抗Ⅳ型胶原酶胞内抗体对人巨细胞肺癌PG细胞侵袭的抑制作用

目的探讨内质网滞留型胞内抗体对Ⅳ型胶原酶分泌及其对人巨细胞肺癌PG细胞侵袭的抑制作用。方法构建了编码胞浆和内质网滞留型抗Ⅳ型胶原酶抗体的表达载体pcDNA3.1-CP.scFv和pcDNA3.1-ER.scFv。对人巨细胞肺癌PG细胞系进行基因转染。以Western blot检测pcDNA3.1-CP.scFv和pcDNA3.1-ER.scFv的表达,明胶酶谱检测PG细胞Ⅳ型胶原酶分泌情况,Matrigel实验检测细胞侵袭。结果CP.scFv和ER.scFv胞内抗体在PG细胞内表达,ER.scFv对Ⅳ型胶原酶分泌具有显著的抑制作用,对基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶-2的抑制率分别为85.7%和51.2%;而CP.scFv对Ⅳ型胶原酶分泌无抑制作用。ER.scFv编码基因转染的PG细胞与野生型和空白质粒组比较,对体外侵袭有明显的抑制,抑制率为76.3%;而CP.scFv编码基因转染的PG细胞未显示出有抑制作用。结论内质网滞留型胞内抗体技术可以在蛋白加工、分泌通路中抑制Ⅳ型胶原酶的活性,进而抑制肿瘤侵袭,可能在肿瘤基因治疗中具有重要的应用前景。

川芎嗪对乏氧人巨细胞肺癌细胞黏附和侵袭能力的影响

目的：探讨川芎嗪对低氧培养的人巨细胞肺癌（PG）细胞黏附和侵袭力的影响。方法 PG细胞复苏，分别于常氧、低氧环境传代培养，取对数生长期的细胞，分为川芎嗪高、中、低剂量组及顺铂组、阴性对照组，以MTT法检测川芎嗪对常氧和低氧PG细胞黏附能力的影响；Transwell小室侵袭实验检测川芎嗪对PG细胞侵袭能力的影响。结果 MTT法检测PG细胞黏附能力，常氧环境中，川芎嗪高、中、低浓度组、顺铂组、阴性对照组的平均吸光度分别为（0.556±0.040）、（0.519±0.056）、（0.517±0.061）、（0.333±0.057）、（0.300±0.066），各组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。低氧环境中川芎嗪高、中、低浓度组，顺铂组，阴性对照组的平均吸光度分别为（0.482±0.032）、（0.452±0.059）、（0.274±0.093）、（0.464±0.099）、（0.155±0.042），各组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。常氧对照组与低氧对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。低氧环境中川芎嗪高、中、低浓度组对PG细胞黏附的促进率均大于常氧环境（P＜0.01）。Transwell 小室检测 PG 细胞侵袭能力，常氧环境中川芎嗪高、中、低浓度组、顺铂组、阴性对照组侵袭细胞数分别为（28.00±17.00）、（91.67±30.37）、（105.67±39.58）、（85.00±8.19）、（152.33±24.71），差异有统计学意义（P＜0.05）。低氧环境中川芎嗪高、中、低浓度组、顺铂组、阴性对照组侵袭细胞数分别为（20.33±15.31）、（22.33±17.62）、（56.00±11.53）、（57.67±35.95）、（76.33±18.01），差异有统计学意义（P＜0.05）。常氧对照组侵袭细胞数明显多于低氧组对照组（P＜0.01）。结论在低氧环境中，PG细胞对基底膜的黏附和侵袭能力弱于常氧环境；川芎嗪、顺铂在低氧和常氧环境中均可促进PG细胞对基质的黏附，抑制对重建基底膜的侵袭作用，川芎嗪在低氧环境中对PG细胞黏附能力的促进作用更强。

川芎嗪对乏氧人肺癌细胞β1-整合素及钙依赖黏附素表达的影响

目的:探讨川芎嗪对乏氧人巨细胞肺癌(PG)细胞表达β1-整合素和钙依赖黏附素的影响。方法:PG细胞复苏,分为川芎嗪高、中、低剂量组及顺铂组、阴性对照组,置常氧和低氧环境培养,检测E-cadherin(CD324)、β1-整合素(CD29)的表达。结果:PG细胞CD324常氧组表达大于低氧组;在常氧和低氧环境中,各实验组CD324表达均大于对照组;常氧组CD29表达低于低氧组。结论:在乏氧环境下PG细胞有更高的转移能力,川芎嗪能够抑制PG细胞的转移能力。

乌三颗粒抗肺癌细胞的实验研究

目的 探讨乌三颗粒抗肿瘤作用。方法 (1)采用药效学体内实验及体外细胞培养实验相结合 ,观察了本方药在体内对小鼠移植性Lewis肺癌抑制率的影响和在体外3 H -TdR掺入对人巨细胞肺癌株 (A 2 )瘤细胞的生长抑制作用 ;(2 )观察了本方药对PHA诱导小鼠淋巴细胞转化的影响。结果 乌三颗粒在 8 1～ 16 2g/kg的剂量下 ,体内对Lewis肺癌荷瘤小鼠的肿瘤有明显抑制作用 ,其抑制率为 4 0 %～ 5 7% ,与对照组比较P <0 0 5。在体外 0 5～ 8mg/ml的剂量 ,对人巨细胞肺癌株 (A - 2 )表现出较好的生长抑制作用 (P <0 0 1) ;同时能显著提高小鼠淋巴细胞转化率 (P <0 0 5～ 0 0 1)。结论 乌三颗粒对体内、外肺癌有一定的抑制作用 ,同时能增强小鼠免疫功能。

95D细胞转移相关基因在原发灶、循环肿瘤细胞和转移灶中的差异表达

目的利用人巨细胞肺癌高转移株(95D)裸鼠自发转移模型,分析CD9、RHOA、MYL12A、B2M、PTOV1、HSPA1B肿瘤转移相关基因在原发灶、循环血肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)和转移灶中的差异表达。方法根据前期实验结果并利用GoSufer软件进行GO(gene ontology)分析,筛选出可能与肿瘤转移相关的基因CD9、RHOA、MYL12A、B2M、PTOV1、HSPA1B。利用稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的人巨细胞肺癌细胞株95D/GFP,建立肺癌裸鼠自发转移模型,用流式细胞分选术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)分别纯化原发灶、外周血和转移灶中的肿瘤细胞,利用Real-time PCR技术检测上述基因在上述肿瘤细胞中的相对表达量。结果 CD9、RHOA、MYL12A基因在CTCs中表达较少,其次是肝转移灶,在皮下原发灶中表达较多;B2M基因在皮下原发灶、CTCs和肝转移灶中依次降低;PTOV1基因在CTCs中高表达,其次是皮下原发灶,肝转移灶中表达最少;HSPA1B基因只在原发灶中表达。结论 CD9、RHOA、MYL12A、B2M、HSPA1B基因可能是潜在的肺癌转移抑制基因,而PTOV1可能促进肺癌微转移。