人类平衡型核苷转运蛋白1高表达晚期非小细胞肺癌患者术后应用不同剂量吉西他滨治疗的临床效果观察

目的 观察晚期非小细胞肺癌（NSCLC）中人类平衡型核苷转运蛋白1（hENT1）高表达患者应用不同剂量吉西他滨治疗的临床效果.方法 选取2008年7月至2013年12月于浙江金华广福医院行晚期NSCLC手术后,病理确诊晚期NSCLC患者,采用免疫组织化学SP法检测肺癌组织中hENT1抗体的表达水平.62例hENT1高表达患者入组,按随机数字表分组法分为对照组（30例）和观察组（32例）.对照组采用常规剂量吉西他滨（1 000 mg/m2）联合顺铂进行化疗,观察组用低剂量吉西他滨（250 mg/m2）联合顺铂进行化疗,观察2组近期疗效、化疗不良反应.采用生活质量调查核心量表QLQ-C30和肺癌专用量表QLQ-LCl3比较2组化疗后生活质量.结果 对照组和观察组近期有效率和疾病控制率差异无统计学意义[43.3％ （13/30）比46.9％ （15/32）,76.9％ （23/30）比81.2％（26/32）]（x2 =0.08,x2 =0.20,P＞0.05）.观察组Ⅲ、Ⅳ度白细胞减少、血小板减少及恶心、呕吐发生率低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;除角色功能外,观察组化疗后总体生活评分及躯体功能、情绪功能、认知功能、社会功能、经济状况各项评分均优于对照组[（54±20）分比（54±16）分,（72±25）分比（62 ±20）分、（85 ±20）比（72±19）分、（76±28）分比（62±25）分、（61 ±24）分比（49 ±30）分、（36±24）分比（56±21）分],差异均有统计学意义（均P＜0.05）.观察组除乏力症状外其他症状评分均优于对照组（P＜0.05）.结论 对于晚期NSCLC术后hENT1高表达患者,在保证化疗效果的同时,相对于常规剂量吉西他滨,低剂量用药可有效降低化疗过程中不良反应,提高患者的生活质量.

人类平衡型核苷转运蛋白3的功能及与疾病的研究进展

平衡型核苷转运蛋白(equilibrative nucleoside transporter,ENT或SLC29)作为非浓度依赖型的核苷和核碱基转运体,以低亲和性结合核苷及其类似物跨膜向相对浓度较低的一方扩散;作为真核生物体内核苷、核碱基、抗肿瘤和抗病毒感染的核苷类似物转运体,在遗传物质的合成、抗肿瘤和抗病毒感染发挥着重要的作用。人类平衡型核苷转运体3(human balanced nucleoside transporter 3,hENT3)是溶质载体29(SLC29)基因家族中主要的细胞内转运体,该蛋白具有非常长的亲水性N-末端区域,内含溶质体、双亮氨基酸,强烈依赖于pH值。hENT3蛋白主要存在于细胞内溶酶体和线粒体中,对胞内核苷、核碱基及核苷类似物转运有重要的研究意义。但目前对于hENT3的研究还处于探索阶段,其转运模式及其与疾病发生发展的关系需要进一步研究。本文将对hENT3及其与疾病的研究进展进行论述,期待对hENT3有一个全面的了解,有助于后期的进一步研究。

阿糖胞苷作用下白血病细胞膜人核苷转运体1基因表达变化研究

目的检测肿瘤细胞膜上人平衡型核苷转运体1(human equilibrative nucleoside trans-porter 1,hENT1)基因表达及其变化,探索影响阿糖胞苷(Ara-C)治疗急性白血病(AL)疗效的相关因素。方法根据目前临床采用的低剂量、中剂量和大剂量Ara-C(HD-AraC)治疗时所能达到的血浆药物浓度,分别采用0.5～100μmol/L中的6种不同剂量(0.5、1.0、5.0、15、50、100μmol/L)体外作用于白血病细胞株Jurkat和NB4,经4～48 h的5个时间段(4、8、12、24、48 h)作用后,采用定量RT-PCR方法测定hENT1 mRNA表达及其变化。结果 (1)Jurkat和NB4细胞的hENT1mRNA原始相对表达量(ΔCt值)分别为5.21±0.02和5.34±0.05,两者差异无显著性(P>0.05)。(2)在较低剂量Ara-C(0.5～15μmol/L)作用下,hENT1 mRNA表达恒定,与阴性对照组差异无显著性(P>0.05);但在高浓度Ara-C(50μmol/L和100μmol/L)作用48 h后,Jurkat和NB4细胞的hENT1 mRNA表达明显增强,ΔCt分别为2.02±0.17和2.19±0.02,与对照组(5.21±0.02)比较差异均有显著性(P<0.05)。(3)同一种细胞在50μmol/L和100μmol/L两个剂量组的hENT1mRNA表达增高程度,差异无显著性(P>0.05);分别来源于ALL和AML的Jurkat和NB4细胞的表达量间差异亦无显著性(P>0.05)。结论 HD-AraC处理48 h后,Jurkat和NB4细胞的hENT1mRNA表达可明显提高,有利于药物进入细胞,以增强抗白血病效应,推测临床HD-AraC疗法采用48～72 h的疗程是必要的。

白细胞介素-28B和平衡性核苷转运载体1基因多态性与HIV／HCV合并感染者HCV自发清除的关系研究

目的分析湖南省HIV／HCV合并感染者的白细胞介素-28B（IL-28B）和平衡性核苷转运载体1（ENT1）基因多态性与HCV自发清除的关系。方法对湖南省107例HIV／HCV合并感染者的IL-28B和ENT1基因位点（rs12980275、rsl2979860、rs8099917和rs760370）进行分型，比较其在慢性肝炎组和自发清除组的基因多态性分布。结果在HIV／HCV合并感染者中，IL-28B基因rs12980275、rs12979860和rs8099917位点的主要基因型分别为AA、CC和TT型，均占84．1％。3个位点高度连锁不平衡（r2〉0．94），慢性肝炎组和自发清除组基因型分布差异有统计学意义（P〈0．05），携带IL-28B主要基因型的感染者更易发生HCV自发清除。ENT1基因的rs760370位点基因型分布在两组间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论IL-28B基因AA、CC和TT型与HCV自发清除有关。

hENT1蛋白和RRM1蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨人类平衡型核苷转运载体1(hENT1)及核糖核苷酸还原酶M1(RRM1)在非小细胞肺癌(NSCLC)发病、预后中的作用及机制。方法应用免疫组化方法检测54份NSCLC组织及癌旁正常组织中hENT1、RRM1蛋白表达情况,并分析其与NSCLC临床病理特征及接受含吉西他滨方案化疗患者生存时间的相关性。结果hENT1蛋白及RRM1蛋白在NSCLC组织中的阳性表达率均显著高于癌旁正常肺组织(P<0.05),但均与年龄、性别、生存时间等临床特征无显著相关性;hENT1蛋白阳性表达、RRM1蛋白阴性表达者生存时间显著高于RRM1蛋白表达阴性、hENT1蛋白表达阳性者(P<0.05)。结论hENT1蛋白和RRM1蛋白在NSCLC发病中具有一定作用,二者可通过调节化疗药物敏感性影响患者预后;联合检测上述两种蛋白表达有利于为患者制订个体化治疗方案。

RRMl、hENT1的表达与胰腺癌吉西他滨化疗疗效相关性研究进展

胰腺癌预后较差,化疗在胰腺癌的治疗中发挥重要作用。以吉西他滨的主的化疗方案是胰腺癌化疗的标准方案。而吉西他滨耐药仍然是延长患者总生存(overall survival,OS)和无病生存期(disease free survival,DFS)的重要阻碍。目前研究表明,在多种吉西他滨耐药细胞系中RRM1和h ENT1有不同程度表达。而目前通过对RRM1、h ENT1等相关基因的表达预测吉西他滨的化疗效果的研究仍处于初级阶段,有待更进一步的研究。本文对RRM1、h ENT1的表达与吉西他滨化疗的耐药性及预后新进展作一综述。

hENT-1表达水平对胰腺癌吉西他滨辅助化疗的影响

目的:本研究探讨胰腺癌hENT-1表达水平对吉西他滨辅助化疗的影响。方法:利用胰腺癌组织切片,行hENT-1免疫组织化学实验,针对其染色强度、范围计算评分。追踪回访对应患者的预后情况后行统计学分析。结果:hENT-1高表达组与低表达组的OS为20个月对10个月,DFS为15个月对6个月。OS的独立预后因素是hENT-1表达水平、淋巴转移情况和病理分级。DFS的独立预后因素是hENT-1表达水平和病理分级。病人之间临床资料与hENT-1表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:胰腺癌细胞中hENT-1的表达水平可能影响吉西他滨辅助化疗敏感性,hENT-1高表达者使用吉西他滨辅助化疗后的OS及DFS较低表达者长。

ENT1在人肝癌细胞中的表达特征及临床意义

目的:探讨ENT1在人肝癌细胞株中的表达特征及其临床意义.方法:人肝癌细胞HuH-7、HepG2、Hep3B并选择人乳腺癌细胞MCF-7为对照,采用免疫荧光法检测细胞中ENT1的定位表达;RT-PCR法检测细胞中ENT1mRNA的表达;CDKs特异性抑制剂干预人肝癌细胞HuH-7的细胞周期,RT-PCR法检测细胞不同周期ENT1mRNA的表达特征.结果:3株人肝癌细胞膜上均可见ENT1的表达;肝癌细胞中ENT1mRNA的表达水平均高于乳腺癌细胞;不同肝癌细胞株中ENT1mRNA的表达水平存在差异(HuH-7:0.756±0.019,HepG2:0.469±0.041,Hep3B:0.580±0.030,MCF-7:0.356±0.029);肝癌细胞被阻滞在G0/G1期后,ENT1mRNA的表达水平明显上调(0.737±0.017vs0.345±0.027,P<0.05).结论:人肝癌细胞膜上普遍存在较高的ENT1表达,不同的肝癌细胞及不同的细胞周期其表达均存在差异.ENT1在人肝癌细胞中的表达特征对临床化疗策略具有潜在的临床价值,并为认识肝癌的耐药机制提供新的思路.

Mdivi-1对匹鲁卡品致痫大鼠海马神经元保护作用及其机制研究

目的研究线粒体分裂蛋白抑制剂(Mdivi-1)对癫痫大鼠行为学及海马区线粒体动力相关蛋白1(DRP1)、平衡型核苷转运载体1(ENT1)蛋白的影响。方法20只雄性SD大鼠随机均分为正常组、模型组、DMSO组、Mdivi-1组。观察各组大鼠行为学改变,透射电镜观察脑组织结构变化;免疫组化及免疫荧光法检测各组大鼠海马区DRP1表达;Western blot检测各组大鼠海马区DRP1、ENT1蛋白变化。结果与模型组或DMSO组相比,Mdivi-1组大鼠癫痫发作潜伏期明显增加而发作频率下降(P<0.05);电镜观察结果显示,模型组部分内外膜崩解,线粒体明显破坏、肿胀而Mdivi-1组损伤情况减轻;免疫组化结果显示,模型组大鼠脑组织海马区DRP1阳性细胞数增多,而Mdivi-1组阳性细胞数下降(P<0.05);免疫荧光显示,DRP1在海马神经元中有表达;Western blot结果显示,与正常组相比,DMSO和模型组中ENT1、DRP1蛋白表达升高,而Mdivi-1组中ENT1、DRP1蛋白表达下降(P<0.05)。结论Mdivi-1能靶向阻断DRP1,调控线粒体动力学平衡,从而影响ENT1表达,对海马神经元具有神经保护的作用。

低剂量吉西他滨化疗在溶质载体家族1号基因T1288A突变型胰腺癌中的疗效

目的探讨低剂量吉西他滨化疗在溶质载体家族1号基因（SLC29A1）T1288A突变型胰腺癌患者中的疗效及不良反应。方法以收治的SLC29A1基因T1288A突变型中晚期胰腺癌患者共72例，随机归入实验组（低剂量吉西他滨，600 mg/m2）36例和对照组（标准剂量吉西他滨，1 000 mg/m^2）36例，观察评价化疗疗效及不良反应。结果疗效比较中，实验组与对照组各项指标比较差异均无统计学意义。不良反应比较中，实验组白细胞减少、血小板减少、红细胞减少、恶心呕吐、肝损害、腹泻、皮疹和瘙痒、流感样症状发生率分别为3例（8.3%）、3例（8.3%）、4例（11.1%）、6例（16.7%）、2例（5.6%）、3例（8.3%）、1例（2.8%）、1例（2.8%）；对照组为12例（33.3%）、15例（41.7%）、13例（36.1%）、20例（55.6%）、2例（5.6%）、4例（11.1%），1例（2.8%）、1例（2.8%），不良反应中白细胞减少（P＝0.009）、血小板减少（P＝0.001）、红细胞减少（P＝0.013）、恶心呕吐（P＝0.001），差异有统计学意义。通过随访观察两组6个月和1年生存期比较差异无统计学意义。结论对于SLC29A1基因T1288A突变型胰腺癌患者，在一定范围内给予低剂量吉西他滨化疗，在不降低化疗疗效同时可有效减少化疗不良反应。

非小细胞肺癌吉西他滨药物耐药相关基因研究进展

随着药物基因组学、药物遗传学的发展,基因指导下个体化治疗成为提高非小细胞肺癌(non-smallcell lung cancer,NSCLC)化疗疗效的有效途径之一。确定药物的相关预测性分子标志物从而指导临床治疗、提高疗效被广泛关注。吉西他滨是目前NSCLC常用化疗药物之一,本文主要阐述了近年来吉西他滨药物耐药相关基因在NSCLC个体化治疗方面的研究进展。

胰腺癌hENT1蛋白表达与吉西他滨化疗疗效及预后的相关性

目的探讨胰腺癌人平衡型核苷酸转运体1(hENT1)蛋白的表达与吉西他滨化疗疗效、不良反应及预后的关系。方法收集2013年6月至2016年1月间嘉兴市第二医院肝胆胰外科及嘉兴市中医院肝胆胰外科收治的83例胰腺癌患者经内镜超声下细针穿刺活检的组织。采用免疫组织化学法检测hENT1蛋白的表达,分为hENT1低表达组和高表达组;依据化疗的疗效分为吉西他滨有效组和耐药组。比较两组患者的临床病理参数、不良反应发生率、中位生存期和无进展生存率(PFS)。结果 83例胰腺癌组织中37例(44.6%)hENT1高表达,46例(55.4%)低表达。吉西他滨化疗疗效与患者的性别、年龄、临床症状及肿瘤原发部位、肿瘤大小、TNM分期、CA19-9水平、CEA水平、有无肝脏转移均无相关性,但hENT1高表达组的吉西他滨耐药率显著高于低表达组(78.1%比50.0%),差异有统计学意义(P=0.010)。两组患者均可以耐受吉西他滨化疗不良反应,无化疗相关性死亡,但hENT1低表达组患者白细胞、血小板减少发生率显著高于hENT1高表达组(63.0%比21.6%,47.8%比16.2%),差异均有统计学意义(P值均<0.05)。hENT1低表达组中位生存期和1年PFS均显著低于高表达组(11个月比15个月,19.4%比50.0%),差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论胰腺癌组织中hENT1蛋白表达下降降低了患者对吉西他滨化疗的疗效,增加患者白细胞、血小板减少的发生率。

ABCG1基因多态对转录活性及冠心病易感性的影响

目的探讨三磷酸腺苷结合盒子转运体G1 （ATP binding cassette transporter，ABCG1）启动子多态性对其转录活性的影响及其与冠心病（coronary atherosclerotic disease，CAD）易感性的关系。方法采用病例对照研究，对217例CAD患者和142例对照者的ABCG1近端启动子区转录启始位点上游约1 000 bp核苷酸序列进行测序分析，分析CAD组和对照组、早发冠心病组和非早发冠心病组、多支病变组和单支病变组间单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms, SNPs）和单倍型的频率分布差异。采用等位基因特异引物测序或基因克隆测序鉴定启动子单倍型，选用双荧光素酶报告基因系统检测不同单倍型转录活性的差异。两组间的频率分布比较采用χ2检验或Fisher精确检验，组间荧光素酶活性差异比较采用成组t检验或单因素方差分析。结果在约1 000 bp启动子序列中发现3个SNPs[ -384（A/G）、-204（A/C）和-134（T/G）]，可形成ACG、GAT和GCG 3种单倍型，3个SNPs间强连锁不平衡，Tajima’s D＝2.655（P〈0.01）。3个SNPs频率和单倍型频率在CAD组和对照组间无统计学意义，与冠状动脉血管病变严重程度和早发冠心病无显著相关性。3种启动子单倍型的转录活性比较无统计学意义，但将GAT突变为GAG后，转录活性明显增强（P〈0.05）。结论ABCG1启动子A区的3个SNPs组成的3种单倍型对启动子活性无影响，该区域的SNPs及其组成的单倍型的频率分布与CAD的易感性无显著性相关。