人微小非编码RNA-183和MMP-9对食管癌细胞Eca109增殖的作用及其相互调控关系

目的探讨人微小非编码RNA-183(Hsa-miR-183)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在食管癌组织和食管鳞癌细胞株Eca109中的表达及相互调控关系。方法采用RT-PCR法检测食管癌组织、食管正常组织、正常食管上皮细胞Het-1A和Eca109细胞株中Hsa-miR-183与MMP-9的相对表达水平。构建人HsamiR-183的真核表达载体质粒PmiR-183,以脂质体2000转染至Eca109细胞,Eca109细胞分为3组:空白对照组不含任何质粒或脂质体,阴性对照组含空质粒2 000μg/m L、脂质体20μg/m L,PmiR-183组含PmiR-183 20μg/m L。构建psi CHECK-2-MMP-9-3'UTR载体。WST-8法检测细胞增殖抑制率,RT-PCR法检测HsamiR-183及MMP-9 mRNA的表达水平,Western blot法检测MMP-9蛋白的表达水平;荧光素酶报告基因实验验证Hsa-miR-183与MMP-9的靶位关系,设计针对MMP-9序列的小干扰RNA,转染Eca109细胞株,检测HsamiR-183的相对表达水平。结果 Hsa-miR-183在食管癌组织和Eca109细胞株中的相对表达水平较食管正常组织和Het-1A细胞株中低(P<0.05),MMP-9在食管癌组织和Eca109细胞株中的相对表达水平较食管正常组织及Het-1A细胞株中高(P<0.05)。与阴性对照组比较,PmiR-183组对Eca109细胞24、48、72 h的增殖抑制率差异有统计学意义(P<0.05),呈时间-效应关系;psi CHECK-2-MMP-9-3'UTR质粒与Hsa-miR-183共转染293T细胞,荧光素酶的活性降低;转染PmiR-183至Eca109细胞后,MMP-9基因mRNA与蛋白表达水平均降低;敲除MMP-9表达之后,Hsa-miR-183的表达水平显著升高。结论 PmiR-183可有效抑制Eca109细胞的增殖,呈时间-效应关系,Has-miR-183可能参与MMP-9在Eca109细胞的表达调控。

长链非编码RNA SLCO4A1-AS1靶向微小RNA-615-5p对食管癌细胞增殖、凋亡和炎症因子表达的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员4A1反义RNA1(SLCO4A1-AS1)靶向微小RNA-615-5p(miR-615-5p)对食管癌细胞增殖、凋亡和炎症因子表达的影响。方法运用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)分析LncRNA SLCO4A1-AS1和miR-615-5p在食管癌组织、细胞系中表达情况。将si-NC、si-LncRNA SLCO4A1-AS1、miR-NC、miR-615-5p模拟物、pcDNA、pcDNA-LncRNA SLCO4A1-AS1、si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-NC、si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-615-5p分别转染Eca109细胞。CCK-8和流式细胞术用于检测细胞活力和凋亡率;平板克隆实验用于检测细胞增殖;酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测培养液中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用双荧光素酶报告基因法确定LncRNA SLCO4A1-AS1与miR-615-5p的关系。结果食管癌组织、细胞系中LncRNA SLCO4A1-AS1表达上调,miR-615-5p表达下调。抑制LncRNA SLCO4A1-AS1表达后,细胞活力、细胞克隆形成数量以及培养液中IL-6和TNF-α水平降低,miR-615-5p表达量、细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-615-5p组Eca109细胞中miR-615-5p表达量、Cleaved-caspase-3蛋白水平、凋亡率升高,细胞活力、细胞克隆形成数量、培养液中IL-6和TNF-α水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-NC比较,si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-615-5p组Eca109细胞中miR-615-5p表达量、Cleaved-caspase-3蛋白水平、凋亡率降低,细胞活力、细胞克隆形成数量、培养液中IL-6和TNF-α水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA SLCO4A1-AS1能够促进食管癌的发生和发展。抑制LncRNA SLCO4A1-AS1能够减少食管癌细胞的增殖,降低炎症因子的表达,诱导癌细胞凋亡。

长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因22调控微小RNA-27b-3p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因(SNHG)22调控微小RNA(miR)-27b-3p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法收集52例OSCC患者的癌组织及癌旁组织标本,体外培养人正常口腔角质细胞HOK和3种人OSCC细胞(CAL-27、SCC-25和HSC-3),实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测癌组织、癌旁组织、HOK细胞和3种OSCC细胞中SNHG22、miR-27b-3p表达情况。对SCC-25细胞进行转染并将其分为Ctrl组(未进行转染)、si-SNHG22组、si-NC组、miR-27b-3p inhibitor组、inhibitor-NC组、si-SNHG22+inhibitor-NC组和si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组,检测各组SCC-25细胞增殖情况[细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测增殖率、流式细胞术检测增殖指数(PI)];Transwell实验检测各组SCC-25细胞侵袭情况;划痕愈合实验检测各组SCC-25细胞迁移情况;双荧光素酶实验验证SNHG22与miR-27b-3p的靶向作用关系。结果与癌旁组织比较,OSCC癌组织中SNHG22表达显著升高,miR-27b-3p表达显著降低(P<0.05);与HOK细胞比较,CAL-27、SCC-25和HSC-3细胞中SNHG22表达显著升高,miR-27b-3p表达显著降低,且SCC-25细胞中SNHG22与miR-27b-3p的表达与HOK细胞差异最大(P<0.05)。与Ctrl组比较,si-SNHG22组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著减少(P<0.05),miR-27b-3p inhibitor组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著增加(P<0.05);与si-SNHG22组比较,si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著增加(P<0.05)。双荧光素酶实验显示SNHG22与miR-27b-3p存在靶向作用关系。结论SNHG22在OSSC中高表达,miR-27b-3p在OSSC中低表达,SNHG22可能通过海绵化miR-27b-3p促进SCC-25细胞增殖、侵袭和迁移,SNHG22/miR-27b-3p轴可能是OSCC一个新的诊断和治疗靶点。

原发性肝癌组织长链非编码RNA JPX、微小RNA-371a-5p表达水平及其与患者术后5年预后关系研究

目的:探讨原发性肝癌组织长链非编码RNA(lncRNA)JPX、微小RNA-371a-5p(miR-371a-5p)表达水平及其与患者术后5年预后的关系。方法:选取行根治术治疗的105例原发性肝癌患者的癌组织以及距离癌组织3 cm的癌旁正常组织。RT-qPCR检测组织中lncRNA JPX、miR-371a-5p表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA JPX与miR-371a-5p的靶向关系。术后随访5年根据生存情况将患者分为生存组(64例)和病死组(41例)。比较肝癌组织和癌旁正常组织lncRNA JPX、miR-371a-5p表达水平。比较生存组和病死组临床病理特征及lncRNA JPX、miR-371a-5p水平。Pearson法分析lncRNA JPX、miR-371a-5p水平与肝内转移、肿瘤分化程度、中国肝癌分期(CNLC)、血管侵犯的相关性。多因素Cox回归分析原发性肝癌患者术后5年预后影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析肝癌组织lncRNA JPX、miR-371a-5p对患者术后5年生存的预测价值。结果:肝癌组织中lncRNA JPX、miR-371a-5p表达水平较癌旁正常组织升高(均P<0.05)。lncRNA JPX可正向调控miR-371a-5p表达。lncRNA JPX、miR-371a-5p高表达患者5年总生存率分别低于lncRNA JPX、miR-371a-5p低表达患者(均P<0.05)。生存组无肝内转移、肿瘤高/中分化、CNLCⅠ-Ⅱ期、无血管侵犯患者比例高于病死组,且lncRNA JPX和miR-371a-5p表达水平低于病死组(均P<0.05)。有肝内转移、肿瘤低分化、CNLCⅢa期、有血管侵犯、lncRNA JPX高表达、miR-371a-5p高表达是原发性肝癌患者术后5年生存的独立危险因素(均P<0.05)。肝癌组织lncRNA JPX与miR-371a-5p呈正相关,两者与肝内转移、CNLC分期、血管侵犯呈正相关,与肿瘤分化程度呈负相关(均P<0.05)。lncRNA JPX、miR-371a-5p联合预测患者术后5年生存的曲线下面积(AUC)大于lncRNA JPX及miR-371a-5p单独预测的AUC(均P<0.05)。结论:原发性肝癌组织lncRNA JPX、miR-371a-5p呈高表达,lncRNA JPX可正向调控miR-371a-5p,两者是患者术后5年生存的独立危险因素,对术后5年生存的预测价值较高。

血清长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18、微小RNA-185-5p水平与老年2型糖尿病周围神经病变的关系

目的探究血清长链非编码RNA(LncRNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)及微小RNA-185-5p水平与老年2型糖尿病(T2DM)周围神经病变(DPN)的关系及其预测价值评估。方法以2020年3月至2021年8月保定市第一中心医院收治的老年T2DM患者为研究对象,选择其中发生周围神经病变的75例患者为DPN组,选择未发生周围神经病变的82例患者为非DPN组。血清LncRNA HCG18、miR-185-5p的水平通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)进行检测;相关性通过Pearson法进行分析;T2DM合并DPN的影响因素通过多因素logistic回归进行分析;受试者操作特征曲线分析血清LncRNA HCG18、miR-185-5p对T2DM患者发生DPN的诊断价值。结果DPN组患者血清LncRNA HCG18水平高于非DPN组,血清miR-185-5p水平低于非DPN组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。DPN组患者血清LncRNA HCG18与miR-185-5p水平呈显著负相关(r=-0.407,P<0.001)。多因素logistic回归分析显示,LncRNA HCG18、miR-185-5p为T2DM合并DPN发生的影响因素(P<0.05)。血清LncRNA HCG18、miR-185-5p对T2DM患者发生DPN预测的曲线下面积分别为0.841(95%CI 0.775~0.906)、0.857(95%CI 0.793~0.922)。结论老年DPN患者血清LncRNA HCG18水平升高,miR-185-5p水平降低,对老年T2DM患者发生DPN有一定的诊断价值。

长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因2/微小RNA-30c-5p/丝裂原活化蛋白激酶1轴在食管癌细胞紫杉醇耐药中的作用机制实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因2(DLEU2)/微小RNA(miR)-30c-5p/丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)轴在食管癌细胞紫杉醇(PTX)耐药中的作用机制。方法:构建EC109/PTX细胞,检测食管癌组织和癌旁正常组织,以及食管癌细胞EC109和KYSE150细胞、食管上皮细胞SHEE和EC109/PTX细胞DLEU2、miR-30c-5p、MAPK1 mRNA表达。取生长良好的EC109/PTX细胞,分为沉默(siRNA)DLEU2组、阴性对照(siRNA NC)组、siRNA DLEU2+miR-30c-5p抑制剂(inhibitor)组、siRNA DLEU2+inhibitor NC组、siRNA DLEU2+过表达(pcDNA)MAPK1组、siRNA DLEU2+pcDNA NC组和空白组。验证miR-30c-5p与DLEU2、MAPK1的靶向关系。检测各组EC109/PTX细胞DLEU2、miR-30c-5p、MAPK1 mRNA表达水平。检测EC109/PTX细胞活性、凋亡情况及对PTX的耐药性。检测谷胱甘肽S-转移酶π(GST-π)、MAPK1、P-蛋白(P-gp)蛋白表达水平。结果:食管癌组织和EC109/PTX细胞miR-30c-5p表达降低,DLEU2、MAPK1 mRNA表达增加(均P<0.05)。DLEU2靶向调控miR-30c-5p,miR-30c-5p靶向调控MAPK1。siRNA DLEU2组miR-30c-5p表达和细胞凋亡率较siRNA NC组、空白组增加,DLEU2和MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、药物半数抑制浓度(IC 50)以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达降低(均P<0.05)。siRNA DLEU2+miR-30c-5p inhibitor组miR-30c-5p表达和细胞凋亡率较siRNA DLEU2+inhibitor NC组降低,MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、IC 50以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达增加(均P<0.05)。siRNA DLEU2+pcDNA MAPK1组细胞凋亡率较siRNA DLEU2+pcDNA NC组降低,MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、IC 50以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达增加(均P<0.05)。结论:干扰lncRNA DLEU2可减弱EC109/PTX细胞对PTX的耐药性,可能与调控miR-30c-5p/MAPK1轴有关。

长链非编码RNA NUTM2A-AS1靶向微小RNA-129-5p调控氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NUTM2A-AS1对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及分子机制。方法 将人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)在DMEM培养基中培养,采用100μg/mL oxLDL处理的HUVEC纳入oxLDL组,常规培养的细胞纳入Con组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体及阴性对照、miR-129-5p模拟物及阴性对照转染至HUVEC后采用100μg/mL oxLDL处理后的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1组、oxLDL+si-NC组、oxLDL+miR-129-5p组、oxLDL+miR-NC组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体与微小RNA(miR)-129-5p抑制剂或阴性对照共转染至HUVEC后采用100μg/mL的oxLDL处理的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-129-5p组、oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-NC组。采用试剂盒测量细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白质印迹法检测蛋白表达;采用双荧光素酶报告实验及RNA下拉实验检测NUTM2A-AS1与miR-129-5p的靶向关系。结果 与Con组比较,oxLDL组lncRNA NUTM2A-AS1表达水平升高,miR-129-5p表达水平降低,MDA含量升高,SOD、GSH-Px活性降低,血管内皮细胞凋亡率和cleaved-caspase3、cleaved-caspase9表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达或过表达miR-129-5p后,MDA含量降低,SOD、GSH-Px活性升高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA NUTM2A-AS1敲低介导的oxLDL条件下血管内皮细胞的损伤抑制可以被miR-129-5p下调逆转。lncRNA NUTM2A-AS1靶向调控miR-129-5p。结论 干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达通过靶向上调miR-129-5p抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤。

重型颅脑损伤病人血清微小RNA-542-3p、长链非编码RNA牛磺酸上调基因1表达及其与预后的关系

目的探讨微小RNA-542-3p(miR-542-3p)、长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)在重型颅脑损伤(STBI)病人血清中的表达及与病人预后的关系。方法2020年1月~2022年7月收治的128例STBI病人为重型组,130例轻、中型TBI病人为对照组,检测病人血清miR-542-3p、lncRNA TUG1表达量,采用Pearson法分析二者相关性。Logistic回归分析血清miR-542-3p、lncRNA TUG1对STBI病人预后不良的影响,并以受试者工作特征(ROC)曲线分析二者对STBI病人预后的预测效能。结果重型组病人血清miR-542-3p与lncRNA TUG1表达量分别低于和高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。STBI病人血清miR-542-3p与lncRNA TUG1表达量呈负相关(r=-0.595,P<0.001)。预后不良组血清lncRNA TUG1与miR-542-3p水平分别高于和低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。高lncRNA TUG1水平是STBI病人预后不良的危险因素(P<0.05),高miR-542-3p水平是保护因素(P<0.05)。血清miR-542-3p、lncRNA TUG1联合预测STBI病人预后的曲线下面积(AUC)(0.939)高于单独预测的AUC(Z=2.410,P=0.016;Z=3.339,P<0.001)。结论STBI病人血清miR-542-3p表达下调,lncRNA TUG1表达上调,二者均可用于STBI病人预后预测,且二者联合的预测价值更高。

长链非编码RNA 00941、微小RNA-145表达及转化生长因子β1/Smad通路相关因子在胃癌组织中的表达及意义

目的:探究长链非编码RNA00941(Linc00941)、微小RNA-145(miR-145)表达及转化生长因子β1/Smad(TGF-β1/Smad)通路相关因子在胃癌组织中的表达与意义。方法:选取收治的51例胃癌患者,手术治疗后经病理学检查确诊。收集其胃癌组织及其癌旁组织,比较其中Linc00941、miR-145及TGF-β1/Smad通路相关因子表达差异;提取患者的胃癌组织细胞进行组织培养,并对其进行Linc00941、miR-145基因的转染、沉默,分析其对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:与癌旁组织比较较,胃癌组织患者的Linc00941及其信使核糖核酸(mRNA)相对表达水平升高,miR-145及其mRNA相对表达水平降低(均P<0.05)。胃癌组织中的TGF-β1、转化生长因子β受体Ⅱ(TGF-βRⅡ)及Smad2/3均较癌旁组织显著降低(均P<0.05)。NC组、Linc00941转染组及Linc00941沉默组三组间吸光值(A值)及凋亡率两两比较均存在统计学差异(均P<0.05),Linc00941沉默组在培养24、48、72 h时的A值低于NC组,凋亡率高于NC组;Linc00941转染组各时间的A值高于NC组,凋亡率低于NC组(均P<0.05)。与NC组比较较,Linc00941沉默组的细胞迁移数目及细胞侵袭数目均降低,Linc00941转染组均升高,组间两两比较差异存在统计学意义(均P<0.05)。与NC组比较较,miR-145转染组培养24、48、72 h的A值均降低,凋亡率升高;miR-145沉默组的A值升高,细胞凋亡率降低(均P<0.05)。与NC组比较较,miR-145转染组的细胞迁移数目及细胞侵袭数目均降低,miR-145沉默组均升高,组间两两比较差异存在统计学意义(均P<0.05)。结论:在胃癌组织中,Linc00941及其mRNA相对表达水平升高,miR-145及其mRNA相对表达水平降低,TGF-β1/Smad通路相关因子TGF-β1、TGF-βRⅡ及Smad2/3表达降低,且Linc00941、miR-145表达影响胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

长链非编码RNA母系表达基因8通过微小RNA-495-3p调控急性髓性白血病细胞高迁移率族蛋白A1表达及对细胞增殖、凋亡的作用机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因8(MEG8)通过微小RNA-495-3p(miR-495-3p)调控急性髓性白血病细胞(AML)高迁移率族蛋白A1(HMGA1)表达及对细胞增殖、凋亡的机制。方法:选取50例经确诊为AML患者的骨髓活检标本与52例健康骨髓捐赠者骨髓标本,常规培养人AML细胞株HL-60,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法骨髓单个核细胞中lncRNA MEG8 mRNA表达。将HL-60细胞分为六组,即HL-60组(HL-60细胞)、si-NC组(转染si-NC)、si-lncRNA MEG8组(转染si-lncRNA MEG8)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、miR-495-3p mimic组(转染miR-495-3p mimic)、si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组(转染si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic),CCK-8法检测培养24、48、72 h各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中HMGA1表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MEG8、miR-495-3p、HMGA1之间的关系。结果:与对照组相比,观察组lncRNA MEG8 mRNA表达升高(P<0.05)。与miR NC+MEG8 WT组比较,miR-495-3p mimic+MEG8 WT组荧光素酶活性下降(P<0.05),与miR NC+HMGA1 WT组比较,miR-495-3p mimic+HMGA1 WT组荧光素酶活性下降(P<0.05)。与HL-60组、si-NC组、mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8组、miR-495-3p mimic组和si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组24、48 h细胞增殖能力均显著下降,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组细胞增殖率最低(P<0.05)。与HL-60组、si-NC组和mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组HL-60细胞凋亡率高于si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P<0.05)。与HL-60组、si-NC组和mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组HMGA1蛋白表达低于si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P<0.05)。结论:沉默lncRNA MEG8可能通过上调miR-495-3p来下调HMGB1,来抑制HL-60细胞的恶性生物学行为,可为探索AML潜在治疗靶点提供了新思路。

长链非编码RNA F-box富含亮氨酸的重复蛋白19反义RNA 1调节微小RNA-342-3p/自噬相关蛋白10轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和奥沙利铂耐药性的影响实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) F-box富含亮氨酸的重复蛋白19反义RNA 1(FBXL19-AS1)调节微小RNA(miR)-342-3p/自噬相关蛋白10(ATG10)轴对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移和奥沙利铂耐药性的影响。方法:实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测组织及正常肠上皮细胞(NCM460)、人CRC细胞系RKO、HCT-8细胞及HCT-8/L-OHP细胞中FBXL19-AS1、miR-342-3p、ATG10 mRNA表达水平。将HCT-8细胞分为shFBXL19-AS1组、shRNA组、shFBXL19-AS1+inhibitor NC组和shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组,并以未转染的细胞为空白组。将HCT-8/L-OHP细胞分为L-OHP+shFBXL19-AS1组、L-OHP+shRNA组、L-OHP+shFBXL19-AS1+inhibitor NC组和L-OHP+shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组,并以未转染的细胞为空白组。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测HCT-8、HCT-8/L-OHP细胞增殖及其耐药性。划痕实验检测细胞迁移能力。免疫印迹法(Western blot)检测P-糖蛋白(P-gp)、增殖蛋白(Ki-67)、迁移侵袭增强子因子1(MIEN1)、ATG10蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验分析miR-342-3p与FBXL19-AS1、ATG10靶向关系。结果:FBXL19-AS1、ATG10 mRNA表达在HCT-8/L-OHP细胞及CRC组织中增加,miR-342-3p表达则降低(均P<0.05)。shFBXL19-AS1组细胞增殖、细胞迁移、FBXL19-AS1和ATG10 mRNA表达以及Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较shRNA组和空白组降低,miR-342-3p表达则增加(均P<0.05)。shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组细胞增殖、细胞迁移、ATG10 mRNA以及Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较shFBXL19-AS1+inhibitor NC组增加,miR-342-3p表达则降低(均P<0.05)。L-OHP+shFBXL19-AS1组细胞增殖、细胞迁移、细胞耐药性及P-gp、Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较L-OHP+shRNA组和空白组降低(均P<0.05)。L-OHP+shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组细胞增殖、细胞迁移、细胞耐药性及P-gp、Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较L-OHP+shFBXL19-AS1+inhibitor NC组增加(均P<0.05)。结论:干扰lncRNA FBXL19-AS1通过上调miR-342-3p/ATG10轴抑制CRC细胞的增殖、迁移,改善奥沙利铂耐药性。

长链非编码RNA XIST、微小RNA-212-3p对人卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)XIST与微小RNA-212-3p(miR-212-3p)对人卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测LncRNAXIST与miR-212-3p在人正常卵巢上皮细胞IOSE80和KGN细胞株中的表达水平;通过Starbase靶基因数据库预测LncRNAXIST靶向miR-212-3p,并采用双萤光素酶报告实验进行验证;分别将XIST-plasmid和miR-212-3pmimic转染至KGN细胞,通过CCK-8实验、流式细胞术和蛋白质印迹法(Westernblot)实验分析LncRNAXIST与miR-212-3p对KGN细胞增殖和凋亡的影响。结果与IOSE80细胞系比较,在KGN细胞中LncRNAXIST呈低表达,miR-212-3p呈高表达(P<0.001);StarBase靶基因数据库预测显示,XIST与miR-212-3p存在结合位点;miR-212-3p mimic可降低XIST-WT的萤光素酶活性(P<0.01);CCK-8实验和流式细胞术实验结果显示,LncRNAXIST能够抑制KGN细胞增殖,促进细胞凋亡,转染miR-212-3pmimic能够部分抑制LncRNAXIST(P<0.001);Western blot实验结果显示,LncRNA XIST能够抑制B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)表达,促进Bax蛋白的表达,转染miR-212-3p mimic能够部分抑制Bax蛋白表达,促进Bcl-2蛋白的表达(P<0.001)。结论LncRNA XIST过表达能够抑制KGN细胞的增殖并促进其凋亡,其机制作用可能是通过靶向miR-212-3p实现的。

特应性皮炎患儿血清长链非编码RNA母系表达基因3和微小RNA-23b-3p水平检测及意义

目的:探讨特应性皮炎(AD)患儿血清长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)和微小RNA-23b-3p(miR-23b-3p)水平检测及意义。方法:选取AD患儿165例(AD组)和体检健康儿童160例(对照组)为研究对象。采用荧光定量PCR法检测两组血清lncRNA MEG3和miR-23b-3p水平。采用AD积分指数(SCORAD)对AD患儿疾病严重程度进行评估,并将AD组患儿分为AD轻度组(65例)、AD中度组(68例)和AD重度组(32例)。比较对照组和AD组以及不同严重程度AD患儿血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平。采用Pearson法分析AD组血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平和SCORAD评分三者间的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平检测对中、重度AD的诊断价值。结果:与对照组比较,AD组血清lncRNA MEG3和miR-23b-3p水平显著降低(均P<0.05)。与AD轻度组比较,AD中度组和AD重度组血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平依次降低,SCORAD评分依次升高(均P<0.05)。AD组血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平呈正相关(r=0.404,P<0.05)。血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平与SCORAD评分均呈负相关(r=-0.383、-0.366,均P<0.05)。血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p单项及联合检测诊断中度AD的曲线下面积(AUC)分别为0.818、0.753、0.883。与血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p单独检测比较,两者联合检测诊断中度AD的AUC更高(Z=2.177、3.595,均P<0.05)。血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p单项及联合检测诊断重度AD的AUC分别为0.794、0.778、0.895。与血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p单独检测比较,两者联合检测诊断重度AD的AUC更高(Z=2.104、2.293,均P<0.05)。结论:AD患儿血清lncRNA MEG3和miR-23b-3p水平呈低表达,与病情严重程度有关,有望成为评估儿童AD病情程度的生物标志物。

长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1及微小RNA-874对气道平滑肌细胞功能改善的调控

目的探讨长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(lncRNA MALAT1)与微小RNA-874(miR-874)在血小板衍生因子(PDGF)-BB处理的气道平滑肌细胞(ASMCs)中的表达与功能。方法采用PDGF-BB处理ASMCs建立哮喘细胞模型。将ASMCs分为正常培养的对照组(Control组)、PDGF-BB处理的PDGF-BB组[再根据处理时间分为PDGF-BB(6 h)组、PDGF-BB(12 h)组、PDGF-BB(28 h)组、PDGF-BB(24 h)组)]、PDGF-BB处理的转染sh-MALAT组(PDGF-BB+sh-MALAT组)、PDGF-BB处理的转染sh-NC组(PDGF-BB+sh-NC组)、PDGF-BB处理的转染miR-874 mimics组(PDGF-BB+miR-874 mimics组)、PDGF-BB处理的转染miR-NC组(PDGF-BB+miR-NC组)、PDGF-BB处理的共转染sh-NC与miR-NC组(PDGF-BB+sh-NC+miR-NC组)、PDGF-BB处理的共转染sh-MALAT1与miR-NC组(PDGF-BB+sh-MALAT1+miR-NC组)、PDGF-BB处理的共转染sh-MALAT1与miR-874 inhibitor组(PDGF-BB+sh-MALAT1+miR-874 inhibitor组)。将MALAT-WT或MALAT-MUT序列和miR-874 mimics或miR-NC共同转染入psi-CHECK2荧光素酶报告载体中,并将共转染的细胞分为miR-874 mimics+MALAT-WT组、miR-NC+MALAT-WT组、miR-874 mimics+MALAT-MUT组和miR-NC+MALAT-MUT组。采用RT-PCR检测MALAT1、miR-874表达水平,采用CCK-8法检测吸光度值代表细胞增殖能力,采用Transwell实验计算迁移细胞数代表细胞迁移能力,采用ELISA试验检测IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。使用在线数据库starbase预测MALAT和miR-874之间的潜在结合位点,采用双荧光素酶报告系统检测各组ASMCs中荧光素酶活性。结果Control组、PDGF-BB(6 h)组、PDGF-BB(12 h)组、PDGF-BB(18 h)组及PDGF-BB(24 h)组细胞MALAT1相对水平依次升高,miR-874相对水平依次降低(P<0.05)。与Control组比较,PDGF-BB组、PDGF-BB+sh-NC组及PDGF-BB+sh-MALAT1组、PDGF-BB+miR-NC组及PDGF-BB+miR-874 mimics组细胞增殖能力、迁移能力及细胞上清液中IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平均明显增强;与PDGF-BB组比较,PDGF-BB+sh-MALAT1组及PDGF-BB+miR-874 mimics组细胞上述能力与指标水平均明显降低(P<0.05)。与miR-NC+MALAT1-WT组细胞比较,miR-874 mimics+MALAT1-WT组细胞荧光素酶活性显著降低;与Control组比较,转染sh-MALAT1后细胞miR-874表达水平明显升高(P<0.05)。与sh-NC+miR-NC组比较,PDGF-BB+sh-NC+miR-NC组、PDGF-BB+sh-MALAT1+miR-NC组和PDGF-BB+sh-MALAT1+miR-874 inhibitor组细胞增殖能力与迁移能力均明显升高;与PDGF-BB+sh-NC+miR-NC组比较,PDGF-BB+sh-MALAT1+miR-874 inhibitor组细胞上述能力均明显降低(P<0.05)。结论通过降低细胞增殖、迁移和炎症因子分泌可抑制MALAT1/miR-874轴表达,在PDGF-BB诱导的ASMCs中发挥保护作用。

卵巢癌组织中长链非编码RNA生长阻滞特异性抑制物5、微小RNA-205的表达及意义

目的分析长链非编码RNA(lncRNA)生长阻滞特异性抑制物5(GAS5)、微小RNA-205(miR-205)在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法前瞻性收集2019年1月至2020年6月收治的初诊卵巢癌患者于术中取其癌组织和癌旁组织(距肿瘤边缘>2cm);采用实时荧光定量PCR法检测lncRNA GAS5、miR-205表达情况;问卷调查法统计患者临床病理资料;术后随访2年(截止时间至2022年6月),统计患者生存时间。比较癌组织和癌旁组织lncRNA GAS5、miR-205表达,并采用Pearson相关分析lncRNA GAS5与miR-205的关系;以癌组织lncRNA GAS5、miR-205表达的中位数将卵巢癌患者分为lncRNA GAS5与miR-205高表达组和低表达组,比较不同病理特征卵巢癌患者lncRNA GAS5、miR-205高表达、低表达情况;比较不同lncRNA GAS5、miR-205表达情况的卵巢癌患者生存时间。结果共82例卵巢癌患者纳入本次研究,其中2例失访,最终80例患者进入本次研究。卵巢癌组织lncRNA GAS5相对表达量小于癌旁正常组织,miR-205相对表达量大于癌旁正常组织(P<0.05);Pearson相关分析显示,卵巢癌组织中lncRNA GAS5相对表达量与miR-205相对表达量呈负相关(r=-0.606,P<0.001)。lncRNA GAS5高表达45例,低表达35例;miR-205高表达40例,低表达40例。Ⅲ~Ⅳ期、伴淋巴结转移的卵巢癌患者的卵巢组织中lncRNA GAS5低表达率高于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期、伴淋巴结转移的卵巢癌患者的卵巢组织中miR-205高表达率高于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P<0.05)。lncRNA GAS5低表达量卵巢癌患者2年生存时间(21.50±0.89)个月,低于高表达患者(23.89±0.09)个月(χ2=5.150,P=0.023)。miR-205高表达量卵巢癌患者2年生存时间(21.71±0.79)个月,低于低表达患者(23.98±0.03)个月(χ2=6.337,P=0.012)。结论lncRNA GAS5、miR-205在卵巢癌组织表达存在一定的差异,其中lncRNA GAS5低表达,miR-205高表达,并影响卵巢癌患者的临床病理特征和预后。

长链非编码RNA YAF2-AS1通过调控微小RNA-141-3p表达抑制肝星状细胞活化实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)YAF2-AS1在肝星状细胞活化中的作用及可能的分子机制。方法:采用基因表达数据库(GEO)分析YAF2-AS1在肝纤维化组织和正常肝组织中的表达。用YAF2-AS1质粒转染人肝星状细胞LX-2细胞并设为YAF2-AS1组,以转染阴性对照质粒为对照组。采用CCK-8实验检测LX-2细胞增殖。采用流式细胞术检测LX-2细胞周期分布和活性氧(ROS)含量。采用lncRMap软件和双荧光素酶活性实验验证YAF2-AS1与miR-141-3p的靶向关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-141-3p表达。采用Western blot检测蛋白磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)/蛋白激酶B(AKT)信号通路中PTEN、p-AKT蛋白以及肝纤维化标志物[α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、转化生长因子β受体Ⅱ(TGFβR2)]的表达。结果:与正常肝组织比较,肝纤维化组织YAF2-AS1表达水平降低(P<0.01)。与对照组比较,YAF2-AS1组LX-2细胞增殖活性被抑制(P<0.05);G_(0)/G_(1)期LX-2细胞比例升高(P<0.01),S期和G_(2)/M期LX-2细胞比例降低(均P<0.05);LX-2细胞ROS含量升高(P<0.01)。miR-141-3p是YAF2-AS1的靶基因(P<0.01)。与对照组比较,YAF2-AS1组LX-2细胞miR-141-3p表达降低(P<0.01);PTEN蛋白表达增加,p-AKT、α-SMA、CollagenⅠ、TGFβR2蛋白表达降低(均P<0.05)。结论:YAF2-AS1在肝纤维化组织中表达下调,过表达YAF2-AS1通过降低miR-141-3p表达抑制肝星状细胞的活化。

非小细胞肺癌病人血长链非编码RNA和微小RNA-191表达水平及临床意义

目的 观察长链非编码RNA(lncRNA,ANRIL)、微小RNA(miR)-191在非小细胞肺癌(NSCLC)病人血浆中的表达及与临床意义。方法 2015年5月~2017年8月我院首次确诊非小细胞肺癌(NSCLC)病人153例,健康体检者75例。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血浆ANRIL、miR-191水平,分析ANRIL、miR-191表达水平与临床病理特征的关系。Kaplan-Meier分析ANRIL、miR-191表达水平与预后的关系,Cox回归分析影响NSCLC病人预后不良的危险因素。结果 NSCLC病人血浆ANRIL水平为(3.09±0.53)、miR-191水平为(2.82±0.47),正常人群分别为(0.64±0.04)、(0.42±0.07),差异有统计学意义(P<0.05)。中低分化、Ⅲ+Ⅳ分期、有淋巴结转移病人血浆ANRIL、miR-191含量高于高分化、Ⅰ+Ⅱ分期、无淋巴结转移病人,差异有统计学意义(P<0.05)。ANRIL高表达组病人5年总体生存率(OS)为44.58%,ANRIL低表达组为73.85%;miR-191高表达组病人5年OS为50.63%,miR-191低表达组为71.01%,差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移、血浆ANRIL高表达及血浆miR-191高表达是影响NSCLC病人预后不良的独立危险因素(均P<0.05)。结论 NSCLC病人血浆ANRIL、miR-191高表达,与分期、淋巴结转移、分化程度及预后相关。

长链非编码RNA X染色体失活特异转录物和微小RNA-146-5p在甲状腺癌中的表达及临床意义

目的探讨甲状腺癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)X染色体失活特异转录物(XIST)、微小RNA-146-5p(miR-146-5p)的表达及其诊断价值。方法选取甲状腺癌患者92例为研究对象,均行手术切除术,术中收集甲状腺癌组织和癌旁正常组织。分析LncRNA XIST、miR-146-5p水平与患者临床病理特征之间的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估LncRNA XIST、miR-146-5p单独及联合对甲状腺癌的诊断价值。结果甲状腺癌组织中LncRNA XIST表达水平为(0.65±0.17),低于癌旁组织的(1.02±0.18),miR-146-5p表达水平为(2.56±0.87),高于癌旁组织的(1.07±0.25),差异有统计学意义(P<0.05)。临床分期Ⅲ~Ⅳ期、发生颈部淋巴结转移的甲状腺癌患者肿瘤组织中LncRNA XIST表达水平低于临床分期Ⅰ~Ⅱ期、未发生颈部淋巴结转移的甲状腺癌患者,miR-146-5p表达水平高于临床分期Ⅰ~Ⅱ期、未发生颈部淋巴结转移的甲状腺癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线结果显示,LncRNA XIST、miR-146-5p二者联合诊断甲状腺癌的曲线下面积(AUC)大于LncRNA XIST、miR-146-5p单独诊断,差异有统计学意义(P<0.05)。结论甲状腺癌组织中LncRNA XIST表达下调,miR-146-5p表达上调,二者与临床分期、颈部淋巴结转移有关,并对甲状腺癌有一定的诊断价值。

循环长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18、微小RNA-185-5p水平与糖尿病肾脏疾病患者血管钙化的相关性分析

目的分析血清循环长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(long non-coding RNA human leucocyte antigen complex group 18,LncRNA HCG18)、微小RNA-185-5p(microRNA-185-5p,miR-185-5p)水平与糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)患者血管钙化的相关性。方法选取2018年10月至2021年9月于上海健康医学院附属崇明医院就诊的DKD患者145例,男性73例,女性72例,依据患者血管钙化情况分为钙化组70例,其中男性38例,女性32例,年龄范围46~78岁,年龄(57.14±14.27)岁;未钙化组75例,其中男性35例,女性40例,年龄范围44~77岁,年龄(59.47±15.06)岁。另选同期健康体检者70名为对照组。荧光定量PCR法检测血清LncRNA HCG18、miR-185-5p水平;采用全自动生化分析仪测定血钙、血磷、血肌酐(serum creatinine,Scr)水平;采用酶标仪测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、超敏C反应蛋白(high-sensitivity c-reactive protein,hs-CRP)及甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)水平;Pearson法分析DKD合并血管钙化患者血清LncRNA HCG18、miR-185-5p水平与血管钙化相关指标的相关性及血清LncRNA HCG18与miR-185-5p的相关性;受试者工作特征曲线分析血清LncRNA HCG18、miR-185-5p水平对DKD合并血管钙化的诊断价值。结果钙化组、未钙化组血清LncRNA HCG18、血钙、血磷、Scr、ALP、hs-CRP及PTH均高于对照组(P<0.05),血清miR-185-5p水平低于对照组(P<0.05);钙化组血清LncRNA HCG18、血钙、血磷、Scr、ALP、hs-CRP及PTH均高于未钙化组(P<0.05),血清miR-185-5p水平低于未钙化组(P<0.05)。DKD合并血管钙化患者血清LncRNA HCG18与miR-185-5p呈负相关(P<0.05),血清LncRNA HCG18与血钙、血磷、Scr、ALP、hs-CRP及PTH均呈正相关(P<0.05),血清miR-185-5p与血钙、血磷、Scr、ALP、hs-CRP及PTH均呈负相关(P<0.05)。血清LncRNA HCG18、miR-185-5p水平及二者联合诊断DKD合并血管钙化的曲线下面积分别为0.820、0.758、0.880。结论DKD血管钙化患者血清LncRNA HCG18呈高表达、miR-185-5p呈低表达,二者均对DKD患者血管钙化有一定的诊断价值,联合检测诊断价值更高。

脑胶质瘤组织中长链非编码RNA核旁斑组装转录本1、微小RNA-149-5p的表达与临床病理特征和预后的相关性

目的 探讨脑胶质瘤组织中长链非编码RNA核旁斑组装转录本1(long non-coding RNA nuclear paraspeckle assembly transcript1,Lnc RNANEAT1)、微小RNA-149-5p(micro RNA-149-5p,mi R-149-5p)的表达与临床病理特征和预后的相关性。方法 选取2014年1月至2017年6月上海中医药大学附属曙光医院收治的103例脑胶质瘤患者为研究对象。分析脑胶质瘤组织与瘤旁组织中的LncRNA NEAT1、mi R-149-5p表达水平、LncRNA NEAT1与miR-149-5p表达水平的相关性以及Lnc RNA NEAT1、mi R-149-5p的表达水平与脑胶质瘤患者临床病理特征的关系。以脑胶质瘤组织中LncRNANEAT1表达量的平均值为分界线将患者分为LncRNA NEAT1高表达组(≥1.69,49例)和Lnc RNA NEAT1低表达组(<1.69,54例);以脑胶质瘤组织中miR-149-5p表达量的平均值为分界线将患者分为miR-149-5p高表达组(≥1.04,53例)和mi R-149-5p低表达组(<1.04,50例)。分析Lnc RNA NEAT1、mi R-149-5p表达水平与脑胶质瘤患者术后5年总生存率的关系。分析脑胶质瘤患者术后5年预后不良的影响因素。结果 脑胶质瘤组织中Lnc RNA NEAT1的表达量为1.69±0.33,显著高于瘤旁组织中的1.19±0.15(t=14.175,P<0.001);脑胶质瘤组织中miR-149-5p的表达量为1.04±0.28,显著低于瘤旁组织中的1.82±0.44(t=15.337,P<0.001)。Pearson相关性分析结果显示,脑胶质瘤组织中Lnc RNA NEAT1与mi R-149-5p的表达水平呈显著负相关(r=-0.728,P<0.001)。Lnc RNA NEAT1、mi R-149-5p的表达水平均与分化程度、WHO分级显著相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,Lnc RNANEAT1高表达组患者术后5年的总生存率显著低于LncRNA NEAT1低表达组(χ^(2)=16.601,P<0.001);miR-149-5p高表达组患者术后5年的总生存率显著高于miR-149-5p低表达组(χ2=19.768,P<0.001)。单因素分析结果显示,低分化、WHO分级为Ⅲ~Ⅳ级、LncRNANEAT1≥1.69、miR-149-5p≥1.04与脑胶质瘤患者预后不良显著相关(P<0.05);多因素Cox回归分析结果显示,低分化、WHO分级为Ⅲ~Ⅳ级、Lnc RNA NEAT1≥1.69为脑胶质瘤患者预后不良的独立危险因素(P<0.05),miR-149-5p≥1.04为脑胶质瘤患者预后不良的独立保护因素(P<0.05)。结论 脑胶质瘤组织中的Lnc RNA NEAT1高表达,miR-149-5p低表达,二者表达水平与分化程度、WHO分级密切相关,且均为脑胶质瘤患者术后5年预后不良的独立影响因素。