浓度为23 mmol/L、pH值为8.1、以半胱氨酸为二硫键重排剂时,对人工分子伴侣辅助复性效果较佳。人工分子伴侣体系(CTAB、β-CD和Cysteine)的复性率比只加Cysteine的体系提高约40%,比添加β-CD和Cysteine的体系提高约20%。同时发现当溶菌酶浓度较高时,增加盐酸胍浓度可以提高蛋白质的复性率。

人工分子伴侣对重组内抑素的复性探讨

目的 初步探讨 pH、Tris-HCl浓度、十二烷基硫酸钠 (SDS)与 β-环糊精 (β -CD)浓度的比值三者变化对重组内抑素复性的影响。方法 根据人工分子伴侣对重组蛋白质的复性机理 ,采用人工分子伴侣方法应用于重组内抑素的复性。结果 通过优化后确定了其最佳复性时条件为 :pH为 8 0 ,Tris -HCl浓度为 10 0mM ,SDS∶β -CD为 1∶4 ,复性回收率可达89 %。