异质性胞核核糖核蛋白A2/B1 hnRNP A2/B1基因克隆及其在滑膜组织中的表达

目的获得hnRNPA2/B1cDNA序列,研究其在滑膜组织中的表达水平,探讨它在类风湿滑膜炎中可能的致病作用。方法从人外周血单个核细胞中提取总RNA进行逆转录反应,经PCR扩增目的片段,将其克隆于PUC-T1质粒上,并经酶切电泳、DNA测序鉴定分析。采用免疫组化和原位杂交方法,分别利用单克隆抗体和特异的cDNA探针,检测滑膜组织中hnRNPA2/B1的含量及表达水平。结果从人外周血单个核细胞总RNA中扩增得到目的片段,并经测序证实该片段为hnRNPA2/B1的编码序列。免疫组化和原位杂交显示hnRNPA2/B1在类风湿关节炎(RA)滑膜中的表达水平整体上较骨关节炎(OA)和正常对照滑膜组高(P<0.05)。结论成功克隆hnRNPA2/B1cDNA;初步证明hnRNPA2/B1水平在RA关节局部增高,推测它可能参与了类风湿滑膜炎的发病。

异质性胞核核糖核蛋白I(hnRNP I)抗原表位在系统性硬化症中的临床研究

目的探讨异质性核糖核蛋白I(hnRNPI)的抗原表位多肽在系统性硬化症(SSc)中的临床意义,初步建立简便快捷的ELISA检测方法,为系统性硬化症的早期诊断寻找新的临床指标。方法根据已知的hnRNPI蛋白氨基酸序列,应用不同的蛋白质抗原表位图谱分析软件对其进行表位分析,经比对筛选后,化学合成hnRNPI短肽序列2个,分别命名为hnRNPI-1(I-1)及hnRNPI-2(I-2),作为抗原,对321例包括硬皮病在内的多种结缔组织病患者血清相应抗体进行ELISA检测。结果抗hnRNPI-1及抗hnRNPI-2多肽抗体在SSc组中阳性率为43.4%及47.8%,均显著高于其他疾病组(P﹤0.05),在SSc中敏感性分别为43.4%及47.8%,特异性分别为88.6%及87.6%,二者之间均无显著性差异(P﹥0.05)。除与SSc患者病程相关外,该二抗体与发病年龄、临床症状、器官受累、血沉、抗Scl-70抗体及抗着丝点抗体之间均无显著性差异(P﹥0.05)。结论I-1及I-2分别是位于hnRNPI蛋白表面的抗原表位之一,具有抗原性,其抗体对SSc的临床诊断具有较高的敏感性及特异性,且在病程早期具有更高的阳性率,有助于SSc的早期诊断。

抗异质性胞核核糖核蛋白(hnRNP)抗体与自身免疫病的关系

抗异质性胞核核糖核蛋白(hnRNP)抗体在自身免疫性疾病的研究中具有重要意义.类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)和混合型结缔组织病(MCTD)中的抗hnRNP抗体主要是针对hnRNPA/B蛋白质,其中针对3种hnRNP蛋白质A2、B1、B2(RA3复合物)的自身抗体又称抗RA33抗体,检查抗RA33抗体有助于RA的早期诊断.抗hnRNP抗体不仅是有价值的诊断指标,而且在自身免疫性疾病发病机制的研究中也具有重要意义.

人异质性胞核核糖核蛋白I(hnRNP I)原核表达及初步应用

目的:克隆人异质性胞核核糖核蛋白I(hnRNP I)基因并构建原核表达载体,用纯化的重组蛋白进行系统性硬化症(SSc)体外诊断应用研究。方法:从体外培养的HeLa细胞中提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增hnRNP I基因,构建原核表达载体pET-30a-hnRNP I,在原核表达系统E.coliBL21(DE3)中表达重组蛋白。重组蛋白纯化后作为抗原对包括系统性硬化症(SSc)、系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征(SS)、混合型结缔组织病(MCTD)、未分化型结缔组织病(UCTD)、类风湿性关节炎(RA)、正常对照(control)在内的血清相应抗体进行ELISA检测。结果:成功构建了原核表达载体pET-30a-hnRNPI,在IPTG诱导下在E.coli BL21(DE3)中高效表达相对分子质量(Mr)为59600的重组hnRNP I蛋白,重组蛋白可以可溶蛋白和包涵体蛋白两种形式存在。hnRNP I蛋白抗体在SSc中阳性率(48.72%)明显高于其他各组(P<0.05)。结论:利用构建的原核表达载体成功表达出hnRNP I蛋白,此重组蛋白可用于SSc的临床诊断检测。

HSVⅠ感染L-02细胞对核不均一性核糖核蛋白H2(hnRNP H2)表达影响

单纯疱疹病毒(HSVⅠ)对宿主细胞转录及mRNA修饰翻译通路的调控是一个系统的、复杂的体系,探索其具体机制将有助于了解病毒复制过程及与宿主细胞之间的相互作用。基于2-DE分析,人正常肝细胞L-02细胞核不均一性核糖核蛋白H2(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H2,hnRNP H2)在感染HSVⅠ前后存在表达差异,通过Western blot,Northern blot等技术方法验证其在病毒复制过程中不同时段对其表达影响。

异质性胞核核糖核蛋白A2在类风湿关节炎诊断中的临床意义

目的探讨异质性胞核核糖核蛋白A2(hnRNP A2)在类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)诊断中的临床意义,建立简便、快捷的ELISA检测方法,并与国外Anti-RA33 Ab试剂盒的结果对比,以作为验证国内试剂盒可用性的依据。方法以高纯度的具有抗原反应性的重组hnRNP A2蛋白作为抗原,对临床上包括137例RA在内的多种结缔组织病患者的血清中的相应抗体进行ELISA检测。应用国外Anti-RA33 Ab试剂盒ELISA法检测并对比检测结果。结果hnRNP A2在RA患者中的敏感性为37.23%,特异性为85.44%,抗hnRNP A2/RA33抗体在RA患者中阳性率均明显高于其他疾病组(P<0.05)。抗hnRNP A2/RA33抗体在早期RA患者中的阳性率为43.75%。与国外Anti-RA33 Ab试剂盒检测结果比较,在各组患者中检测抗RA33抗体的阳性率无明显差别(P>0.05),且总体符合率高达86.88%。另外,该抗体与年龄、病程、晨僵时间、血沉、C反应蛋白、关节功能、X线分期、类风湿因子(RF)、抗角蛋白抗体(AKA)、抗核周因子抗体(APF)及抗CCP抗体之间均无相关性(P>0.05)。结论我们初步纯化了RA33抗原,对hnRNP A2进行了基因的克隆、重组蛋白的表达和纯化,并以其为抗原,用ELISA方法检测抗hnRNP A2/RA33抗体是早期诊断RA的可靠方法。与国外Anti-RA33 Ab试剂盒的检测结果对比无明显差异,自制的抗RA33抗体试剂盒可以可靠地应用于临床检验。

异质性胞核核糖核蛋白与肺癌发生发展的关系

肺癌发生于支气管黏膜上皮，亦称支气管癌。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率明显升高，在男性癌症患者中，肺癌已居首位，在发达国家31％的男性癌症患者死于肺癌：女性发病率也迅速升高，25％的女性癌症患者死于肺癌，甚至超过乳腺癌。目前，对于肺癌的筛查仍然没有一种确切的方法，胸透和痰细胞学很常用，但是敏感度不高。随着基因组学和蛋白质组学研究的迅猛进展，分子靶向标记在肺癌的早期检测中起着越来越重要的作用。

异质性胞核核糖核蛋白K在肝癌组织及不同密度肝癌细胞中的表达

目的:观察异质性胞核核糖核蛋白K(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K,hnRNPK)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及在不同密度肝癌细胞(PLC/PRF/5)中的亚细胞定位。方法:免疫组化染色观察肝细胞癌组织中hnRNPK的表达;Western印迹检测肝癌组织(n=30)及对应癌旁组织hnRNPK蛋白表达差异;应用细胞免疫组化和Western印迹法比较不同密度肝癌细胞hnRNPK蛋白的亚细胞定位及表达。结果:肝细胞癌组织hnRNPK蛋白主要表达于细胞核。hnRNPK蛋白表达在30例的肝癌组织中有21例高于其对应的癌旁组织;20倒HBV阳性肝癌组织有16例高于其对应的癌旁组织,而10例HBV阴性肝癌组织仅有5例表达高于癌旁组织。细胞免疫组化结果表明。hnRNPK主要表达于PLC细胞核中,并且随密度(汇合率为30%、50%、90%)的上升。其表达量逐渐上升。Western印迹结果表明,不同密度(汇合率为30%、50%、70%、90%)肝癌细胞的细胞质中,hnRNPK的表达量无统计学差异;而在细胞核中,随着细胞密度的增大,hnRNPK的表达量逐渐升高。结论:肝癌组织细胞核hnRNPK表达上调,且随着肝癌细胞密度的增加。其表达会逐渐增强,HBV感染可能会促进其表达。

异质性胞核核糖核蛋白K与肿瘤研究的最新进展

近几十年来,癌基因和抑癌基因一直是肿瘤生物学中的一个重要分类,然而对于一些基因却很难将其归类。异质性胞核核糖核蛋白K(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K,HNRNPK)是一个核酸结合蛋白,参与了基因表达调控、信号转导等很多细胞进程。近些年发现HNRNPK在多种肿瘤中过表达,且其过表达与患者的预后呈负相关,提示其可能在这些肿瘤中发挥癌基因的功能。然而,在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的研究报道中发现HNRNPK可能扮演抑癌基因的角色。因此,本文对HNRNPK在肿瘤发生发展中的分子功能及作用机制的最新进展进行综述。

痰液异质性核核糖核蛋白A2/B1与端粒酶逆转录酶检测在肺癌诊断中的探讨

肺癌是世界范围内致死率最高的癌症,而肺癌的预后与诊断时的临床分期密切相关,因此"早期发现、早期诊断、早期治疗"是降低肺癌病死率的重要措施。肺癌高危人群痰脱落细胞中有异质性核核糖核蛋白A2/B1与端粒酶逆转录酶活性的高表达,通过联合检测是否可发现处于早期和可治疗阶段的肿瘤,从而潜在降低肺癌的病死率,因此痰液异质性核核糖核蛋白A2/B1和端粒酶逆转录酶的联合检测是对肺癌早期诊断的一个有益探索。

WASH通过与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用调控选择性剪接和基因转录

目的探讨Wiskott-Aldrich综合征蛋白和富含脯氨酸同源物(WASH)与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用及其生物学功能.方法利用质谱鉴定、免疫共沉淀技术,研究WASH复合体核心成员WASH/FAM21与hnRNP A1相互作用.使用实时定量PCR检测WASH沉默细胞与对照细胞中端粒长度.使用RNA-Seq检测WASH沉默细胞与对照细胞转录谱.结果质谱鉴定结果显示包括hnRNP A1在内的多种hnRNP家族成员与FAM21-d219N相互作用.免疫沉淀结果验证了内源WASH/FAM21与hnRNP A1的相互作用.WASH沉默并未对端粒的相对长度产生影响,但明显提高了外显子跳跃的数量,并且影响包括部分核因子κB(NF-κB)靶基因在内的数百基因的转录.结论细胞核内的WASH可与hnRNP A1相互作用,参与选择性剪接和基因转录的调控.

核糖核蛋白hnRNPK结合lncRNA调控肿瘤发生发展的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)参与肿瘤发生和发展过程,可作为肿瘤诊断与治疗的靶点。异质性胞核核糖核蛋白(hnRNP)家族成员hnRNPK广泛分布于多种肿瘤细胞内,具有调控基因表达、信号转导等功能。hnRNPK作为高度保守的DNA/RNA结合蛋白,可与lncRNA相互作用调控基因的转录、剪切、翻译过程,影响肿瘤的进展。因此,了解hnRNPK和lncRNA的功能及作用机制,特别是深入研究hnRNPK与lncRNA相互作用在肿瘤中的功能,可为肿瘤的临床治疗提供参考。

核内不均一核糖核蛋白在前体mRNA加工中的功能

核内不均一核糖核蛋白(hnRNP)是一类存在于真核生物体内具有类似结构特征的高丰度RNA结合蛋白,一般均匀分布在核内。多种hnRNP具有多样的功能,参与从转录调节,前体mRNA剪接,mRNA输出到mRNA降解等多种生物过程,从而进行基因表达调控。现着重介绍hnRNP在前体mRNA加工过程(加帽,剪接,加尾,输出,选择性降解)中的功能及研究进展。

核内不均一核糖核蛋白A3与疾病关系的研究进展

核内不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNP)是人体内一大类的RNA结合蛋白家族,该家族可作为“RNA骨架”,参与核酸代谢的多个环节,包括可变剪接、信使核糖核酸(message RNA,mRNA)稳定以及转录和翻译调控等方面,并最终在细胞的生物学过程中发挥关键作用。与该家族中被广泛关注的成员hnRNP A1、hnRNP A2/B1相比,hnRNP A3是一个较少被研究的蛋白。本文就hnRNP A3在多种疾病中的表达情况、临床价值以及内在机制的研究进展做一综述,旨在为相关疾病的机制探讨及新型治疗靶点的挖掘提供依据。

肾透明细胞癌组织浸润CD8+T细胞中异质性胞核核糖核蛋白A2B1的表达及其临床意义

目的探讨异质性胞核核糖核蛋白A2B1(HNRNPA2B1)在肾透明细胞癌(ccRCC)组织浸润CD8+T细胞中表达分布特征及其临床意义。方法利用基因表达综合数据库(GEO)公共数据分析HNRNPA2B1在ccRCC组织浸润免疫细胞以及CD8+T细胞亚群中的表达分布;转录组测序技术(RNA-seq)差异分析高、低表达HNRNPA2B1 ccRCC患者高变免疫基因并富集相关通路。多标记免疫荧光染色(mIHC)检测223例ccRCC患者癌组织和癌旁正常组织浸润CD8+T细胞中HNRNPA2B1的表达分布特征,采用R语言做统计分析,经单因素Cox、最优子集回归和LASSO回归交叉验证筛选临床因素并纳入多因素Cox回归构建列线图预测模型。Wilcoxon检验用于组间差异显著性分析,生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验。结果HNRNPA2B1在CD8+T细胞上高表达并参与抗原加工呈递、T细胞增殖调节等多个信号通路。肾透明细胞癌患者肿瘤组织浸润HNRNPA2B1+CD8+T细胞比率高于癌旁正常组织[1.26%(0%,35.56%)比0.28%(0%,13.35%),4.5,U=6287,P<0.01]。肿瘤组织低浸润HNRNPA2B1+CD8+T细胞患者总体生存期(OS)显著差于高浸润患者[风险比(HR)=0.41;95%可信区间(CI):0.16~1.07,P<0.01]。对单因素Cox、最优子集回归筛选得到的年龄、病理分级、TNM分期和HNRNPA2B1+CD8+T细胞浸润程度(P<0.05)构建列线图风险预测模型。公共单细胞数据分析结果表明HNRNPA2B1在增殖CD8+T细胞上高表达。结论肾透明细胞癌组织浸润CD8+T细胞HNRNPA2B1蛋白水平表达的降低表明其参与肾透明细胞癌的进展过程。

抗异质性胞核核糖核蛋白A2/RA33抗体酶联免疫吸附法的建立及临床应用

目的 探讨酶联免疫吸附法 (ELISA)检测抗异质性胞核核糖核蛋白A2 (hnRNPA2 ) /类风湿关节炎 (RA) 33抗体在不同风湿性疾病患者中的阳性率及对RA早期诊断的意义。方法 以纯化的重组蛋白hnRNPA2为抗原 ,用ELISA检测RA 179例、系统性红斑狼疮 (SLE) 14 1例、其他弥漫性结缔组织病 (CTD) 97例、血清阴性脊柱关节病 (SPA) 30例、骨关节炎 (OA) 10例、关节痛 /关节炎5 9例、正常对照 4 0名 ,比较抗hnRNPA2 /RA33抗体在各组人群中的阳性率 ,并评价其与RA患者临床和实验室检查指标间的关系及早期诊断的价值。结果 抗hnRNPA2 /RA33抗体在RA患者中的敏感性为 36 9%、特异性为 87 1% ,在SLE、其他CTD、SPA和OA患者中阳性率分别为 19 2 %、7 2 %、6 8%和 0。抗hnRNPA2 /RA33抗体在早期RA患者中的阳性率为 4 3 3%。结论 以纯化的重组蛋白hnRNPA2为抗原的ELISA是检测抗hnRNPA2 /RA33抗体 ,早期诊断RA的可靠方法。

异质性胞核核糖核蛋白A2基因的克隆、表达、纯化及其临床应用

目的 构建含异质性胞核核糖核蛋白A2 (hnRNPA2 )cDNA片段的基因克隆 ,制备并纯化重组蛋白hnRNPA2 ,用以检测抗hnRNPA2 RA33的抗体。方法 从人外周血单个核细胞提取细胞总RNA ,应用RT PCR方法扩增hnRNPA2cDNA ,将其克隆于pUC T1质粒中 ,测定其序列。构建高效表达载体pET2 8a hnRNPA2 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)plysS并进行诱导表达 ,将含目的蛋白的组分经金属螯合树脂亲和层析柱进行蛋白纯化。以该纯化蛋白为包被抗原 ,ELISA方法检测类风湿关节炎 (RA) 97例、系统性红斑狼疮 (SLE) 5 0例、混合性结缔组织病 (MCTD) 8例、其他关节炎 2 9例、其他弥漫性结缔组织病 (CTD) 99例。结果 构建hnRNPA2重组表达载体并在大肠杆菌中获得hnRNPA2高效表达 ;在RA、SLE、MCTD、其他关节炎、其他CTD患者中抗hnRNPA2 RA33抗体阳性率分别为36 .8%、2 4%、75 %、3.75 %、10 .10 % ;在RA中特异性为 86 .6 7%。结论 以纯化的基因重组蛋白hnRNPA2为抗原检测hnRNPA2

hnRNP A2/B1 mRNA在非小细胞肺癌和转移淋巴结中表达及意义

目的:探讨肺癌早期诊断基因核内不均一核糖体表达对肺癌淋巴结微转移的作用。观察hnRNPA2/B1在各组织类型肺癌中的表达。方法:42例非小细胞肺癌患者开胸手术纵隔淋巴结清扫获取原发灶及纵隔淋巴结病理标本,12例肺良性病变手术切除标本作正常对照。荧光定量PCR检测切除肿块和淋巴结的hnRNP A2/B1 mRNA表达。结果:(1)转移性淋巴结中hnRNP A2/B1 mRNA表达水平561.393显著高于无转移淋巴结156.669(P<0.05)。(2)Ⅲ期肺癌组织中hnRNP A2/B1 mRNA表达水平305(249,533)显著高于Ⅰ期和Ⅱ期肺癌组织(2=13.453,P<0.01)。(3)hnRNP A2/B1 mRNA在鳞癌和腺癌中的表达水平分别为207(152,305)和249(177,476),Z=-0.899,P>0.05。(4)58组淋巴结阳性,84组阴性,42个病人142组区域淋巴结hnRNP A2/B1mRNA阳性率为40.84%(58/142),12例肺良性疾病组织均阴性,HE染色42个病人的50组转移淋巴结阳性率为35.21%,与FQ-PCR 58枚(52.11%)无显著差异(P>0.05)。结论:NSCLC癌组织存在着hnRNP A2/B1的过度表达。NSCLC癌组织中hnRNP A2/B1表达水平与淋巴结转移状态及P-TNM分期有关。hnRNP A2/B1检验敏感性、特异性高,可用于肺癌的辅助诊断的标记。