口腔癌相关成纤维细胞对人工基底膜的降解作用及其机制

目的观察口腔癌相关成纤维细胞(CAFs)降解人工基底膜matrigel的能力,并探讨其可能的作用机制。方法matrigel凝胶与CAFs和NFs共同培养24、48、72h后,收集培养上清液,按照羟脯氨酸检测试剂盒说明测定羟脯氨酸含量;用考马斯亮兰微孔板法行微量蛋白定量;用明胶酶谱分析对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)含量进行测定。结果在各时间段,口腔CAFs上清超滤液中羟脯氨酸含量、上清液总蛋白浓度及MMP-2酶原含量明显高于NFs,且CAFs组表达大量MMP-2活性酶。口腔CAFs和NFs皆不表达MMP-9。结论CAFs具有较强的降解细胞外基质的能力,提示其与肿瘤-宿主微环境中基质重建及肿瘤侵袭有关。

不同转移潜能人肝癌单克隆细胞株的分离和建立

目的从高转移潜能的人肝癌细胞系中分离出不同转移潜能的单克隆细胞株。方法采用有限稀释法,对高转移潜能人肝细胞癌细胞系 MHCC97进行单克隆培养,筛选不同转移潜能的克隆细胞株,测定目标克隆株的生长速度、核型、AFP 分泌情况、体外侵袭能力、裸鼠接种肺转移率。结果筛选出高、低两个不同转移潜能的单克隆细胞株,分别命名为 MHCC97-H 和 MHCC97-L,前者肺转移率为100%,后者为40%;MHCC97-H 的细胞倍增时间为34.2h,MHCC97-L为60.0h;流式细胞分析显示,MHCC97-H 与 MHCC97-L 相比,前者 G_0-G_1期细胞比例低,S 期、G_2-M 期细胞比例高;人工基底膜穿透能力前者明显强于后者。结论本实验证实了 MHCC97癌细胞系的异质性。这两个单克隆细胞株对于肝癌生物学行为的比较研究有一定的使用价值。