苦瓜皂苷对人恶性黑素瘤SKMEL-2细胞增殖凋亡及JAK/STAT5通路的影响

目的:探讨苦瓜皂苷对人恶性黑素瘤SKMEL-2细胞生长及JAK/STAT5通路的影响。方法:采用1、2.5、5、7.5、10mg/mL浓度的苦瓜皂苷处理体外培养的人恶性黑素瘤SKMEL-2细胞,以CCK-8法分别在24、48、72h后检测细胞增殖情况,筛选合适药物作用浓度和时间。体外培养的SKMEL-2细胞,随机分为三组:对照组(control)、苦瓜皂苷组及顺铂组,药物处理后,CCK-8检测细胞增殖情况,测定细胞存活率;流式细胞技术检测细胞凋亡情况,测定细胞凋亡率;采用免疫印记(WB)法检测caspase3、Bcl-2、Bax、JAK、p-JAK、STAT5、p-STAT5的蛋白表达水平。结果:药物作用48、72h其抑制作用比24h高,而药物作用48、72h其抑制作用基本相同;浓度为1~5、7.5、10mg/mL的苦瓜皂苷都能抑制SKMEL-2增殖,其抑制作用随浓度升高而增强,但在药物作用48、72h后,浓度达到5mg/mL时抑制作用趋于稳定。选择5mg/mL浓度的苦瓜皂苷处理SKMEL-2细胞48h用于后续实验;药物处理后,与control组比较,苦瓜皂苷组及顺铂组细胞相对存活率、p-JAK、p-STAT5、Bcl-2表达明显降低(P<0.05),细胞凋亡率、caspase3、Bax表达明显升高(P<0.05),JAK、STAT5表达无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);苦瓜皂苷组与顺铂组相比,各指标无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:苦瓜皂苷对人恶性黑素瘤SKMEL-2细胞的生长有抑制作用、对其凋亡有促进作用,下调JAK/STAT5通路活性,上调凋亡蛋白caspase3、Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达可能是其作用机制。

芹菜素对人恶性黑素瘤A375细胞周期的影响及机制研究

目的研究芹菜素对人恶性黑素瘤细胞系A375细胞周期的影响,并进一步探讨其作用机制。方法 A375细胞经芹菜素干预后,MTT比色法检测芹菜素对细胞增殖的影响,PI单标流式细胞术检测芹菜素对细胞周期的影响,蛋白印迹法检测芹菜素对细胞周期相关蛋白Cyclin D1及p21表达的影响。结果芹菜素在体外能明显抑制A375细胞增殖,其抑制效应呈时间及浓度依赖性;芹菜素可影响A375细胞周期,经芹菜素干预的A375细胞,其细胞周期被阻滞于G1期;芹菜素可显著影响A375细胞周期相关蛋白的表达,芹菜素在下调A375细胞Cyclin D1表达的同时,明显上调p21蛋白的表达。结论芹菜素能拮抗人恶性黑素瘤A375细胞增殖,其机制可能与芹菜素影响A375细胞周期相关蛋白Cyclin D1/p21的表达进而调控A375细胞周期进程有关。