人性激素结合球蛋白的真核表达、纯化鉴定及质控品应用分析

目的构建人性激素结合球蛋白(SHBG)的重组真核表达载体,获得高纯度的人SHBG重组蛋白。方法根据人SHBG基因序列,利用Primer Premier 6.0设计引物,扩增获得人SHBG基因;构建人SHBG-pCMV3H重组真核表达载体;将其转染至HEK-293F细胞,提取人SHBG重组蛋白,并用ConA柱亲和层析法纯化;采用人SHBG检测试剂盒对其蛋白浓度进行鉴定。结果人SHBG基因产物长度与预期一致,约为1200 bp;测序比对分析结果显示人SHBG基因成功插入pCMV3H载体;电泳结果显示在相对分子质量约为42×10^(3)处有一明显条带,与预期蛋白质位置一致;人SHBG检测试剂盒鉴定结果显示人SHBG重组蛋白作为质控品与西门子、安图生物、罗氏一致性良好;含钙离子缓冲液中人SHBG重组蛋白稳定性优于不含钙离子缓冲液。结论真核表达人SHBG重组蛋白能够作为SHBG检测试剂的质控品,且各厂家检测一致性良好;钙离子有利于提升人SHBG蛋白的稳定性。

应用iTRAQ和ELISA研究血清ApoB、FN1、SHBG与布加综合征的相关性

应用同位素相对标记与绝对定量将技术(iTRAQ)对布加综合征(Budd-Chiari Syndrome,BCS)患者以及对照组血清中蛋白质进行差异分析,筛选出差异蛋白,并对筛查的部分差异蛋白进行酶联免疫吸附法(ELISA)验证。方法:选取34例BCS患者与34例下肢静脉曲张患者血清,随机选取4例BCS患者血清和4例对照组静脉曲张患者血清,应用iTRAQ技术筛选出具有显著差异表达蛋白质,后对筛选出的血清人载脂蛋白B(ApoB)、纤维连接蛋白(FN1)和人性激素结合球蛋白(人性激素结合球蛋白)进行酶联免疫吸附法(ELISA)验证。结果:iTRAQ筛选出vWF、TIMP-1、FN1、SHBG、ApoB在两组间存在差异(p≤0.05);Elisa结果显示BCS组ApoB、FN1、SHBG含量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ApoB、FN1、SHBG可能参与了布加综合征的病理过程。