EV71对人恶性胶质瘤细胞株U251抗瘤作用初步研究

目的探讨EV71对人恶性胶质瘤细胞株U251的生长、凋亡和人端粒酶反转录酶（hTERT）表达的影响。方法采用RPMI1640培养U251细胞，培养24h后随机分为实验组和对照组，实验组按感染复数值为1加入EV71，并共培养72h，对照组不加EV71。加入EV71后0h、24h、48h和72h用倒置显微镜观察U251细胞形态和生长情况，流式细胞仪测定U251凋亡率，半定量RT—PCR检测hTERT的相对表达水平。结果倒置显微镜观察发现，与对照组比较，实验组加入EV71后24h，U251细胞生长明显受到抑制，48h和72h时U251细胞明显皱缩、变小、形态不规则，而对照组细胞则大小均匀。流式细胞仪检测发现，实验组加入EV71后24h、48h和72h，U251细胞的凋亡率均明显高于对照组[24h：（12．55±2．38）％比（1．42±0．21）％，48h：（65．60±8．48）％比（1．42±0．17）％，72h：（87．52±3．05）％比（1．41±0．16）％，P均=0．000]，且细胞凋亡率逐日升高，对照组细胞凋亡率无明显变化。实验组加入EV71后24h、48h和72h，U251细胞的hTERT相对表达水平均明显低于对照组[24h：（0．58±0．05）比（0．89±0．05），48h：（0．23±0．04）比（0．89±0．03），72h：（0．10±0．03）比（0．90±0．06），P均=0．000]，且表达水平逐日下降，对照组表达水平无明显变化。结论EV71能有效抑制U251细胞的生长，诱导细胞凋亡，具有潜在的抗瘤作用，其作用机制可能部分与下调U251细胞的hTERT表达有关。

肠道病毒71型诱导人恶性胶质瘤细胞U251自噬的研究

目的初步研究肠道病毒71型（EV71）诱导人恶性胶质瘤细胞U251的自噬现象及其对微管相关蛋白1轻链3（LC3）表达的影响。方法RPMI1640培养U251细胞24h后随机分为实验组和对照组，实验组按感染复数（MOI）值为1加入EV71，EV71感染12h后采用单丹磺酰戊二胺（MDC）染色标志细胞自噬泡，荧光显微镜观察自噬泡的形成。EV71感染24h后细胞免疫荧光检测LC3，荧光显微镜观察LC3在U251细胞内的分布。EV71感染2、4、8、12、24、48h采用Westernblot检On．0LC3-I和LC3-II蛋白的表达，并对LC3-II蛋白进行半定量分析。结果白噬泡经过MDC染色后，荧光显微镜观察发现自噬泡呈点状结构。与对照组比较，实验组在EV71感染12h，U251细胞内自噬泡明显增多；EV71感染24h，U251细胞皱缩、变小、形态不规则，LC3蛋白表达明显增多，主要分布在细胞质和细胞核周围；EV71感染4h后，LC3-II蛋白表达开始增加，明显高于对照组（P〈0．01）。结论EV71能有效诱导U251细胞自噬，发挥其溶瘤作用。

Stellettin B诱导人恶性胶质瘤SF295细胞发生自噬的作用及机理

目的 研究海绵来源三萜类化合物Stellettin B（Stel B）诱导人恶性胶质瘤SF295细胞发生自噬的作用,并对其作用机理进行初步探讨.方法 采用WST-8法研究Stel B对SF295细胞的增殖抑制活性;通过多种实验技术,包括单丹磺酰戊二胺（MDC）染色、蛋白质印迹（Western Blot）以及单体红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3（mRFP-GFP-LC3）质粒转染,评价Stel B是否具有诱导细胞发生自噬的作用;采用Western Blot研究Stel B对SF295细胞中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路的相关分子表达或磷酸化水平的影响;通过WST-8法检测应用自噬抑制剂氯喹抑制自噬作用后,Stel B抗肿瘤活性的变化.结果 Stel B能显著抑制SF295细胞的增殖,且具有剂量依赖性,半数抑制浓度（IC50）为0.026μmol/L.MDC染色和Western Blot结果显示,经Stel B作用后,SF295细胞内出现大量自噬小体,自噬标志性蛋白LC3B-Ⅱ的表达量增加.激光扫描共聚焦显微镜观察结果显示,Stel B能诱导SF295细胞发生自噬并阻滞自噬体与溶酶体相融合.Western Blot结果还显示,Stel B可抑制SF295细胞中PI3K催化亚基p110（PI3K-p110）蛋白的表达,并降低Akt和mTOR的磷酸化水平.利用自噬抑制剂氯喹阻断自噬后,Stel B对SF295细胞的增殖抑制作用与单独使用同浓度的Stel B相比明显增强,差异均具有统计学意义（均P〈0.05）.结论 Stel B能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导SF295细胞发生自噬,这种自噬作用有利于SF295细胞的存活,可通过联合使用自噬抑制剂增强Stel B的抗肿瘤活性.

替莫唑胺治疗人恶性脑胶质瘤40例及对血清反应因子表达的影响

目的探讨人恶性脑胶质瘤患者应用替莫唑胺治疗的临床疗效及对血清反应因子(SRF)表达的影响。方法选择2010年6月至2012年6月收治的人恶性脑胶质瘤患者80例,均分为研究组与对照组,对照组患者给予常规放射治疗,研究组患者联合替莫唑胺治疗。结果研究组临床总有效率为95.00%,显著高于对照组的72.50%(P<0.05);研究组患者接受治疗后的平均生存时间、中位复发时间分别为(25.48±3.19)个月、(23.07±3.28)个月,显著高于对照组的(20.98±2.72)个月和(17.13±2.31)个月(P<0.05);研究组患者治疗后的SRF阳性表达率为20.00%,显著低于对照组的70.00%(P<0.05);研究组患者骨髓抑制、恶心呕吐、脱发、头痛等不良反应发生率低于对照组(χ2=4.405 2,P=0.035 8)。结论替莫唑胺联合常规放疗治疗人恶性脑胶质瘤临床疗效显著,可有效改善患者的平均生存时间、中位复发时间、SRF阳性表达率,降低不良反应发生率,有利于康复,值得推广。

高效液相色谱法测定U87细胞内外液中的阿霉素含量

目的:建立U87肿瘤细胞中阿霉素的高效液相色谱荧光检测方法,为进一步研究化疗药对肿瘤细胞功能和活性的影响及逆转耐药研究提供方法学基础。方法:U87细胞以1×106·mL-1密度与不同浓度阿霉素孵育24h为药物处理条件。将细胞分为空白对照组和加药组,采用HPLC法测定细胞内外阿霉素的含量。色谱柱为Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-乙腈-0.01mol·L-1磷酸二氢铵(40∶15∶45)(以0.1%冰醋酸调整pH至3.52);柱温35℃,流速1.4mL·min-1,荧光检测器检测波长λex=495nm,λem=560nm,以盐酸柔红霉素为内标。结果:细胞内阿霉素在0.025～7.5mg·L-1范围内线性关系好,r=0.9999;细胞外阿霉素在0.1～10.0mg·L-1范围内线性关系好,r=0.9999。细胞内外液阿霉素的检测限均为0.005mg·L-1,细胞外液的定量限为0.1mg·L-1。日内、日间RSD均小于10%,样品稳定性好。结论:采用HPLC荧光法测定U87细胞内外液中阿霉素的含量,方法简单、准确、线形范围宽、灵敏度高、精密度好,可用于对培养的肿瘤细胞内外化疗药物浓度的动态变化规律研究。