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人巨细胞病毒重组抗原及单克隆抗体在ELISA中的应用
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作者 郑纪山 周宗安 +3 位作者 邓小昭 李越希 何亮 李鹤林 《药物生物技术》 CAS CSCD 2002年第5期267-269,共3页
用重组人巨细胞病毒(rhCMV)gp52蛋白作抗原及相应的单克隆抗体酶标记物建立捕获ELISA,检测人血清中的HCMV特异性IgM抗体。其工作浓度均由方阵滴定法确定。并进行精密度、特异性和干扰实验。用该法检测体检献血员 病毒性肝炎患者及疑似... 用重组人巨细胞病毒(rhCMV)gp52蛋白作抗原及相应的单克隆抗体酶标记物建立捕获ELISA,检测人血清中的HCMV特异性IgM抗体。其工作浓度均由方阵滴定法确定。并进行精密度、特异性和干扰实验。用该法检测体检献血员 病毒性肝炎患者及疑似CMV感染的肝炎综合症患者血清共计939份。结果gp52蛋白抗原最佳浓度为1μg/ml,酶标单抗的工作浓度为1:1600,批内平均变异系数CV3.7%,批间CV7.9%。634例献血员IgM抗体阳性17例(2.7%);288例病毒性肝炎患者,阳性10例(3.5%);17例肝炎综合症患者,阳性11例(64.7%)。均经免疫印迹法证实。该组合特异性强,灵敏度高,不受类风湿因子的影响,结果可靠,优于全病毒抗原构成的检测试剂。适用于临床诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒重组抗原 单克隆抗体 ELISA
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人巨细胞病毒重组抗原在酶联免疫吸附试验中的应用研究 被引量:2
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作者 阮强 郭津津 +4 位作者 赵玉坤 刘兰青 吕绳敏 史金阳 刘庆 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期161-163,171,共4页
目的:探讨人巨细胞病毒重组抗原在ELISA中的应用。方法:采用基因工程方法组建含有巨细胞病毒PPUL32及PPUL44蛋白共三个强抗原决定簇基因的重组抗原克隆,以此重组抗原建立ELISA方法,用于117份待测血清巨细... 目的:探讨人巨细胞病毒重组抗原在ELISA中的应用。方法:采用基因工程方法组建含有巨细胞病毒PPUL32及PPUL44蛋白共三个强抗原决定簇基因的重组抗原克隆,以此重组抗原建立ELISA方法,用于117份待测血清巨细胞病毒IgM抗体的检测,并将ELISA方法与免疫转印方法进行了比较。结果:经统计学分析,建立的ELISA方法与免疫转印检测方法的检测结果具有非常显著的一致性(χ2=54.08,P<0.01)。与免疫转印方法比较,其敏感性和特异性分别为100%和81.3%;阳性预测率和阴性预测率分别为60.5%和100%,此ELISA方法具有良好的重复性。结论:此重组抗原具有良好的应用价值,可望替代HCMV感染ELISA诊断中的全病毒抗原。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 重组抗原 ELISA HCMV感染 诊断
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抗人巨细胞病毒重组抗原gp52单克隆抗体的研制及应用研究 被引量:3
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作者 周宗安 郑纪山 +4 位作者 邓小昭 李越希 何亮 李鹤林 王延茹 《解放军预防医学杂志》 CAS 北大核心 2003年第2期82-85,共4页
目的 :为了获得抗人巨细胞病毒 (HCMV)单克隆抗体 (McAb) ,并将其用于人HCMV感染后的抗体检测。方法 :采用杂交瘤技术获得抗重组HCMV(rhCMV)gp 5 2蛋白的McAb。并用抗人 μ链抗体包被、rhCMVgp5 2蛋白作抗原和HRP -McAb作标记抗体 ,建... 目的 :为了获得抗人巨细胞病毒 (HCMV)单克隆抗体 (McAb) ,并将其用于人HCMV感染后的抗体检测。方法 :采用杂交瘤技术获得抗重组HCMV(rhCMV)gp 5 2蛋白的McAb。并用抗人 μ链抗体包被、rhCMVgp5 2蛋白作抗原和HRP -McAb作标记抗体 ,建立了检测抗HCMV抗体的捕获ELISA。用该法检测献血员、病毒性肝炎患者及疑似CMV感染的肝炎综合征患者血清共计 939份。结果 :最终获得 4株 (3E9,5A6 ,4G1 2 ,2H2 )能稳定分泌高效价抗rhCMVMcAb的杂交瘤细胞。它们分别识别gp5 2蛋白上的 2个不同抗原表位 ,2H2识别gp5 2蛋白上的一个表位 ,3E9,5A6和 4G1 2则共同识别另一个表位。用其建立的捕获ELISA ,gp5 2蛋白抗原最佳浓度为1 μg·mL- 1,酶标单抗的工作浓度为 1 :1 6 0 0 ,批内平均变异系数 3.7% ,批间平均变异系数 7.9%。6 34例献血员IgM抗体阳性 1 7例 (2 .7% ) ;2 88例病毒性肝炎患者 ,阳性 1 0例 (3.5 % ) ;1 7例肝炎综合征患者 ,阳性 1 1例 (6 4.7% )。均经免疫印迹法证实。结论 :用gp5 2蛋白及其单抗建立的捕获ELISA ,特异性强 ,灵敏度高 ,不受类风湿因子的影响 ,结果可靠 ,优于全病毒抗原构成的检测试剂 。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒感染 抗体检测 重组gp52蛋白 单克隆抗体 捕获酶联免疫吸附试验
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巨细胞病毒抗原血症检测在肾移植术后的应用
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作者 白敏凤 胡伟 +2 位作者 马寅锐 贾蔚 尹利民 《实用器官移植电子杂志》 2024年第1期17-22,共6页
目的评估巨细胞病毒抗原血症检测方法对诊断肾移植患者巨细胞病毒感染的意义。方法收集2021年9月至2021年12月昆明市第一人民医院就诊90例肾移植患者的110例血样,对其进行巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)pp65抗原血症检测与Ig G抗体、C... 目的评估巨细胞病毒抗原血症检测方法对诊断肾移植患者巨细胞病毒感染的意义。方法收集2021年9月至2021年12月昆明市第一人民医院就诊90例肾移植患者的110例血样,对其进行巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)pp65抗原血症检测与Ig G抗体、CMV DNA结果比较,评估CMV pp65抗原血症结果与肌酐、他克莫司(tacrolimus,Tac/FK506)药物浓度、淋巴细胞亚群的相关性。结果CMV pp65抗原血症结果与CMV DNA结果一致性为65.5%,差异具有统计学意义(P<0.05)。CMV pp65抗原血症检测结果与CMV IgG抗体检测结果一致性为57.3%,差异不具有统计学意义(P>0.05)。CMV pp65抗原血症结果与肌酐、FK506药物浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CMV pp65抗原血症结果与淋巴细胞亚群比较中,仅与NK细胞绝对值差异有统计学意义(P<0.05)。结论CMV pp65抗原与CMV IgG抗体结果一致性为57.3%。CMV pp65抗原与CMV DNA结果一致性为65.5%,两种方法联合检测,对提高CMV感染临床诊断准确率具有一定意义。在CMV pp65抗原阴性组与阳性组中,血清肌酐水平、全血FK506药物浓度两组间差异无统计学意义,NK细胞绝对值差异具有统计学意义,NK细胞绝对值偏高的肾移植患者,发生CMV感染的概率偏低。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 PP65抗原血症 肾移植
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重组人巨细胞病毒(HCMV)优势表位嵌合抗原的构建表达以及捕获法检测IgM抗体 被引量:5
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作者 孙鹏 孙兴宝 +7 位作者 胡鹏 田晓红 邓波 夏良雨 王宁燕 王红 李泓彦 何志强 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1351-1356,共6页
通过计算机软件分析选择巨细胞病毒优势抗原表位,用聚合酶链式反应(PCR)扩增优势表位基因,构建了巨细胞病毒多优势表位嵌合抗原表达载体p4T-UL32-UL44-UL80a-UL83,转化宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,GST亲和层析法获得高纯度嵌合抗原... 通过计算机软件分析选择巨细胞病毒优势抗原表位,用聚合酶链式反应(PCR)扩增优势表位基因,构建了巨细胞病毒多优势表位嵌合抗原表达载体p4T-UL32-UL44-UL80a-UL83,转化宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,GST亲和层析法获得高纯度嵌合抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记嵌合抗原,并构建捕获法检测血清中的抗HCMVIgM抗体。结果表达的优势表位嵌合抗原具有很好的抗原性,用其建立的捕获法检测确诊的30份阳性和63份儿童阴性血,阳性检出率和阴性检出率都是100%说明用嵌合抗原构建的捕获法检测血清中抗HCMVIgM抗体具有更高的灵敏度和检出正确率,其检测水平已经达到国外的同类产品水平。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 优势表位嵌合抗原 捕获酶联免疫吸附法 IGM抗体
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人巨细胞病毒pp65抗原血症检测方法的建立和初步临床应用 被引量:9
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作者 赵缜 李敏 +3 位作者 彭奕冰 支立明 潘宁 季育华 《检验医学》 CAS 北大核心 2004年第1期36-39,共4页
目的 建立人巨细胞病毒抗原 pp6 5 (HCMVpp6 5 )血症特异、灵敏和低成本的酶免组化和荧光免疫组化方法 ,以利于临床推广应用。方法 以HCMV AD16 9感染的人胚肺成纤维细胞 (HELF)爬片作阳性对照 ,选择试剂和材料组建试剂盒 ,并与商品... 目的 建立人巨细胞病毒抗原 pp6 5 (HCMVpp6 5 )血症特异、灵敏和低成本的酶免组化和荧光免疫组化方法 ,以利于临床推广应用。方法 以HCMV AD16 9感染的人胚肺成纤维细胞 (HELF)爬片作阳性对照 ,选择试剂和材料组建试剂盒 ,并与商品化的同类试剂盒作比较 ,建立人外周血多形核白细胞 (PMNLs)中HCMVpp6 5抗原阳性细胞的检测方法 ,然后再用荧光定量PCR(FQ PCR)方法做相应考评。 结果 我们建立的HCMVpp6 5抗原血症检测法能成功地检出PMNLs中的 pp6 5阳性细胞。其可检测限分别为 10 2 pfu/ml的AD16 9攻击 2 4h后的HELF细胞爬片和 3~ 5个 pp6 5阳性细胞 / 2× 10 5PMNLs ;用高相对分子质量 (5 0 0 0 0 0 )的葡聚糖能快速、有效地分离PMNLs ;用 4 %中性多聚甲醛固定的细胞片 ,于 - 2 0°C或以下可长期保存 (≥ 6个月 ) ,而且 pp6 5抗原性稳定。 结论 自建的试剂盒与同类进口试剂盒相比 ,检测 pp6 5的结果差异无显著性 ,并与FQ PCR的检测结果相一致 ,其检测特异、灵敏、操作简单、费用低廉 ,适宜临床实验室推广应用。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 PP65抗原血症 检测 临床应用 外周血多形核白细胞
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应用间接免疫荧光技术检测人巨细胞病毒-PP65抗原的临床意义 被引量:13
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作者 李薇 谢闻悦 +2 位作者 陈永强 刘俊 张璇 《实用医学杂志》 CAS 2007年第9期1398-1400,共3页
目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)-PP65抗原检测的临床意义。方法:利用间接免疫荧光技术对本院56例住院患者外周血HCMV-PP65抗原进行检测,其中器官移植组35例(肾移植患者13例,肝移植患者14例,骨髓移植患者8例),其他疾病组21例。设本院健康... 目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)-PP65抗原检测的临床意义。方法:利用间接免疫荧光技术对本院56例住院患者外周血HCMV-PP65抗原进行检测,其中器官移植组35例(肾移植患者13例,肝移植患者14例,骨髓移植患者8例),其他疾病组21例。设本院健康体检者20例为正常对照组。结果:56例标本中有25例检出HCMV-PP65抗原阳性,阳性率为45%。25例抗原阳性患者中,有临床症状的患者外周血中的HCMV-PP65抗原阳性细胞数明显高于无临床症状的HCMV-PP65抗原阳性的患者,两者比较差异有显著性(P<0.01)。正常对照组无一例阳性。结论:HCMV-PP65抗原检测具有简便、敏感的特点,其结果与患者的临床症状相关,可以作为监测HCMV活动性感染的指标,为临床提供诊治依据。 展开更多
关键词 巨细胞病毒感染 PP65抗原 间接免疫荧光
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肾移植及骨髓移植受者术后巨细胞病毒早早期抗原的检测 被引量:6
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作者 吴国华 罗灿峤 +4 位作者 赖英荣 梁惠珍 钟觉民 梁英杰 吴荣佩 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第44期8203-8206,共4页
背景:肾移植及骨髓移植后,随着免疫抑制剂的应用,潜伏的巨细胞病毒都将被激活。因此早期准确诊断巨细胞病毒感染具有重要的意义,及时而有效地控制巨细胞病毒感染的关键是在血液中迅速、定量地检测到巨细胞病毒的复制。目的:检测肾移植... 背景:肾移植及骨髓移植后,随着免疫抑制剂的应用,潜伏的巨细胞病毒都将被激活。因此早期准确诊断巨细胞病毒感染具有重要的意义,及时而有效地控制巨细胞病毒感染的关键是在血液中迅速、定量地检测到巨细胞病毒的复制。目的:检测肾移植及骨髓移植受者术后的巨细胞病毒早早期抗原,探讨其临床诊断价值。方法:采用免疫组织化学方法对1215例肾移植及骨髓移植受者外周血白细胞巨细胞病毒活动性感染的早早期抗原进行检测。结果与结论:巨细胞病毒早早期抗原指数阳性492例(占40.0%),早早期抗原指数阴性723例(占60.0%),巨细胞病毒抗体IgG明显升高318例(占26.0%),巨细胞病毒抗体IgM90例(占7.0%)。巨细胞病毒抗原血症检测技术对于巨细胞病毒活动性感染的诊断具有高度的灵敏性和特异性,同时对巨细胞病毒的发生还具有重要的预测意义,是一种经济可行的诊断方法。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 肾移植 骨髓移植 早早期抗原 组织移植
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人巨细胞病毒pp150抗原区的原核表达及初步应用 被引量:3
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作者 李国才 严华 +4 位作者 季明春 申厚凤 陈红菊 焦红梅 万兵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期169-171,共3页
To make up an engineered E.coli strain for expression of antigenic determinants of pp150 of human cytomegalovirus,the gene encoding the 420-752 amino acid peptides of pp150 was amplified from human cytomegalovirus AD1... To make up an engineered E.coli strain for expression of antigenic determinants of pp150 of human cytomegalovirus,the gene encoding the 420-752 amino acid peptides of pp150 was amplified from human cytomegalovirus AD169 by RT-PCR and cloned into Nde I/BamHⅠ sites in pET30a.The recombinant plasmid was transformed into E.coli BL21(DE3)and a foreign protein about 35 kD were detected by SDS-PAGE and Western blotting assay.The antiserum prepared by using prokaryotic expressed product as antigen turned to be against pp150 specifically and had low neutralization effect to HCMV. 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 PP150 抗原 原核表达 疫苗 HCMV
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新疆Kaposi肉瘤组织内巨细胞病毒抗原的检测报告 被引量:6
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作者 普雄明 石得仁 沈大为 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第2期74-75,共2页
应用免疫组织化学方法,对12例新疆Kaposi肉瘤病人瘤组织进行了巨细胞病毒(CMV)抗原的检测,结果全部呈阳性反应。而10例正常皮肤组织和10例皮肤纤维瘤组织均为阴性。从而支持CMV感染与Kaposi肉瘤的发生密切... 应用免疫组织化学方法,对12例新疆Kaposi肉瘤病人瘤组织进行了巨细胞病毒(CMV)抗原的检测,结果全部呈阳性反应。而10例正常皮肤组织和10例皮肤纤维瘤组织均为阴性。从而支持CMV感染与Kaposi肉瘤的发生密切相关的观点。同时作者认为CMV抗原检测对KS的组织学诊断可能是一个十分有用的免疫组化标记。 展开更多
关键词 KAPOSI肉瘤 巨细胞病毒 抗原
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重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽在毕赤酵母中的表达 被引量:3
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作者 董鲁 谢琪璇 +2 位作者 潘善培 肖銮娟 刘红军 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 2003年第1期73-78,共6页
 目的:在巴斯德毕赤酵母中表达人巨细胞病毒gp52C末端和pp150C末端串联片段的嵌合肽.方法:用SacⅠ和BglⅡ分别酶切CMVp-pPIC9K重组质粒,电打孔法导入毕赤酵母GS115后,在缺组氨酸的MD板上筛选出转化子,然后根据甲醇利用快速型(Mut+)和...  目的:在巴斯德毕赤酵母中表达人巨细胞病毒gp52C末端和pp150C末端串联片段的嵌合肽.方法:用SacⅠ和BglⅡ分别酶切CMVp-pPIC9K重组质粒,电打孔法导入毕赤酵母GS115后,在缺组氨酸的MD板上筛选出转化子,然后根据甲醇利用快速型(Mut+)和甲醇利用缓慢型(Muts)菌株的不同生长特点,筛选出Mut+和Muts型转化子,用PCR法进一步鉴定阳性克隆.分别用甲醇诱导Mut+和Muts型转化子表达目的蛋白4d,取培养产物冻干浓缩,进行SDS-PAGE和Westernblotting,筛选出能特异表达目的蛋白的菌株,分析蛋白的含量及纯度.结果:重组人巨细胞病毒可在甲醇利用快速型毕赤酵母中有效表达,其表达量约占培养上清分泌蛋白的76 5%.结论:重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽可在真核细胞毕赤酵母中成功表达. 展开更多
关键词 重组人巨细胞病毒 HCMV 嵌合肽 毕赤酵母 基因表达 基因工程 病毒检测
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肾移植术后巨细胞病毒抗原检测及其临床意义 被引量:4
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作者 徐鸿绪 郑克立 +4 位作者 曾文涛 陈连周 傅茜 洪良庆 王晓波 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期454-456,共3页
目的建立一种早期、快速诊断 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)感染的抗原检测方法,以了解肾移植术 后受者的HCMV感染情况并探讨其临床意义。方法利用 抗HCMV前早期抗原和早期抗原的单克隆抗体,建立了免疫组化Envision^(TM)... 目的建立一种早期、快速诊断 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)感染的抗原检测方法,以了解肾移植术 后受者的HCMV感染情况并探讨其临床意义。方法利用 抗HCMV前早期抗原和早期抗原的单克隆抗体,建立了免疫组化Envision^(TM)二步法。用 于 检测外周血多形核白细胞(PMNL)中HCMV抗原(前早期抗原和早期抗原),诊断HCMV活动性感 染。结果检测肾移植术后受者86例,HCMV抗原阳性39 例,阳性率45.3%。抗原阳性细胞数平均为16.5 个/5万PMNL。其中,HCMV病患者和无症 状HCMV感染者平均分别为24.5±18.2个/5万PMNL和12.0±10.6个/5万PMNL。15名 正常 人(抗HCMV血清抗体阴性)作为对照同时检测HCMV抗原,结果均为阴性。结论该法具有简便、快速等优点,且能区分潜伏感染和活动性感染,适 用于临床对HCMV感染的早期快速诊断和作为指导排斥治疗以及判断预后的主要手段,有推广 应用价值。 展开更多
关键词 肾移植 人巨细胞病毒 抗原 免疫组织化学
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荧光定量PCR与PP65抗原检测在诊断儿童巨细胞病毒活动性感染的比较 被引量:14
13
作者 祝兴元 何谢玲 +2 位作者 覃亚斌 马菊 李梨平 《中国实验诊断学》 2012年第2期285-287,共3页
目的用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和pp65抗原检测儿童人巨细胞病毒(HCMV)感染,并对其诊断HCMV活动性感染进行比较评估。方法分析924例HCMV血清学检测阳性的儿童的全血HCMV-DNA荧光定量PCR及HCMV-pp65抗原检测结果,与临床诊断的... 目的用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和pp65抗原检测儿童人巨细胞病毒(HCMV)感染,并对其诊断HCMV活动性感染进行比较评估。方法分析924例HCMV血清学检测阳性的儿童的全血HCMV-DNA荧光定量PCR及HCMV-pp65抗原检测结果,与临床诊断的符合程度进行比较。结果全血HCMV-DNA荧光定量PCR和pp65抗原检测的一致率为81.17%,其标准误为0.39,Kappa值为0.60;PCR检测HCMV感染的灵敏度为98.4%,特异度为97.3%,Youden指数为0.957,PVP和PVN分别为0.961和0.989;pp65抗原检测用于检测HC-MV感染的灵敏度为59.2%,特异度为100%,Youden指数为0.592,PVP和PVN分别为1.00和0.782。结论全血HCMV-DNA荧光定量PCR和pp65抗原检测的结果有较好的一致性,诊断HCMV感染PCR检测的灵敏度较pp65抗原检测的灵敏度要高,而后者的特异度较前者高。二种方法都可用于CMV活动性感染的诊断。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 聚合酶链反应 PP65抗原
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人巨细胞病毒重组基因表达质粒的构建 被引量:3
14
作者 郑育声 谢琪璇 +2 位作者 潘善培 芦春斌 肖銮娟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期716-718,共3页
目的 用基因工程技术克隆人巨细胞病毒 (Humancytomegalovirus ,HCMV)中抗原性较强的蛋白片段—gp5 2C末端和pp15 0C末端的DNA序列 ,插入pPIC9K质粒 ,构建适于酵母表达系统的重组表达质粒。方法 根据人巨细胞病毒糖蛋白gp5 2和磷酸蛋... 目的 用基因工程技术克隆人巨细胞病毒 (Humancytomegalovirus ,HCMV)中抗原性较强的蛋白片段—gp5 2C末端和pp15 0C末端的DNA序列 ,插入pPIC9K质粒 ,构建适于酵母表达系统的重组表达质粒。方法 根据人巨细胞病毒糖蛋白gp5 2和磷酸蛋白pp15 0C末端的cDNA序列 ,设计出 2对引物。利用PCR的方法 ,以病毒培养液上清为模板 ,进行二轮PCR扩增 ,把两个目的基因串联在一起 ,将所得的DNA片段经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒进行连接 ,然后导入大肠杆菌DH5α ,筛选出阳性转化子 ,并用PCR和双酶切鉴定阳性重组子。结果 从人巨细胞病毒培养液上清中扩增出目的基因 ,PCR反应和双酶切鉴定结果与预期相符。 展开更多
关键词 基因表达 人巨细胞病毒 重组PCR 质粒pPIC9K
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人巨细胞病毒截短被膜磷蛋白pp65的原核表达及抗原性分析 被引量:3
15
作者 岳盈盈 宋楠楠 +4 位作者 李志会 李鹏 纪璇 于锡巧 孟红 《山东医药》 CAS 2012年第43期20-22,共3页
目的利用大肠杆菌表达系统表达截短人巨细胞病毒(HCMV)pp65蛋白,并对其抗原性进行初步鉴定。方法采用PCR扩增HCMV pp65基因961~1 686 bp(321aa-562aa)片段,并将其插入表达载体pET30a(+),转化BL21(DE3)菌株,十二烷基硫酸钠—聚丙稀酰胺... 目的利用大肠杆菌表达系统表达截短人巨细胞病毒(HCMV)pp65蛋白,并对其抗原性进行初步鉴定。方法采用PCR扩增HCMV pp65基因961~1 686 bp(321aa-562aa)片段,并将其插入表达载体pET30a(+),转化BL21(DE3)菌株,十二烷基硫酸钠—聚丙稀酰胺凝胶(SDS-PAGE)分析蛋白表达,常规镍柱法纯化目的蛋白,以ELISA法初步检测其抗原性。结果获得相对分子质量约为30 kD的融合蛋白,pp65抗原和全病毒抗原的P/N值分别为2.737、2.535。结论本研究成功表达截短HCMV pp65抗原,并证实其蛋白抗原性优于全病毒抗原;此为HCMV检测试剂盒的研制和疫苗的研究提供了依据。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 PP65蛋白 原核表达 抗原
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以重组人巨细胞病毒pp65制备的多克隆抗体建立检测感染性病毒颗粒方法 被引量:3
16
作者 李长贵 王剑锋 +2 位作者 英志芳 周铁群 李娟 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期47-49,共3页
人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染是造成器官移植失败的重要原因。建立灵敏、特异的检测方法可为及早发现感染、及时给予抗病毒治疗提供依据。以离子交换和分子筛方法纯化重组表达的HCMVpp65(rp65hp)抗原,经两步纯化后,rp65hp纯度达到95%... 人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染是造成器官移植失败的重要原因。建立灵敏、特异的检测方法可为及早发现感染、及时给予抗病毒治疗提供依据。以离子交换和分子筛方法纯化重组表达的HCMVpp65(rp65hp)抗原,经两步纯化后,rp65hp纯度达到95%。免疫家兔制备的抗血清,ELISA抗体滴度高达1∶2560000;免疫印迹证明能与HCMVpp65抗原特异反应。将HCMV病毒感染细胞,以纯化的多克隆抗体建立了间接免疫荧光法,成功地检测到细胞中的病毒。因此,该方法为临床检测HCMV病毒活动性感染奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 重组人巨细胞病毒pp65 制备方法 多克隆抗体 感染性病毒颗粒 检测方法 间接免疫荧光法
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人类白细胞抗原与人类巨细胞病毒 被引量:7
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作者 颜卫华 范丽安 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期153-155,157,共4页
人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)通过多种途径逃避宿主的免疫监视和防御功能,其主要机制为:合成多种时相蛋白,影响和破坏人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)分子在宿主细胞表面的表达,从而干扰抗原递呈及影... 人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)通过多种途径逃避宿主的免疫监视和防御功能,其主要机制为:合成多种时相蛋白,影响和破坏人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)分子在宿主细胞表面的表达,从而干扰抗原递呈及影响NK细胞的杀伤活性。本文就有关最新研究进展作一综述。 展开更多
关键词 人类巨细胞病毒 人类白细胞抗原 免疫逃逸 NK细胞 β-疱疹病毒
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荧光定量PCR和外周血白细胞pp65抗原血症实验对肾移植术后巨细胞病毒感染的检测 被引量:4
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作者 严晓敏 唐勤 +1 位作者 陈明 孙则禹 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期890-892,共3页
目的 探讨肾移植术后 3个月巨细胞病毒 (CMV)的感染状况 ,比较荧光定量PCR和外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验两种方法对肾移植术后巨细胞病毒感染的检测情况和使用价值。方法 分别用荧光定量PCR、外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验和EL... 目的 探讨肾移植术后 3个月巨细胞病毒 (CMV)的感染状况 ,比较荧光定量PCR和外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验两种方法对肾移植术后巨细胞病毒感染的检测情况和使用价值。方法 分别用荧光定量PCR、外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验和ELISA法对我院 2 0 0 1年 1月~2 0 0 2年 12月 5 6例肾移植患肾移植术后 3个月的外周血进行巨细胞病毒的检测。结果  5 6例肾移植患者中CMVpp5 6抗原血症阳性 9例 ( 16 1% ) ,PCR阳性 11例 ( 19 6 % ) ,12例 ( 2 1 4 % )诊断为CMV感染 ,其中 7例为症状性感染 ,5例为无症状性感染。荧光定量PCR和外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验的一致性为 92 % ,阳性符合率 6 7% ,阴性符合率 92 %。CMVpp6 5抗原、CMVDNAPCR、CMV IgM的敏感性、特异性分别为 72 %、92 % ;10 0 %、92 % ;4 3%、88%。结论 荧光定量PCR和外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验的联合应用 ,对监测CMV活动性感染、临床疗效及预后更加客观。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 外周血白细胞pp65抗原血症实验 肾移植术 巨细胞病毒 术后感染 病毒治疗
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大蒜新素抑制人巨细胞病毒即刻早期抗原表达的实验研究 被引量:3
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作者 舒赛男 方峰 董永绥 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期967-970,共4页
目的 :通过研究大蒜新素对人巨细胞病毒即刻早期抗原 (HCMVIEA)的抑制作用 ,探讨大蒜新素体外对HCMV感染的预防、阻断和治疗效应及其机制。方法 :采用细胞形态观察和MTT比色法检测大蒜新素的细胞毒性。以流式细胞术定量检测和比较大蒜... 目的 :通过研究大蒜新素对人巨细胞病毒即刻早期抗原 (HCMVIEA)的抑制作用 ,探讨大蒜新素体外对HCMV感染的预防、阻断和治疗效应及其机制。方法 :采用细胞形态观察和MTT比色法检测大蒜新素的细胞毒性。以流式细胞术定量检测和比较大蒜新素不同剂量 ,不同处理时间 (2 4 ,4 8,72 ,96h)以及病毒感染不同阶段 (病毒吸附前、吸附时和吸附后 )应用大蒜新素时HCMVIEA表达水平变化。结果 :人胚肺成纤维细胞对大蒜新素的最大耐受浓度为 9.6 0mg·L-1。病毒吸附后持续用药可显著抑制HCMVIEA的表达 ,用药 72hHCMVIEA抑制率达 89.3% ;大蒜新素预处理细胞后感染病毒 ,HCMVIEA抑制率为 2 8.6 % ;药物与病毒吸附同时应用 ,即刻早期抗原 (IEA)抑制率仅为 10 .3%。结论 :大蒜新素体外持续用药可显著抑制HCMVIEA的表达 ;其预防作用较弱 ;即时抑制效应不明显。大蒜新素对IEA表达的明显抑制可能是大蒜新素抗HCMV效应的主要作用机制之一。 展开更多
关键词 大蒜新素 人巨细胞病毒 即刻早期抗原 表达 实验研究 流式细胞
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流式细胞术检测PP65抗原血症在巨细胞病毒性肝炎诊断中的意义 被引量:3
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作者 章国忠 涂芳芳 +3 位作者 魏健 沈红强 金国信 潘继豹 《温州医学院学报》 CAS 2006年第3期243-245,共3页
目的:探讨流式细胞术(flowcytometry,FCM)检测PP65抗原血症对巨细胞病毒(humancytomegalovirus,CMV)肝炎的诊断价值。方法:采用流式细胞仪对41例CMV肝炎患儿进行血PP65抗原检测,同时用PCR方法测定尿CMV-DNA并用ELISA法检测血清CMV-IgM,... 目的:探讨流式细胞术(flowcytometry,FCM)检测PP65抗原血症对巨细胞病毒(humancytomegalovirus,CMV)肝炎的诊断价值。方法:采用流式细胞仪对41例CMV肝炎患儿进行血PP65抗原检测,同时用PCR方法测定尿CMV-DNA并用ELISA法检测血清CMV-IgM,比较3种方法的检测结果,对部分患儿进行短期随访,分析PP65的临床应用价值。结果:41例CMV肝炎中36例检出PP65抗原阳性,阳性率达87.8%,CMV-DNA及IgM的阳性率分别为92.6%及36.6%。全身性感染伴高水平抗原血症,单纯肝炎抗原水平相对较低(P<0.01)。PP65在肝炎恢复期转为阴性或低水平,病情恶化时明显增高。结论:PP65抗原血症检测是诊断活动性CMV感染的有效手段,量化结果有助于监测病情。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 PP65抗原 流式细胞 诊断
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