锦鲤4个人工雌核发育家系的微卫星标记研究

利用Crooijmansetal (1997)分离的包含CA重复单元的普通鲤鱼 (CyprinuscarpioL .)的 8个微卫星DNA标记 ,对从锦鲤 (CyprinuscarpioL .)的红白、大正和昭和 3个不同品系中所获得的 4个不同人工雌核发育家系的 2 0尾个体进行PCR扩增。电泳结果表明 ,8对引物在 2 0尾个体中均能重复稳定地扩增出相应的同源序列。随引物不同 ,各等位基因数为 1～ 11个 ,大小在 6 8～ 2 6 4bp。在MFW 4、MFW7、MFW 19、MFW 2 0、MFW 2 3和MFW 2 4 6个微卫星的扩增结果中 ,2 0尾个体的扩增图谱呈现了高度的遗传多态性 ,不同雌核发育家系内个体的遗传异质性也较大。其中大正 (TaS)和红白 1(RW1)的个体不仅花色分化显著 ,而且个体间的平均遗传距离分别高达 0 2 8。通过对微卫星等位基因和基因型分析发现 ,由于锦鲤品系中的每一个体是通过不断地杂交选育而获得 ,基因组来源复杂 ,基因高度杂合。因此 ,只进行 1代的人工雌核发育 ,其家系内仅部分个体的部分座位出现纯合。所获得的人工雌核发育锦鲤为后续的色素遗传调控机制研究提供了必要的实验材料 ;同时 ,所鉴定的微卫星分子标记为进行锦鲤的分子标记育种和基因组作图提供了理想的工具。

人工雌核发育大黄鱼(Pseudosciaena crocea)的AFLP分析

采用6对选择性扩增引物(E-AAG/M-CAG、E-AAG/M-CTC、E-ACA/M-CAA;E-ACG/M-CAT、E-AGG/M-CAA、E-AGG/M-CTA)对冷休克法诱导的大黄鱼雌核发育家系G1、G2和对照组C1、C2的鱼苗及其亲本进行了扩增片段长度多态性(AFLP)标记的比较分析。结果表明,6对引物共检出了33条雄亲特有条带(G1中13条,G2中20条)、31条雌亲特有条带(G1中16条,G2中15条)。家系G1的24尾鱼苗均无雄亲特有条带,雌核发育成功率为100%,G2家系中有3尾鱼苗各出现了不同数量的雄亲特有条带,属正常受精个体(12.5%),其雌核发育成功率为87.5%,两个家系平均雌核发育诱导成功率为93.75%。31条雌亲特有条带中有14条在雌核发育后代中出现了分离。对亲子间遗传关系的分析表明了雌核发育个体之间的遗传差异最小,与雌亲的亲缘关系最近。研究表明,雌核发育是促进基因纯合的一个有效途径,AFLP技术是鱼类雌核发育鉴定和遗传分析的有效方法。

人工雌核发育鲢的遗传多样性及异源遗传物质整入的RAPD分析

运用RAPD技术对连续二代人工雌核发育鲢的遗传多样性及异源遗传物质的整入进行了分析 ,结果表明 :一代雌核发育鲢 ,个体间遗传相似度为 0 94 5— 0 995 6 ,多样性指数为 0 175 ;二代雌核发育鲢 ,个体间遗传相似度为0 96 15— 1 0 0 ,平均为 0 985 2 ,多样性指数为 0 0 6 2。研究揭示经过连续二代人工雌核发育后 ,其遗传多样性明显减少 ,种质进一步纯化。通过对雌核发育鲢二代、亲本鲢和雄鲤的RAPD扩增比较 ,发现雌核发育鲢含有少数与父本相同的特异DNA扩增带 ,而亲本鲢没有 。

两个人工雌核发育红白锦鲤群体的RAPD标记分析

采用 RAPD方法 ,对两个人工雌核发育红白锦鲤群体进行了多态性及分子标记分析。结果表明 ,同一雌核发育群体具有基本一致的扩增产物 ,而不同雌核发育群体间的扩增产物则有较大不同 ;并从 3 0个随机引物的扩增谱带中找到了 7个引物 (Opo- 7,Opo- 9,Opo- 1 2 ,Opo- 1 4,Opj- 4,Opj- 8和 Opj- 1 0 )的扩增谱带可以作为两个不同雌核发育群体间的遗传标记。由 UPGMA聚类法构建的分支系统树清晰地反映了两个雌核发育群体及其个体间的相互关系。

红白锦鲤人工雌核发育纯系的微卫星标记分析

利用连续两代人工雌核发育操作 ,构建了极具观赏价值的红白锦鲤人工雌核发育系。应用 6对微卫星引物进行遗传标记研究 ,检测分析了该雌核发育系内个体间的遗传同质性及其基因座位的纯合度。实验结果显示 ,11尾经人工挑选具有相同表形、极具观赏价值的F1代性成熟个体的微卫星扩增图谱呈现出高度的一致性。同时 ,随机挑选的人工雌核发育F2代个体在所检测的基因座位均呈现纯合 ,扩增图谱呈现了高度的一致 。

鱼类人工雌核发育

对鱼类人工雌核发育,包括其原理、技术以及雌核发育鱼的识别,子代的性别、能育性、纯合度和应用价值进行了总结,同时分析该技术存在的问题并提出了解决方法。

人工雌核发育鲢近交F_2微卫星DNA变异分析

采用17对鲢微卫星引物,以野生鲢、养殖鲢、雄鲤作对照对人工雌核发育鲢近交F2及其亲本进行了微卫星分析。结果表明:人工雌核发育鲢近交F2、养殖鲢和野生鲢群体的平均等位基因数范围为2.1～4.0;平均观测杂合度范围为0.2762～0.9588;期望杂合度范围为0.2774～0.7360;遗传多样性指数范围为0.4500～1.2258,人工雌核鲢近交F2为0.4500,显著低于养殖鲢(1.0273)和野生鲢(1.2258),揭示人工雌核发育鲢近交F2遗传多样性水平较低,纯合度较高。从遗传距离来看,人工雌核发育鲢近交F2与对照群体之间的遗传距离都要大于野生鲢与养殖鲢群体之间遗传距离,表明人工雌核发育鲢近交F2发生了一定程度的遗传分化。

两个人工雌核发育草鱼群体遗传纯合性分析

为了进一步了解和掌握2005年、2006年两个人工雌核发育草鱼群体的纯合性,以普通草鱼为对照,采用多个随机引物进行RAPD-PCR扩增,对两个人工雌核发育草鱼群体进行了遗传纯合性分析.实验结果表明:普通草鱼多态位点比例为27.28%,群体内遗传相似度系数为0.9322;2005年人工雌核发育草鱼多态位点比例为16.00%,群体内遗传相似度系数为0.9616;2006年人工雌核发育草鱼的多态位点比例为19.59%,群体内遗传相似度系数为0.9515.分析表明,两个人工雌核发育草鱼群体的遗传纯合度高于普通草鱼,2006年人工雌核发育草鱼群体的遗传纯合性较2005年低.

人工雌核发育草鱼染色体倍性的鉴定

运用经典的红细胞及细胞核体积大小测量方法以及流式细胞仪 ,检测了人工诱导雌核发育草鱼染色体倍性与 DNA含量 .雌核发育草鱼红细胞体积为 (333.5± 41.94) μm3 ,细胞核体积为 (2 0 .7± 2 .378) μm3 ;与所测普通草鱼 :红细胞体积 (34 3.8± 5 0 .1) μm3 ,细胞核体积 (2 1.2± 1.98) μm3 ,没有显著差异 .雌核发育草鱼 DNA含量 (2 C)平均为 2 .2 3pg,普通草鱼 DNA含量 (2 C) 2 .2 0 pg,两者无显著差异 .研究结果表明 。

人工雌核发育诱导太平洋牡蛎四倍体的研究

通过人工雌核发育诱导太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)四倍体。精子遗传失活采用紫外线照射法,紫外线照射时间1 min、紫外线照射剂量1 500-W.cm-2。诱导雌核发育四倍体用6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP),选用L9(34)设计,进行三因素三水平的正交试验。诱导持续时间(A)设35,45,55 min;处理起始时间(B)10,15,20 min;6-DMAP浓度(C)设300,450,600μmol.L-1等三水平,试验重复二次。解剖法获取精卵,人工授精。染色体倍性检查采用染色体计数法。根据正交试验直观分析结果,得出诱导太平洋牡蛎四倍体各因素的最优水平组合:处理起始时间15 min、6-DMAP浓度450μmo.L-1、诱导持续时间45 min;三因素主次顺序:6-DMAP浓度→处理起始时间→诱导持续时间。

酯酶和乳酸脱氢酶在人工雌核发育鲢近交F_1不同组织中的表达

采用聚丙烯酰胺水平平板电泳法研究了人工雌核发育鲢近交F1Ⅰ系、Ⅱ系、野生鲢、养殖鲢和雄鲤的肝、肾、心、眼和肌肉5种组织的酯酶(EST)和乳酸脱氢酶(LDH)。比较发现:(1)雌核发育鲢近交F1Ⅰ系、Ⅱ系和野生鲢的同工酶谱基本一致,雄鲤明显区别于鲢;(2)从酯酶图谱可发现,雌核发育近交鲢F1Ⅱ系的群体内有多态现象,肝、肾、肌肉的多态位点比例分别为0·6000、0·3333、0·5000,遗传杂合度分别为0·7485、0·6622、0·1139;(3)肝脏的乳酸脱氢酶中出现C带,且C带表现出多态性;(4)没有发现能区别鲢各群体的遗传标记。

人工雌核发育及其在遗传学和水产养殖上的应用

精子染色体的失活(用辐射或化学物处理)与细胞分裂的抑制(用冷休克、热休克或水静压法)的染色体组控制技术,能够容易地成用于鱼类而产生正常的雌核发育二倍体个体。在雌性配子同型(XX)的鱼类中,雌核发育个体具有其母亲的全部染色体且应该全部是雌性。局部自交,即杂合的雌核发育二倍体可以通过保留卵子第二极体的处理产生之完全纯合的雌核发育二倍体则可以用阻止第一次有丝分裂的方法产生。雌核发育对基因作图与纯合自交系的快速建立是有用的。这些自交系可用于遗传学与选择育种的研究。尽管雌核发育可以被用来产生单性种群,但由于后裔中自交衰退的存在,因此它可能不是种群控制的最好方法。 目前,雄核发育还没有被广泛地应用于鱼类,但对自交系的产生来说,作为雌核发育的一个补充方法同样具有潜力。

人工雌核发育在鱼类遗传育种中的应用

阐述了鱼类人工雌核发育的基本原理,介绍了人工雌核发育在研究鱼类性别决定机制,养殖生产中的性别控制和鱼类性别遗传机制分析及选育新品种等方面的应用成果。

3种不同染色体组加倍法在草鱼人工雌核发育中的对比研究

以性成熟的普通草鱼卵子和经紫外线照射处理后遗传失活的湘江野鲤精子为材料,采用三种不同染色体加倍法诱导草鱼雌核发育,3次重复实验结果表明:在人工诱导草鱼雌核胚胎发育过程中,二倍体诱导率以冷休克法处理组最好,其次分别为秋水仙素处理组和热休克法处理组。

激素、人工雌核发育在虹鳟养殖中的应用

本文叙述了从开始研究激素对虹鳟鱼性分化的影响到现在国内外学者在这方面的研究成果和手段,以及各国学者运用激素和人工雌核发育技术在虹鳟养殖和育种中所取得的成果,实用价值和理论价值.

人工雌核发育草鱼性腺早期发育状况的初步观察

观察了人工雌核发育草鱼性腺的早期发育情况。所检查的草鱼都是雌鱼，大部分性腺发育正常，少数性腺发育畸形或发育迟缓。

金鱼人工雌核发育的胚胎发育过程研究

开展了金鱼人工雌核发育的胚胎发育过程研究,用紫外线灭活的鲤鱼精子激活金鱼卵子,采用热休克处理卵子使其染色体加倍,获得雌核发育的二倍体金鱼苗。将假受精的金鱼卵放入室温(21±2)℃室内塑料盒里孵化,10 min后卵膜吸水膨胀,60 min后开始卵裂,8 h后出现囊胚期,29 h后出现原肠胚期,39 h后出现神经胚期,56.8 h后器官开始形成,3 d后孵化出小苗,受精率为65.16%;平均孵化率为50.28%;诱导率15.80%,正品率为67.90%。

鱼类人工雌核发育的研究进展

鱼类性别控制一方面对水产养殖具有重大的实用价值,另一方面为阐明鱼类性别分化和性别决定机制等理论问题提供依据。本文简述了鱼类性别控制的方法,介绍了鱼类性别控制及雌核发育相关的几种分子标记研究的进展状况及研究方向。

人工雌核生殖技术及其在鱼类育种中的应用

雌核生殖是一种依靠雌原核发育的特殊生殖方式,人工雌核生殖已经发展成为鱼类遗传改良的有效途径,在鱼类种质提纯复壮、良种选育等方面发挥重要作用。从鱼类育种的实践出发,系统总结了鱼类人工雌核生殖的技术途径、研究现状,提出了鱼类人工雌核生殖技术存在的问题,旨在为鱼类人工雌核生殖技术未来发展提供参考。