梁金菇多糖促人急性早幼粒细胞白血病细胞系(HL-60)细胞凋亡研究

目的 :观察梁金菇多糖对人类早幼粒细胞白血病细胞系 (HL 6 0 )是否具有凋亡诱导作用 ,并进一步研究半胱天冬酶 3(Caspase 3)基因在此过程中的作用。方法 :四氮唑蓝比色法 (MTT法 )观察梁金菇多糖对HL 6 0细胞的抑制率 ,应用形态学、流式细胞术、DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡的发生。应用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法检测凋亡相关基因Caspase 3mRNA表达的变化。结果 :梁金菇多糖对HL 6 0细胞的生长有明显的抑制作用 ,并诱导肿瘤细胞发生凋亡 ;在HL 6 0细胞凋亡过程中 ,凋亡相关基因Caspase 3转录水平比用药前增强。结论 :梁金菇多糖促HL 6 0细胞凋亡 ,且与Caspase

全反式维甲酸诱导人急性早幼粒白血病HL-60细胞分化的机制(英文)

目的 研究全反式维甲酸诱导人急性早幼粒白血病HL 6 0细胞分化机制。方法 用流式细胞仪分析维甲酸对HL 6 0细胞周期变化的影响 ,用自制的含 9984个已知基因和EST的高密度基因芯片检测HL 6 0细胞在维甲酸诱导作用下不同时期的基因表达变化。结果 HL 6 0细胞在 1μmol·L- 1 维甲酸持续作用 2 ,4和 6d时 ,流式细胞仪结果显示 4 8%～ 73%细胞阻断在G0 G1 期 ;基因表达谱分析发现 ,黏附分子、组织重建蛋白、转运蛋白、核蛋白体蛋白和涉及氧化酶激活途径的基因表达明显升高。结论 基因表达谱的研究结果表明 ,维甲酸作用HL 6 0细胞与氧化酶激活途径及组织重建蛋白的表达相关联 ,并揭示了一些已知和未知功能的基因在HL 6 0细胞分化与细胞凋亡过程中的作用。

柔红霉素对人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞及干扰素调节因子1、8、9表达的影响

目的研究柔红霉素(Daunorubicin,DNR)对人急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株HL-60细胞中干扰素调节因子1(IRF1)-mRNA、干扰素调节因子8(IRF8)-mRNA、干扰素调节因子9(IRF9)-mRNA表达的影响。方法将HL-60细胞株设为HL-60组、HL-60+DNR组,同时取3例正常人外周血白细胞为NC组。HL-60组为未加药处理组,HL-60+DNR组为小剂量DNR持续作用HL-60细胞10 d。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测IRF1-mRNA、IRF8-mRNA、IRF9-mRNA转录水平,每组实验重复3次。结果与NC组相比,IRF1-mRNA、IRF8-mRNA转录水平在HL-60组显著下调(P<0.05),而HL-60+DNR组显著上调(P<0.05);与NC组相比,IRF9-mRNA转录水平在HL-60+DNR显著上调(P<0.05),在HL-60组则表现为下调,但无统计学差异(P>0.05)。结论 DNR可上调HL-60细胞中的IRF1、IRF8、IRF9表达水平。APL经DNR治疗后,可能通过上调IRF1、IRF8、IRF9的表达诱导白血病细胞的凋亡,促进其成熟,促进病情的缓解。

乌索酸诱导人急性早幼粒白血病细胞株HL-60分化的机制

研究在乌索酸诱导的人急性早幼粒白血病细胞株HL-60分化过程中PI3K/Akt信号通路的调控作用。乌索酸作用HL-60细胞96 h后,通过形态学观察,四唑氮兰(NBT)还原实验等研究发现乌索酸能诱导HL-60细胞发生单核分化;Western blotting结果表明乌索酸能激活PI3K/Akt信号通路,上调通路关键蛋白———Thr308和Ser473两个位点磷酸化的Akt,且通过免疫荧光实验检测到通路激活过程中发生Akt的核迁移;另外,为进一步证明分化与PI3K/Akt通路的相关性,采用PI3K特异性抑制剂LY294002,结果发现抑制剂作用后乌索酸的诱导分化作用消失。因此,乌索酸能够诱导HL-60细胞向单核方向分化,其作用机制可能是通过激活PI3K/Akt通路,从而达到分化诱导作用。

人参多糖对人早幼粒白血病细胞株(HL-60)增殖的影响

目的：探讨人参多糖（GPS）对人粒单系造血祖细胞（CFU-GM）和人早幼粒白血病细胞株（HL-60）增殖分化的影响。方法：采用造血细胞体外培养，形态学观察，免疫细胞化学，流式细胞术等实验血液学技术。结果：GPS在体外能抑制HL-60细胞增殖，而同等剂量的GPS能明显促进正常粒单系造血祖细胞的增殖分化；在本实验条件下未见GPS对HL-60细胞有明显的诱导分化作用。结论：GPS可能通过阻止HL-60细胞从静止期（G0期）进入增殖周期（S/G2+M）期，抑制DNA的合成等途径进而抑制细胞的增殖；提示GPS有可能成为既能促进正常造血，又能抑制人白血病等肿瘤细胞增殖的天然诱导剂。

对映-贝壳杉烷型二萜化合物Wangzaozin A对人早幼粒白血病HL-60细胞生长抑制和凋亡诱导的作用

目的研究对映-贝壳杉烷型二萜Wangzaozin A对人早幼粒白血病细胞HL-60生长抑制、周期阻滞、凋亡诱导作用以及相关的机制。方法利用倒置显微镜观察和台盼蓝排染法检测了Wangzaozin A对HL-60细胞生长的影响;采用流式细胞术和吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染法检测化合物对细胞周期分布的影响以及诱导HL-60细胞凋亡的能力;进一步利用单细胞凝胶电泳法测试化合物对细胞DNA的损伤。结果 1～4μmol/L的Wangzaozin A对HL-60细胞具有较强的生长抑制作用,较高浓度(3μmol/L和4μmol/L)和较长处理时间(48～72 h)有较强的致死效应;1～2.5μmol/L药物处理细胞24 h或48 h条件下细胞周期分布主要表现为G1期阻滞;4μmol/L药物处理12～60 h条件下细胞周期分布主要表现为很强的S期阻滞;2～4μmol/L药物作用24 h或48 h可诱导凋亡产生,其凋亡率呈显著水平(P<0.01),相同条件下,药物对细胞DNA的损伤与对照相比差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论该化合物对HL-60细胞DNA的损伤作用极可能是引起细胞生长抑制、周期阻滞及凋亡的直接原因。

虎刺醛对人早幼粒白血病细胞HL-60的生长抑制、周期阻滞、凋亡诱导及DNA损伤作用

利用生长曲线法、流式细胞术、AO/EB双染法及单细胞凝胶电泳法,分别检测了蒽醌化合物虎刺醛对人早幼粒白血病细胞HL-60的生长抑制、细胞周期阻滞、细胞凋亡诱导以及DNA损伤能力.结果表明,2.5～12.5μg.mL-1的虎刺醛对人早幼粒白血病细胞HL-60具有显著的生长抑制作用;不同浓度(5～40μg.mL-1)的虎刺醛,可引起HL-60细胞G1期、S期和G2/M期周期阻滞;在2.5～12.5μg.mL-1浓度范围和24～48h培养时间下,虎刺醛可不同程度诱导HL-60细胞,其凋亡率达到显著水平(P<0.05)或极显著水平(P<0.01),且具有时间和浓度依赖性关系;与对照组相比,药物处理组(5～12.5μg.mL-1)均有极显著性(P<0.01)的彗星率,这表明,该浓度条件下,虎刺醛可较大程度地导致细胞核DNA损伤,这可能是引起周期阻滞进而抑制细胞增殖,最终导致细胞凋亡的原因.

超氧阴离子参与白藜芦醇诱导的人急性早幼粒白血病HL-60细胞凋亡

目的:研究超氧阴离子(O2ˉ.)、H2O2、线粒体膜电位(MMP)在白藜芦醇(RSV)诱导人急性早幼粒白血病HL-60细胞凋亡中的作用。方法:以RSV(10.0、50.0、100.0μmol/L)分别作用HL-60 6、12、24h后,用流式细胞术检测细胞内O2ˉ.、H2O2及MMP水平;四氮唑蓝凝胶法检测RSV作用HL-6024h后超氧化物歧化酶(SOD)的活性;MTT法检测SOD和RSV共同作用HL-60后的细胞生存率;锥虫蓝细胞计数法检测N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)和RSV共同作用HL-60后的细胞生存率。结果:RSV可使HL-60内O2ˉ.水平升高,H2O2水平、MMP降低,SOD活性无明显变化;SOD和NAC对RSV诱导的HL-60凋亡作用无明显影响。结论:RSV诱导HL-60凋亡机制是RSV引起细胞内O2ˉ.水平升高,MMP降低,从而启动caspases凋亡途径诱发细胞凋亡。

对映-贝壳杉烷二萜Leukamenin E对人早幼粒白血病细胞HL-60生长抑制及凋亡诱导的影响

利用台盼蓝排染法检测Leukamenin E对HL-60细胞生长的抑制作用；在倒置显微镜及荧光显微镜下分别检测细胞和细胞核形态变化；进一步采用流式细胞术和AO/EB荧光双染法检测Leukamenin E对 HL-60细胞周期分布的影响及诱导细胞凋亡的作用．结果表明，化合物Leukamenin E对HL-60细胞生长有很强的抑制作用，在低浓度和短时间条件下抑制 HL-60细胞的生长，高浓度（2.1～2.7μmol·L -1）及长时间（＞36 h）条件下对细胞具有致死作用，呈时间-剂量依赖性；1.5～2.7μmol·L -1 Leukamenin E处理24 h和48 h均引起了HL-60细胞显著的S期阻滞，同时产生显著的细胞凋亡（P＜0.01），且存在时间-剂量效应；与对照组相比， Leukamenin E处理组产生肾形核，并伴随有多核的产生．

急性早幼粒白血病细胞ATRA耐药株HL-60R、NB4R的构建及鉴定

目的:构建急性早幼粒细胞白血病细胞系HL-60、NB4的全反式维甲酸耐药株HL-60R、NB4R,并对其生物学性状进行鉴定。方法:以全反式维甲酸(ATRA)为诱导药物,采用浓度递增间歇诱导法构建HL-60、NB4细胞相应的ATRA耐药株。CCK8法鉴定其ATRA耐药性,并检测耐药细胞株的生长曲线及多药耐药性。结果:成功构建了ATRA耐药细胞株HL-60R、NB4R,并发现与亲代细胞相比,其生长增殖速度减慢,群体倍增时间延长,且对其它多种化疗药物产生一定程度的交叉耐药。结论:成功构建的耐药细胞系HL-60R、NB4R为急性早幼粒细胞白血病多药耐药机制的进一步研究奠定了基础。

靶向γ-catenin基因的RNAi对人急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞增殖的影响

目的探讨靶向γ-连接素(γ-catenin)基因的RNA干扰(RNAi)对人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞增殖的影响,为白血病的治疗寻找新的靶点。方法针对γ-catenin基因设计dsRNA,转染HL-60细胞,运用RT-PCR检测细胞γ-catenin mRNA表达,Westernblot检测γ-catenin蛋白表达,MTT法检测细胞增殖活性。结果经dsRNA转染后,γ-catenin基因表达及蛋白表达水平下降,HL-60细胞增殖受抑制。结论靶向γ-catenin基因的RNAi可以有效地降低HL-60细胞中γ-catenin基因表达,抑制HL-60细胞增殖,故γ-catenin基因可能作为潜在的白血病治疗靶点。

裸鼠人早幼粒白血病突变株细胞(HL-60-AR)异种移植模型的建立

将HGPRT~-的人早幼粒白血病突变株细胞(HL-60-AR)接种于裸鼠皮下,能形成实体性白血病肉瘤。肿瘤组织经光镜形态学、细胞超微结构、细胞化学、LDH同工酶谱、染色体分析、细胞遗传标记、以及分化性状的检测等多项指标鉴定,均类似于原来体外长期培养的细胞株。移植瘤细胞能在裸鼠体内连续传代,迄今已传至第12代。这个裸鼠人白血病细胞异种移植模型的建立,将为研究人类白血病细胞在体内的增殖、分化以及对抗白血病药物治疗的反应,提供一个有价值的实验系统。

ASON对急性早幼粒白血病细胞株HL60/VCR多药耐药的逆转作用

目的:探讨反义寡核苷酸(ASON)对耐长春新碱的急性早幼粒白血病细胞(HL60/VCR)多药耐药(mdr1)的逆转效果。方法:以HL60/VCR细胞为模型,合成正、反义寡核苷酸作用于HL60/VCR细胞,采用RT-PCR方法、流式细胞术及药敏试验等观察细胞mdr-1mRNA表达、mdr-1基因产物P-糖蛋白(P-gp)的表达和对药物长春新碱(VCR)的敏感性。结果:反义寡核苷酸处理的细胞mdr-1mRNA表达、P-gp表达较正义组及HL60/VCR细胞显著降低,且可明显提高HL60/VCR细胞株对长春新碱的敏感性。结论:反义寡核苷酸具有逆转HL60/VCR细胞多药耐药的作用。其作用机制可能是抑制mdr1mRNA的转录,使P-gp的表达受到明显抑制,提高对长春新碱的敏感性。

五种中药注射液对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖的影响

目的:体外研究5种中药注射液(榄香烯注射液、鸦胆子油乳注射液、康莱特注射液、生脉注射液和参附注射液)对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖的影响。方法:采用噻唑蓝比色法(MTT法)测定药物对细胞增殖的影响。结果:5种中药注射液对人早幼粒白血病HL-60细胞的增殖的抑制强度依次为:榄香烯注射液>鸦胆子油乳注射液>康莱特注射液>生脉注射液>参附注射液。结论:榄香烯注射液和鸦胆子油乳注射液对HL-60细胞系具有显著的抑制作用,具有一定的研究价值。本实验只是从体外的角度观察了5种中药注射液对HL-60细胞增殖的影响,至于其临床应用的具体实际效果,尚有待于进一步的临床观察和验证。

毫米波辐射对急性早幼粒白血病细胞增殖及分化的影响

目的：探讨毫米波（millimeter wave）对急性早幼粒白血病细胞增殖及分化的影响。方法：将体外培养的NB4细胞株接种于培养瓶，24小时后应用波长7．1mm、功率密度分别为1mW／cm2和5mW／cm2的毫米波辐射培养细胞30分钟，连续4天，每天观察细胞形态及数量改变，流式细胞术测定细胞增殖分化相关基因p53、p21、c－myc、c－fos及TGF－β1表达的改变。结果：1mW／cm2和5mW／cm2毫米波辐射能明显抑制NB4细胞增殖，辐射4天后的抑制率分别为35．6％和25．8％，1mW／cm2毫米波可诱导NB4细胞向终末细胞分化，诱导分化率为45．0％，主要为中、晚幼粒细胞；流式细胞术分析发现，经1mW／cm2毫米波辐射后，NB4细胞增殖分化相关基因p53、p21、c－fos表达增加，而c－myc和TGF－β1表达降低。结论：毫米波辐射能抑制体外培养的NB4细胞增殖并诱导其分化，作用机制可能与调控细胞增殖、分化相关基因的表达有关。

全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化为树突状细胞的实验研究

全反式维甲酸(ATRA)诱导APL细胞分化为成熟树突状细胞(dendritic cell,DC),目前国内外鲜见报道。本研究探讨全反式维甲酸与经典细胞因子共同作用诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞分化为DC的可能性,为研制APL-DC疫苗提供新的方法。对初治APL患者骨髓单个核细胞及HL-60细胞株分别在完全培养液中培养,用经典细胞因子组合(GM-CSF、IL-4、TNF-α)共处理,ATRA只在实验组加用。观测细胞形态,检测DC免疫表型,测定上清液IL-12水平,观察MLR反应及CTL效应。结果表明:实验组所得细胞有较明显树突状突起,有APL遗传学特征,其CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR和CD1d表达及IL-12分泌水平明显增高,并具有明显的MLR反应及CTL效应,但在HL60-DC中,CD1a增加无统计学差异。结论:利用ATRA可以成功诱导APL细胞为成熟功能性DC,其介导的MLR及CTL效应明显。经ATRA组合诱导的树突状细胞CD1d表达明显增高,推测可能参与NKT细胞激活,具体机制需进一步研究。

SPGL对白血病细胞系HL-60细胞增殖的影响

采用CFU-GM和白血病CFU-L集落培养、白血病HL-60细胞液体培养的方法,观察了光叶海酮总皂甙(SPGL)对正常人骨髓粒-巨噬系造血祖细胞(CFU-GM)和人急性髓系白血病HL-60细胞增殖的影响。结果表明:5 ×10^(-6)-5×10^(-4)mg/ml浓度SPGL能显著抑制HL-60细胞增殖,且具有明显的量-效关系。而对正常人造血祖细胞无明显的细胞毒作用,提示SPGL有抗白血病作用。此结果为进一步研究SPGL提供了实验依据。

人早幼粒白血病细胞与小鼠网织红细胞融合的胞质杂交细胞形态学观察

本研究对HGPRT缺失的人早幼粒白血病细胞突变株(HL-60-AR)与小鼠网织红细胞融合所形成的胞质杂交细胞,进行了光镜和电镜的形态学观察。所得结果显示:胞质杂交细胞在短期培养过程中,可见大量细胞呈现核固缩和核偏位,甚至出现排核现象;长期培养的胞质杂交细胞沿不同途径向较成熟的方向分化。本文并讨论了网织红细胞胞质因子对人早幼粒白血病细胞分化途径的影响。