人干细胞因子受体c-Kit稳定表达细胞株的构建

干细胞因子 (SCF)是一种重要的造血因子 ,其受体c Kit具有酪氨酸激酶活性 .SCF c Kit介导的细胞内信号转导在造血、肥大细胞的生成及其功能、以及生殖细胞和黑色素细胞的发育中起着关键的作用 .通过构建人c kitcDNA的pcDNA3.1真核表达载体 ,转染不表达人c kit的小鼠髓系祖细胞FDC P1.经Zeocin抗性筛选 ,PCR、RT PCR、Western印迹分析、流式细胞仪分析等方法检测到人c kit基因的稳定整合和表达 ,并分布于细胞表面 ,证明获得了稳定表达人c Kit受体的细胞株 .用MTT法检测重组细胞株增殖特性 ,表明重组人SCF可刺激其增殖 .为进一步研究人c

干细胞因子及其受体c-KIT对羊驼毛囊黑色素细胞增殖与分化的影响及其机制

目的探讨SCF/c-KIT信号通路对羊驼毛囊黑色素细胞分化、增殖和定位的作用及羊驼丰富毛色性状形成的细胞学机制。方法选取8只成年雄性羊驼(4只有色被毛,4只白色被毛),采用免疫组织化学方法研究SCF和c-KIT受体在羊驼皮肤组织中的表达定位;采用实时定量PCR方法分析SCF和c-kit基因在羊驼皮肤组织中的表达水平。结果 SCF和c-KIT受体在不同毛色皮肤组织中均有表达,但在不同被毛颜色羊驼皮肤组织中的表达量和表达部位存在差异;ΔΔCt法统计分析SCF和c-kit基因在不同颜色被毛羊驼皮肤组织中的表达情况显示,SCF基因在有色被毛皮肤组织中的相对表达量是白色被毛皮肤组织的2.41倍,而c-kit基因在有色被毛皮肤组织中的相对表达量是白色被毛组织的1.20倍。结论 SCF/c-KIT信号通路参与调节黑色素细胞在皮肤组织中的增殖、分化;成熟黑色素细胞的数量及其在毛囊组织中的分布位置决定羊驼被毛颜色的形成;SCF信号调节不同分化程度黑色素细胞在毛囊组织中的分布。

血清干细胞因子(SCF)及其受体c-kit的研究进展

血清干细胞因子(SCF)为一种新型多功能的细胞因子,且其是通过骨髓基质细胞所产生的。c-kit是原癌基因编码的I型跨膜糖蛋白受体。SCF/C-kit是人类多种组织和细胞生长、发育、分化和凋亡的重要调控因子。该文主要对血清干细胞因子(SCF)的分布以及特点、C-kit基因生物学特征、SCF/C-kit支气管哮喘进行综述,为SCF/C-kit的作用机制研究和更好地用于支气管哮喘的治疗提供理论依据。

西格列汀激活基质细胞衍生因子-1/CXC趋化因子受体4信号通路对脂多糖诱导的人牙周膜干细胞增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响

目的 探讨西格列汀对脂多糖(LPS)诱导的炎症微环境下人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响及分子机制。方法 体外培养hPDLSCs,用不同浓度的西格列汀处理后检测细胞活力,以确定后续西格列汀实验浓度。采用1μg/mL LPS刺激诱导24 h建立hPDLSCs炎症模型并分为空白组、对照组、西格列汀低浓度组(0.5μmol/L)、西格列汀中浓度组(1μmol/L)、西格列汀高浓度组(2μmol/L)、西格列汀高浓度+基质细胞衍生因子-1 (SDF-1)/CXC趋化因子受体4 (CXCR4)通路抑制剂(AMD3100)组(2μmol/L+10μg/mL)。细胞计数试剂盒-8检测培养24、48、72 h后的hPDLSCs增殖活性;流式细胞术检测培养72 h后hPDLSCs凋亡情况;诱导成骨分化21 d后茜素红染色检测hPDLSCs成骨分化能力,试剂盒测定hPDLSCs中碱性磷酸酶(ALP)活性;酶联免疫吸附检测hPDLSCs培养上清液中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测hPDLSCs中成骨分化相关基因Runt相关转录因子2 (RUNX2)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)及SDF-1和CXCR4 mRNA表达;Western blot检测hPDLSCs中SDF-1、CXCR4蛋白表达。结果 与空白组比较,对照组hPDLSCs增殖活性、矿化结节数量、染色强度、ALP活性和RUNX2、OCN、OPN mRNA及SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平显著降低,凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著升高(P<0.05);与对照组比较,西格列汀低、中、高浓度组hPDLSCs增殖活性、矿化结节数量、染色强度、ALP活性和RUNX2、OCN、OPN mRNA及SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平依次升高,凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平依次降低(P<0.05);AMD3100可部分逆转高浓度西格列汀对LPS诱导的hPDLSCs的作用效果(P<0.05)。结论 西格列汀可能通过激活SDF-1/CXCR4信号通路促进LPS诱导的炎症微环境下hPDLSCs的增殖和成骨分化,抑制hPDLSCs凋亡和炎症反应。

干细胞因子及受体c-kit对A375细胞增殖和凋亡影响的体外研究

目的利用基因工程方法建立稳定表达干细胞因子受体(SCF/c-kit)的恶性黑素瘤A375细胞株,再给予外源性SCF/c-kit,观察其对A375细胞增殖、凋亡的影响。方法通过脂质体转染技术构建稳定表达c-kit的黑素瘤细胞株(hc-kit/A375),给予A375细胞和hc-kit/A375细胞外源性SCF,将所有的细胞分为A375组、A375-SCF组、hc-kit/A375组和hc-kit/A375-SCF组。应用MTT法及流式细胞仪分析细胞的增殖和凋亡,并应用酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫组化方法检测肿瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF),基质金属蛋白酶(MMP)-9及肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达。结果①通过脂质体介导能将c-kit-pcDNA3.1neo重组质粒成功转染入黑素瘤细胞,建立稳定表达c-kit的黑素瘤细胞株hc-kit/A375,hc-kit/A375细胞中c-kit表达明显增加。②给予外源性SCF后,细胞的生长受到抑制,以培养后第5天尤为显著;细胞的凋亡率明显增加,S期比例降低,且hc-kit/A375-SCF组尤明显。③转染后细胞及加入SCF干预组VEGF、MMP-9分泌减少,而TNF-α的分泌增加。结论通过脂质体转染和G418筛选成功构建稳定表达c-kit的A375细胞株;通过增加A375细胞中SCF/c-kit的表达能改变肿瘤细胞对VEGF、MMP-9、TNF-α的分泌,抑制肿瘤细胞的增殖,促进其凋亡。

淋巴瘤患者行干细胞移植联合CD30嵌合抗原受体T细胞输注治疗的护理

目的 总结6例复发/难治性CD30阳性淋巴瘤患者进行自体干细胞移植联合抗CD30嵌合抗原受体T细胞输注治疗的护理经验。方法 对6例复发/难治性CD30阳性淋巴瘤患者,完善治疗前的护理评估,重点落实预处理毒性、细胞因子释放综合征以及植入综合征的护理,并将心理支持及健康教育纳入整个治疗过程。结果 6例患者均成功植入造血干细胞,外周血中检测到持续性CAR30转基因,其中5例完全缓解,1例部分缓解。5例出现细胞因子释放综合征,均为Ⅰ级,未观察到神经毒性。随访20.4(12.1,34.4)个月,患者均存活并保持其反应性。结论 自体干细胞移植联合抗CD30嵌合抗原受体T细胞输注治疗具有良好的耐受性和高度活性,护理在治疗各阶段以及毒副反应管理中发挥重要作用。

针刺联合神经干细胞修复脊髓损伤的科学依据

背景:脊髓损伤是由创伤性或非创伤性事件引起的一种神经系统疾病,常导致损伤节段以下严重功能障碍。近年来,神经干细胞移植被认为在调控脊髓损伤后的炎症反应、抑制胶质瘢痕的过度增生以及促进神经再生方面具有显著的治疗潜力。目的:综述并讨论针刺及神经干细胞移植疗法在抑制脊髓损伤诱导的继发性损伤中的潜在作用机制,深入探讨其治疗脊髓损伤的科学依据。方法:以“脊髓损伤,针刺,神经干细胞,SDF-1α/CXCR4轴”为中文检索词,以“Spinal cord injury,acupuncture,neural stem cells,SDF-1α/CXCR4 axis”为英文检索词,分别检索PubMed、Elsevier、万方及中国知网数据库,最终纳入96篇文献,汇总分析了针刺联合神经干细胞治疗脊髓损伤的相关研究成果,总结了这一联合疗法在治疗脊髓损伤后继发性损伤中的相关机制。结果与结论:①基质细胞衍生因子1α(stromal-derived factor 1α,SDF-1α)/CXC趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)轴在神经干细胞移植治疗脊髓损伤中扮演着至关重要的角色,该信号传导机制不仅影响神经干细胞的迁移、增殖和分化,更是决定干细胞归巢至损伤部位效率的关键因素。因此,针对该轴线的调控,对于提升脊髓损伤的治疗效果具有重要意义。②针刺作为一种传统中医疗法,在脊髓损伤的继发性损伤调控中展现出独特的优势,它能够通过调节炎症反应、抑制细胞凋亡、改善微循环、减少神经胶质瘢痕形成以及对抗氧化应激等多种途径,有效减轻脊髓损伤后的继发性损伤。③针刺还能够影响SDF-1α/CXCR4轴的表达与功能,从而增强神经干细胞的归巢和存活能力,促进神经再生和功能恢复。④结合针刺与干细胞移植的疗法,是一种创新且较好的脊髓损伤治疗策略,适用于修复神经环路,它结合了传统中医的智慧与现代生物技术的优势,为脊髓损伤患者提供了新的治疗选择。然而,目前这种联合疗法仍处于研究和探索阶段,其长期疗效和安全性尚需进一步验证。⑤综合而言,针刺及神经干细胞移植治疗脊髓损伤具有巨大的临床应用潜力,但仍需深入研究和优化治疗方案。未来,期待通过更多的临床试验和机制研究,进一步揭示这一疗法的疗效机制和最佳适应证,为脊髓损伤患者带来更好的康复希望和更高效的治疗效果。

纳洛酮对离体人脑神经元缺氧损伤干细胞因子和受体表达的影响

目的通过检测神经元细胞内干细胞因子(SCF)及其受体c-kit(c-kitR)mRNA表达量的变化探讨纳洛酮对人胚胎大脑神经元缺氧损伤的影响。方法应用无血清方法原代培养人胚胎大脑神经元,于第10天对神经元进行缺氧结合无糖处理。将24孔培养板细胞随机分为4组:对照组(按照正常培养条件同期培养)、单纯缺氧组(缺氧无糖处理0.5h)、纳洛酮0.5组(纳洛酮0.5μg/ml+缺氧无糖处理0.5h)、纳洛酮10组(纳洛酮10μg/ml+缺氧无糖处理0.5h)。分别于复氧24h后测定细胞外液乳酸脱氢酶(LDH)浓度,并应用四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定细胞存活情况。将25ml培养瓶按上述方法分组,分别于缺氧前、缺氧后即刻、复氧3、6、12和24h提取细胞内总RNA,应用逆转录聚合酶链反应扩增后,检测SCF和c-kitRmRNA表达量的变化。结果单纯缺氧组细胞MTT值显著低于对照组(P<0.01),纳洛酮0.5组MTT值显著低于对照组,与单纯缺氧组比较差异无显著性,络洛酮10组MTT升高至对照组水平(P>0.05);单纯缺氧组细胞外液LDH浓度显著高于对照组(P<0.05),纳洛酮0.5组与对照组和单纯缺氧组比较差异均无显著性(P>0.05),络洛酮10组细胞外液LDH浓度降至对照组水平(P>0.05);缺氧后即刻,可见SCF/c-kitRmRNA表达量显著升高(P<0.01),其中SCF表达量在24h内呈双峰分布;给予不同浓度纳洛酮后,随药物浓度的增加,各组表达量峰值降低,并且延迟出现,与对照组比较差异具有显著性(P<0.01)。结论 SCF/c-kitRmRNA在神经元缺氧后早期即表达增高。纳洛酮可以减轻细胞损伤,并可调节SCF/c-kitR的表达。纳洛酮对细胞损伤的保护作用可能涉及对某些细胞因子表达的调控。

当归多糖对小鼠骨骼肌卫星细胞增殖及干细胞因子受体蛋白表达的影响

目的观察在体外造血微环境中,当归多糖(angelica polysaccharides,APS)对不同培养条件下乳鼠骨骼肌卫星细胞(muscle satellite cells,MSCs)增殖及干细胞因子受体蛋白(c-kit)表达的影响。方法原代培养MSC,5天后采用结蛋白(desmin)免疫细胞化学鉴定;细胞随机分为8组,即空白对照组,骨髓基质细胞培养上清组,加入含100、200、300μg/mLAPS的DMEM/F12培养基实验组及经100、200、300μg/mLAPS干预后骨髓基质细胞条件培养基组,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性及对细胞进行c-kit免疫细胞化学染色。结果分离培养的MSCs呈desmin染色阳性;MTT法检测发现各条件培养基实验组MSCs增殖显著;c-kit免疫强阳性反应存在于条件培养基培养的各组MSCs中,c-kit主要表达于细胞质。结论经APS干预的骨髓基质细胞条件培养基可以有效改变MSCs的生长特性,明显促进MSCs增殖及c-kit的表达,c-kit在MSCs增殖过程中可能起某种调节作用。

乳腺癌干细胞及其分化细胞中雌激素受体、孕激素受体和人类表皮生长因子受体2的表达

目的探讨乳腺癌干细胞及其分化细胞中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人类表皮生长因子受体2(HER-2)的表达及意义。方法选取2016年1月至2016年10月新乡医学院第一附属医院标本室保存的新鲜乳腺癌标本35例,制备单细胞悬液,利用免疫磁珠分选法进行细胞分选,分选出乳腺癌干细胞(CD44^+CD24^-/low细胞)和分化细胞(CD44^-CD24^-细胞),利用Envision二步法检测乳腺癌干细胞及其分化细胞中ER、PR、HER-2的表达。结果同一患者的乳腺癌干细胞与分化细胞的ER、PR、HER-2表达呈现出3种情况:(1)乳腺癌干细胞阴性表达,分化细胞阳性表达;(2)乳腺癌干细胞阳性表达,分化细胞阳性表达;(3)乳腺癌干细胞阴性表达,分化细胞阴性表达。分化细胞中ER、PR及HER-2阳性表达率显著高于乳腺癌干细胞(P<0.05)。乳腺癌干细胞及其分化细胞共有4种表型,分别为SR^+HER-2^-、SR^+HER-2^+、SR-HER-2^+和SR-HER-2^-,其中,SR表示ER和(或)PR。乳腺癌干细胞的SR-HER-2^-表型比例最大,分化细胞的SR^+HER-2^-表型比例最大;分化细胞的SR^+HER-2^-、SR^+HER-2^+表型比例显著高于乳腺癌干细胞(P<0.05),分化细胞的SR-HER-2^-表型比例显著低于乳腺癌干细胞(P<0.05),但分化细胞与乳腺癌干细胞的SR-HER-2^+表型比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺癌干细胞中ER、PR、HER-2阳性表达较低,随着乳腺癌干细胞的不断分化,阳性表达逐渐增加。

调节Lnk/干细胞因子-干细胞因子受体通路对糖尿病状态骨髓间充质干细胞成骨功能的影响

目的探讨调节Lnk/干细胞因子(SCF)-干细胞因子受体(c Kit)通路对糖尿病状态大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨功能的影响。方法分离糖尿病大鼠BMSCs,免疫细胞化学染色鉴定后,将细胞分为空白对照组、阴性对照组、RNA干扰组,并用免疫印迹实验检测干扰效果。体外模拟糖尿病状态下诱导BMSCs成骨分化,并检测Lnk/SCF-c Kit通路主要蛋白Lnk、SCF、c Kit及成骨相关蛋白碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原蛋白a1(ColⅠa1)的表达。结果分离培养的细胞表达CD_(44)、CD_(90),不表达CD11b、CD_(45),符合BMSCs表面标记物特征。与其他糖尿病状态BMSCs相比,RNA干扰组Lnk表达降低,SCF、c Kit表达增加(P<0.05)。成骨诱导分化28 d,与其他糖尿病状态BMSCs相比,RNA干扰组细胞Lnk表达降低,SCF、c Kit、ALP、OCN、ColⅠa1表达增加(P<0.05)。结论抑制Lnk表达、激活SCF-c Kit通路可改善糖尿病状态大鼠BMSCs的成骨功能。

神经干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠CXC趋化因子1和2及其趋化因子受体2表达的影响

目的探讨神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脑缺血再灌注损伤梗死区CXC趋化因子1(CXCL1)和CXC趋化因子2(CXCL2)及CXC趋化因子受体2(CXCR2)表达的影响。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型,实验动物随机分为假手术组、模型组和NSCs组。NSCs组尾静脉注射PKH26标志的NSCs细胞悬液,缺血72 h后行神经功能损害评分(NSS),2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法检测脑梗死体积,苏木精-伊红(HE)染色观察梗死区病理变化,Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测梗死区CXCL1、CXCL2、CXCR2蛋白和mRNA表达。结果脑缺血后72 h,模型组和NSCs组NSS评分和脑梗死体积高于假手术组(P<0.05);NSCs组NSS评分和脑梗死体积低于模型组(P<0.05)。HE染色可见模型组梗死区大量炎性细胞浸润,而NSCs组梗死区炎性细胞浸润较少;NSCs组在梗死区有红色荧光信号表达,而假手术组和模型组未发现红色荧光信号。模型组CXCL1、CXCL2、CX-CR2蛋白和mRNA相对表达高于假手术组(P<0.05);NSCs组CXCL1、CXCL2、CXCR2蛋白和mRNA相对表达低于模型组(P<0.05)。结论 NSCs移植具有促进脑缺血损伤神经功能恢复和减少脑梗死体积的作用,其机制可能与其下调炎症趋化因子CXCL1、CXCL2及其受体CXCR2表达、进而抑制炎症反应有关。

促红细胞生成素对兔局灶性脑缺血后干细胞因子及其受体表达的影响

目的探讨局灶性脑缺血后干细胞因子(stem cell factor,SCF)及受体(c-kit)表达的改变和促红细胞生成素(erythropoietin,Epo)干预对其表达的影响。方法成年健康新西兰大耳兔35只,以开颅法建立大脑中动脉闭塞脑缺血模型,分为脑缺血组(15只)、Epo干预组(15只)和假手术组(5只)。核磁共振(MRI)检查脑组织缺血情况,分别于手术后6h、12h和24h取材,用免疫组织化学及图像分析法检测脑缺血皮质区神经细胞内SCF及c-kit的表达改变。结果 MRI检查显示EPO干预组闭塞侧大脑皮层异常信号区域范围较脑缺血组缩小。缺血6h,脑缺血组及Epo干预组与假手术组相比皮质区SCF及c-kit表达未见明显改变。缺血后12h,脑缺血组和EPO干预组缺血侧皮质区SCF及c-kit阳性细胞数量开始增多(P<0.05),于缺血24h明显增多(P<0.01);与脑缺血组相比,EPO干预组皮质区SCF阳性细胞数量于缺血12h显著增多(P<0.01),而c-kit阳性细胞数量则于24h后才增多(P<0.01)。结论 EPO可增加兔脑缺血皮质区SCF及c-kit表达,可能在促进神经干细胞增殖方面起一定作用。

音猬因子的功能受体斑片在培养神经干细胞中的表达

目的 观察在培养的神经干细胞内是否有发育调控分子———音猬因子 (sonichedgehog)功能受体———斑片 (patched)表达。 方法 神经干细胞克隆在体外培养传代后 ,用patched的特异性引物对培养的神经干细胞进行RT PCR分析 ,PCR产物经克隆测序后 ,用地高辛标记克隆的探针 ,对神经干细胞进行原位杂交分析。 结果 神经干细胞克隆内大量的细胞均可表达sonichedgehog的功能受体patched ,patched阳性细胞间未见明显差别 ,克隆边缘与中央的patched分布也未见明显差别。 结论 sonichedgehog信号传导路可能在神经干细胞的增殖与分化过程中起重要作用。

白细胞介素1β预处理骨髓间充质干细胞可影响骨髓瘤细胞株干细胞基因及趋化因子受体基因的表达

背景:既往多项研究提示多发性骨髓瘤患者间充质干细胞的细胞因子分泌、免疫调节、成骨分化等生物功能异常。目的:观察白细胞介素1β单次或多次预处理的正常间充质干细胞后,其再与多发性骨髓瘤细胞株共培养,对骨髓瘤细胞干细胞相关基因、趋化相关受体等表达的影响。方法:实验分为无白细胞介素1β预处理的骨髓间充质干细胞对照组、白细胞介素1β预刺激1 d及白细胞介素1β预刺激7 d组,各组分别培养7 d后,均加入骨髓瘤细胞株H929直接接触共培养。3 d后收集各组中骨髓瘤细胞株H929细胞,分别采用Western blot方法检测各组细胞NANOG、SOX2和OCT-4蛋白的表达水平,RT-PCR方法检测各组细胞趋化因子受体CCR1、CCR2、CCR6和CXCR4的基因表达水平。结果与结论:(1)与对照组比较,H929细胞株和单次白细胞介素1β处理组及多次白细胞介素1β处理组共培养后,SOX2蛋白表达水平升高(P<0.05);(2)与对照组、单次白细胞介素1β处理组比较,多次白细胞介素1β处理组CCR1和CCR2基因的表达水平均增高(P<0.05);(3)实验结果显示,正常骨髓间充质干细胞经炎症因子白细胞介素1β单次或多次刺激后,在与骨髓瘤细胞的相互作用中,对骨髓瘤细胞的干细胞基因表达、细胞趋化因子受体表达等均产生影响。这提示骨髓微环境中异常水平炎性因子,除了直接作用于骨髓瘤细胞之外,很可能通过影响间充质干细胞等非骨髓瘤细胞后,间接参与骨髓瘤疾病的发生和发展,并且其对骨髓瘤细胞的影响效果与白细胞介素1β作用间充质干细胞的时间长短有关。

c-kit及其配体干细胞因子在子宫内膜息肉中的表达及意义

目的探讨c-kit及其配体干细胞因子(stem cell factor,SCF)在子宫内膜息肉(endometrial polyp,EP)中的表达及意义。方法选择2013年6月—2014年6月我院收治的行宫腔镜电切术治疗并经病理检查确诊为EP40例作为EP组,根据月经周期和子宫内膜病理,包括增生期21例和分泌期19例;另选择同期我院收治的行宫腔镜下取环术或子宫纵隔切除术的正常子宫内膜40例作为正常子宫内膜组,根据月经周期和子宫内膜病理,包括增生期23例和分泌期17例。应用免疫组织化学技术分别检测并比较两组标本c-kit及其配体SCF表达。结果两组标本c-kit、SCF均有表达,主要位于组织的腺体上皮细胞胞浆、细胞膜,呈棕黄色或棕褐色,间质也有少量表达。EP组c-kit、SCF表达无论增生期、分泌期均高于同期正常子宫内膜组,差异均有统计学意义(P<0.01);正常子宫内膜组c-kit、SCF增生期表达均弱于分泌期,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 c-kit及其配体SCF与EP形成密切相关,其可能通过抑制子宫内膜组织细胞凋亡,并促进血管生成发育,导致息肉形成。

骨髓间充质干细胞、肿瘤坏死因子受体Ⅱ-抗体融合蛋白和美沙拉嗪对TNBS诱导的结肠炎大鼠疾病活动指数与组织损伤指数的影响

目的:研究骨髓间充质干细胞(MSCs)、肿瘤坏死因子受体Ⅱ-抗体融合蛋白(TNFRⅡ-IgG)和美沙拉嗪对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的结肠炎大鼠疾病活动指数(DAI)与组织损伤指数(TDL)的影响。方法:MSCs应用含10%胎牛血清的低糖DMEM培养。TNBS/乙醇灌肠诱导SD大鼠结肠炎模型。81只SD大鼠随机分成正常对照组(n=15,A组)、结肠炎组(n=15,B组)、MSCs治疗1组(3×106MSCs,n=15,C组)、MSCs治疗2组(5×106MSCs,n=15,D组)、TNFRⅡ-IgG治疗组(n=6,E组)和美沙拉嗪治疗组(n=15,F组)。采用DAI描述大鼠的表现,大体CMDI描述肠道的肉眼下表现,TDI评价肠道组织学改变。结果:MSCs经过3次传代后可纯化。B组大鼠各时点DAI、CMDI和TDI评分均显著高于A组(P<0.05);第6天除A组外各组大鼠评分之间无明显差异(P>0.05);第9天C组、D组和F组各评分均低于B组(P<0.05),C组评分与D组无显著差异(P>0.05);第14天C、D、E和F组评分均低于B组(P<0.05),其中F组评分最高(P<0.05),E组次之(P<0.05),D组评分最低(P<0.05)。结论:MSCs、TNFRⅡ-IgG和美沙拉嗪灌肠液可显著改善TNBS诱导的结肠炎大鼠第14天的DAI、CMDI和TDI指标,其中效果最好的是MSCs,其次是TNFRⅡ-IgG,美沙拉嗪灌肠液效果较差。

核受体相关因子1基因过表达诱导神经干细胞分化为多巴胺能神经元

目的探讨核受体相关因子1(Nurr1)基因对大鼠中脑神经干细胞(NSCs)体外诱导分化为多巴胺能神经元的作用。方法通过基因重组技术构建pEGFP-N1-Nurr1真核表达载体,用电穿孔法将重组质粒转染第3代NSCs,用荧光显微镜观察转染效率,免疫印迹法检测基因表达效果;并对转染后的NSCs进行体外分化培养3周,用免疫荧光双标技术检测酪氨酸羟化酶(TH)和微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达。结果电穿孔法转染NSCs48h后转染效率达35%,1周后免疫印迹法检测到Nurr1蛋白高表达,约为对照组的5倍;Nurr1基因转染的NSCs分化为TH阳性神经元的比率为15.45%,明显高于对照组,而MAP-2阳性神经元数量与对照组相似。结论 Nurr1基因过表达可以诱导NSCs向TH阳性的多巴胺能神经元分化。

骨髓间充质干细胞成骨分化中转化生长因子受体的表达

背景:机体受创后尤其是骨折发生后,骨髓间充质干细胞将启动成骨分化,其表面多种生长因子如碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子、骨形态发生蛋白的受体表达将发生变化。目的:观察骨折损伤后不同时相骨髓间充质干细胞表面转化生长因子受体的表达变化。设计、时间及地点:对照观察实验,于2002-02/2003-11在解放军第三军医大学预防医学院复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成。材料:选用健康成年兔,建立成兔桡骨骨折模型。方法:在造模当日及造模后1,5,10,15,20d抽取实验兔骨髓液,取骨髓有核细胞,纯化间充质干细胞,成骨分化培养基诱导培养。主要观察指标:通过Western-blot法检测转化生长因子β1,β2受体在间充质干细胞上的表达。结果:造模后1d转化生长因子β1受体表达与造模当日比较无明显差异(P>0.05);造模后5d,其表达显著高于造模当日(P<0.05);造模后10d与5d比较无明显差异(P>0.05),但显著高于造模当日(P<0.05);造模后15,20d的转化生长因子β1受体表达显著高于造模当日及造模后5,10d(P<0.01)。造模后1,5d转化生长因子β2受体表达与造模当日无明显差异(P>0.05);造模后10,15d,其表达显著高于造模当日(P<0.05);造模后20d转化生长因子β2受体的表达显著高于造模当日及造模1,5,10,15d(P<0.01)。结论:创伤后体内骨髓间充质干细胞成骨分化过程中转化生长因子β1,β2受体的表达呈现逐渐增高的趋势。