人胎儿真皮间充质干细胞对人恶性黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用观察

目的 观察人胎儿真皮间充质干细胞(FDMSCs)对人恶性黑色素瘤细胞(A375细胞)增殖、迁移、侵袭的抑制作用。方法 通过酶消化法从16~20孕周的人意外流产健康胎儿的背部皮肤中提取FDMSCs,并进行鉴定。选取A375细胞并分为3组,F-CM组加入FDMSCs条件培养基,A-CM组加入成人真皮成纤维细胞条件培养基,Control组加入DMEM低糖空白培养基,利用CCK-8细胞增殖实验、划痕细胞迁移实验、细胞侵袭实验测算各组细胞相对活力、细胞迁移率、侵袭细胞数。结果 FDMSCs可以从人胎儿皮肤中成功提取并体外培养,阳性表达间充质干细胞(MSCs)特异性标记CD44、CD90、CD105及胚胎组织特异性标记SSEA-4、OCT-4,且具备成脂、成骨、成软骨的多向分化能力。与Control组比较,F-CM组细胞相对活力下降,细胞迁移率低,侵袭细胞数少(P均<0.05)。结论 FDMSCs可抑制A375细胞的增殖、迁移和侵袭。

1例脑膜恶性黑色素瘤的脑脊液细胞学检查

脑膜恶性黑色素瘤是中枢神经系统较为少见的肿瘤,其恶性程度高、预后差[1-2]。脑脊液(cerebro-spinal fluid,CSF)细胞学检查对于疾病的诊断具有重要的参考价值。宁夏医科大学总医院神经内科于2018年收治了1例脑膜恶性黑色素瘤患者,现报道该病例的CSF细胞学变化及黑色素瘤细胞的形态特征。

低频超声对人恶性黑色素细胞A375和MV3增殖和凋亡的影响

目的研究低频超声对人恶性黑色素细胞A375和MV3增殖和凋亡及凋亡相关基因Bcl-2表达影响。方法低频超声辐照恶性黑色素细胞A375和MV3,MTT法检测A375和MV3细胞增殖,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。结果与正常对照组相比,A375细胞和MV3细胞低频超声照射组细胞增殖显著受到抑制(P<0.05),细胞凋亡明显增加(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);而A375低频超声照射组和MV3低频超声照射组之间没有显著性差异。结论低频超声可用于恶性黑色素细胞瘤的治疗。

紫菜多酚对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖和诱导凋亡的影响及机制探讨

以紫菜为原料,通过乙醇溶剂提取、硅胶柱层析、高效液相制备色谱等步骤,得到紫菜多酚组分C1、C2、D1、D2四个组分.通过MTT法测定组分C1、C2对人恶性黑色素瘤细胞A375的增殖抑制作用,结果表明:组分C1、C2作用于A375细胞48 h的IC50分别为1.10、1.58 mg·m L-1.采用Annexin V/PI双染测定细胞凋亡情况发现,A375细胞经紫菜多酚组分C1处理后凋亡的细胞比例增加.经组分C1作用的A375细胞中黑色素含量和相对酪氨酸酶活力均得到提高,且与药物浓度呈正相关关系;透射电镜检测A375细胞超微结构的变化发现紫菜多酚组分C1可诱导A375细胞趋向正常分化.

三氧化二砷对恶性黑色素瘤A_(375)细胞的增殖抑制作用

目的 研究三氧化二砷 (As2 O3 )对人恶性黑色素瘤A3 75细胞的增殖抑制作用和抗转移作用 ,为砷及其化合物治疗恶性黑色素瘤提供新的理论和实验依据。方法 用MTT比色法测定A3 75细胞活力 ,用免疫组化方法分析nm2 3蛋白的表达。结果 As2 O3 与人恶性黑色素瘤细胞株A3 75细胞生长抑制率之间有明显的浓度依赖关系 ,IC50 为 13 0 5 μmol·L-1,用药组 (As2 O3 浓度为 2 μmol·L-1)A3 75细胞中有nm2 3抗肿瘤转移基因的表达 ,而对照组则没有。结论 As2 O3 对恶性黑色素瘤A3 75细胞的增殖有浓度依赖性抑制作用 ,并可诱导体内产生nm2 3蛋白 。

三氧化二砷对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖及新癌基因PPO表达的影响

目的探讨三氧化二砷对人恶性黑素瘤A375细胞株细胞周期、增殖、凋亡及新癌基因PPO(proliferation and phosphorylation oncogene)表达的影响。方法培养人恶性黑色素瘤A375细胞株,采用MTT法检测三氧化二砷在不同浓度和不同时间下对A375细胞增殖的影响,流式细胞术分析三氧化二砷对细胞周期及凋亡的影响,倒置相差显微镜观察药物处理后对人A375细胞的细胞分化及形态的影响,免疫细胞化学(SP)法检测三氧化二砷对PPO蛋白表达的影响。结果 MTT法证实三氧化二砷在1～10μmol/L浓度范围内对A375细胞有明显的增殖抑制作用,呈现明显的剂量和时间依赖效应关系。流式细胞术检测发现,随着药物浓度的增加,G0/G1的细胞逐渐减少(P<0.01),S期的比例显著增加,出现S期阻滞。倒置显微镜观察发现细胞出现典型凋亡细胞形态学改变。免疫细胞化学法检测PPO蛋白主要表达于A375细胞胞浆内,染色呈棕黄色。三氧化二砷作用48 h后,随着药物浓度的增加,PPO的染色程度逐渐减弱,差异具有显著性(P<0.01)。结论三氧化二砷能够显著抑制A375细胞株增殖,并诱导凋亡发生,且与三氧化二砷的浓度和作用时间成正相关,其作用机制可能是通过下调新癌基因PPO的表达发挥作用。

芦笋提取液抑制恶性黑色素瘤A_(375)细胞增殖的研究

目的 :探讨芦笋提取液对人恶性黑色素瘤A3 75细胞增殖的抑制作用以及对其凋亡的诱导作用。方法 :用四甲基噻唑氮蓝比色法测定A3 75细胞活力 ;流式细胞术 (FCM)检测A3 75细胞的凋亡诱导及杀伤作用 (P <0 .0 1 )。结果 :芦笋提取液与人恶性黑色素瘤细胞株A3 75细胞生长抑制率之间有明显的浓度依赖关系 ,浓度分别为 2 0 0mg/ml、4 0 0mg/ml、6 0 0mg/ml和80 0mg/ml时 ,A3 75细胞的凋亡率及坏死率分别为 2 .39%、8.85 %、8.71 %、5 .1 6 %和 1 .6 5 %、1 .5 1 %、2 2 .1 0 %、82 .80 %。结论 :芦笋提取液能显著抑制恶性黑色素瘤A3 75细胞的增殖 ,且诱导A3 75细胞总的凋亡率和坏死率与其浓度之间存在着依赖关系。

三氧化二砷诱导恶性黑色素瘤A_(375)和B_(16)细胞凋亡的研究

目的 :研究不同浓度的三氧化二砷 (As2 O3 )对恶性黑色素瘤人A3 75细胞和小鼠B16细胞的凋亡诱导作用 ,为As2 O3 治疗恶性黑色素瘤提供新的理论和实验依据。方法 :用流式细胞术 (FCM )检测A3 75细胞和B16细胞的凋亡诱导及杀伤作用 :用不同剂量的As2 O3 (0 .1mmol·L-1、0 .2 5mmol·L-1和 0 .5mmol/L-1) ,对小鼠进行腹腔注射 (10ml·kg-1,连续注射 10d后 ,检测小鼠血清与心、肝、肾有关的生化指标。结果 :As2 O3 浓度分别为 5 μmol·L-1、10 μmol·L-1和 2 0 μmol·L-1时 ,A3 75和B16细胞的凋亡率分别为 11.85 %、5 5 .5 1%、5 4 .90 %和 9.81%、2 6 .4 5 %、9.93% :As2 O3 诱导A3 75和B16细胞总的凋亡和坏死率分别为11.90 %、5 5 .71%、5 7.4 0 %和 12 .96 %、2 6 .99%、87.13% ;不同剂量的As2 O3 (0 .1mmol·L-1～ 0 .5mmol·L-1)对小鼠肝、肾和心肌等功能无明显影响 ,与对照组各项指标无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :不同浓度的As2 O3 能明显诱导恶性黑色素瘤A3 75及B16细胞凋亡和坏死 ,对A3 75细胞的凋亡诱导作用强于B16细胞。As2 O3 (0 .1mmol·L-1～ 0 .5mmol·L-1)对小鼠肝。

驱虫斑鸠菊提取物抑制恶性黑色素瘤A375细胞增殖的研究

目的探讨驱虫斑鸠菊提取物对人恶性黑色素瘤A375细胞的增殖以及对其酪氨酸酶活性和黑色素含量的影响。方法四甲基噻唑氮蓝比色法测定对A375细胞抑制作用;显微法观察细胞形态;比色法测定酪氨酸酶活性和黑色素含量。结果在一定质量浓度范围(1～40mg.L-1)内随着驱虫斑鸠菊提取物质量浓度增加可抑制黑色素瘤细胞的增殖;驱虫斑鸠菊提取物质量浓度小于10mg.L-1,对酪氨酸酶活性和黑色素合成抑制有增加的趋势;大于20mg.L-1时,显示一定的细胞毒性作用。结论驱虫斑鸠菊提取物能显著抑制恶性黑色素瘤A375细胞的增殖,在一定质量浓度范围内(1～40mg.L-1)有浓度依赖关系(P<0.05)。

三氧化二砷对恶性黑色素瘤A_(375)细胞端粒酶活性的抑制作用

背景与目的 :研究三氧化二砷(As2O3)对人恶性黑色素瘤A375 细胞端粒酶活性的抑制作用,探讨砷及其化合物治疗恶性黑色素瘤的作用机制 ,为砷及其化合物治疗恶性黑色素瘤提供新的理论和实验依据。 材料与方法 :用TRAP_ELISA和TRAP_PAGE银染法测定A375 细胞端粒酶活性。结果 :As2O3 对人恶性黑色素瘤A375 细胞端粒酶活性抑制有明显的浓度和时间依赖关系。结论 :As2O3 对恶性黑色素瘤A375

维A酸对人类恶性黑色素瘤A375细胞增殖的影响

目的:研究维A酸(RA)抑制人类恶性黑色素瘤A375细胞增殖的作用.方法:用RA(atRA,13cisRA和9cisRA)、MA(RXR激动剂)及TTNPB(RAR激动剂)处理培养的人类恶性黑色素瘤A375细胞.用MTT法研究这些试剂对细胞增殖的影响,用流式细胞仪研究这些试剂对细胞周期的影响.结果:RA和TTNPB均可抑制A375细胞的增殖,而MA无此作用.在作用24h时的不同浓度(10-5,10-6和10-7mol/L)以及作用48和72h的10-5mol/L浓度时,TTNPB的抑制增殖作用均强于其它试剂处理组(P<0.05).细胞周期分析结果显示RA和TTNPB均可诱导A375细胞G0/G1期阻滞,而MA无此作用.在作用24和48h时的10-5mol/L浓度时,TTNPB的诱导G0/G1期阻滞作用均强于其它试剂处理组(P<0.05).结论:RA可抑制人类恶性黑色素瘤A375细胞的增殖,并诱导G0/G1期阻滞.RA的这些作用与RXR的激活无关,而可能与RAR的激活有关.

三氧化二砷对恶性黑色素瘤A_(375)细胞株凋亡的诱导作用

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3 )对人恶性黑色素瘤A3 75细胞株凋亡的诱导作用。方法 :采用流式细胞术 (FCM )检测不同浓度的三氧化二砷诱导A3 75细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率。结果 :As2 O3 浓度分别为 5 μmol/L、10 μmol/L、2 0 μmol/L时 ,A3 75细胞的早期凋亡率分别为 9.75 %、5 0 .9%和 4 3.7% ,晚期凋亡率分别为 2 .10 %、4 .6 1%和 11.2 % ,总凋亡率分别为11.85 %、5 5 .5 1%和 5 4 .9%。结论 :As2 O3 可诱导A3 75细胞早期凋亡和晚期凋亡 ,10 μmol/L和 2 0 μmol/L的As2 O3 可明显增加A3

长链非编码RNA TUSC7对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的影响

目的探讨长链非编码RNA TUSC7在人皮肤恶性黑色素瘤(malignant melanoma,CMM)细胞株中的表达及其对人黑色素瘤细胞增殖的影响。方法采用qRT-PCR技术检测人皮肤CMM组织和良性痣组织,CMM细胞株G-361、SK-MEL-1、A375、A875和正常人表皮黑色素细胞系HEMn-LP中TUSC7的表达。将CMM A375细胞分别转染TUSC7过表达质粒(pcDNATUSC7组)和阴性对照序列(pcDNA3.1组),分别采用CCK-8法和克隆形成实验检测两组细胞的增殖情况,采用流式细胞术检测细胞凋亡。结果 60例CMM组织和CMM细胞株中TUSC7的表达水平显著低于20例良性痣组织和正常人表皮黑色素细胞(P<0.05)。A375细胞过表达质粒pcDNA-TUSC7转染组中TUSC7表达水平显著高于pcDNA3.1组,差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8和克隆集落形成实验结果表明pcDNA-TUSC7组A375细胞增殖指数和细胞克隆数均显著低于pcDNA3.1组,流式细胞术检测凋亡率结果表明pcDNA-TUSC7组A375细胞凋亡率均显著高于pcDNA3.1组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CMM细胞株中TUSC7呈低表达,上调TUSC7表达能显著抑制CMM细胞的增殖和克隆形成能力,促进细胞凋亡,TUSC7可能参与CMM的恶性进展。

MTH1抑制剂TH588对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖与迁移的影响

目的探讨MTH1抑制剂TH588对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖、迁移的影响。方法利用细胞培养手段培养人恶性黑色素瘤A375细胞;应用倒置显微镜法观察TH588对细胞形态的影响;采用CCK-8法检测不同浓度TH588(0、4、8、16、32、64μmol/L)对A375细胞的增殖抑制作用;采用集落克隆形成抑制试验观察对比高中低三种浓度(12.8、6.4、3.2μmol/L)TH588对A375细胞的增殖抑制作用;细胞划痕实验检验TH588对A375细胞迁移能力的影响。结果CCK-8检测结果显示,同一时间段不同浓度TH588组与空白对照组比较,细胞存活率均降低;32、64μmol/L TH588浓度下培养48、72 h时细胞存活率均低于同TH588浓度下培养24 h时。倒置显微镜法观察TH588作用于人恶性黑色素瘤A375细胞后,细胞明显皱缩,且边缘变得模糊,有碎片颗粒产生。集落克隆形成抑制实验表明,TH588对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖有明显抑制作用。细胞划痕实验表明,经TH588作用后A375细胞划痕迁移距离在48 h内均较无干预的A375细胞迁移距离更短。结论TH588对人恶性黑色素瘤A375细胞的增殖及迁移有明显抑制作用,且低浓度的TH588便有较好的抑制效果。

斑蝥素对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的探讨不同浓度斑蝥素(CTD)对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖、凋亡的影响及其可能机制。方法体外培养A375细胞,分为对照组和不同浓度CTD处理组(0.625-5 mg/L CTD),分别培养24、48、72、96 h。MTS法检测CTD作用后A375细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡变化,Westernblot检测信号通路蛋白ERK1/2、AKT磷酸化水平的改变。结果实验浓度下,CTD对A375细胞的增殖均具有明显抑制作用,呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。细胞周期呈G0/G1期阻滞(P<0.05),G0/G1期细胞比例由对照组28.22%增加至CTD5 mg/L组69.61%,相应G2/M期和S期细胞比例明显下降(P<0.05)。A375细胞凋亡率显著增加,由对照组6.85%增加至CTD5 mg/L组69.76%。细胞周期阻滞和细胞凋亡具有剂量效应。Westernblot结果显示ERK1/2、AKT蛋白磷酸化水平在CTD 2.5 mg/L组、5 mg/L组明显下调,0.625 mg/L组、1.25 mg/L组未表现出显著性差异。结论 CTD对人恶性黑色素瘤A375细胞具有明显抑制作用,可能与抑制细胞增殖、诱导凋亡及G0/G1期细胞周期阻滞有关。另外,ERK和AKT信号通路可能参与了此调节作用。

IFN-β与恶性黑色素瘤细胞A375的关系

目的探讨恶性黑色素瘤细胞A375肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis induced ligand,TRAIL)诱导凋亡的敏感性。方法采用MTT法及流式细胞术分别检测不同浓度的可溶性TRAIL蛋白单独处理以及联合IFN-β处理后A375细胞的增殖率和凋亡率。采用western-blot、免疫组化方法检测TRAIL单独处理及联合IFN-β处理后A375细胞内TRAIL受体及凋亡相关蛋白的表达差异。结果 TRAIL蛋白联合IFN-β处理的恶性黑色素瘤细胞A375中TRAIL受体DcR1、DcR2、DR4、DR5表达增高,肿瘤细胞抑制率,凋亡率增加。与单独处理相比,联合处理后A375细胞内凋亡相关蛋白caspase8、caspase9表达上调,NF-κB下调。结论 IFN-β能通过上调黑色素瘤A375细胞内凋亡相关蛋白增加TRAIL受体的表达从而增强A375细胞对TRAIL的敏感性。

紫铆花素对人黑色素瘤细胞A375与人永生化角质形成细胞HaCaT共培养细胞生物学活性的影响

目的探讨紫铆花素对人黑色素瘤细胞A375与人永生化角质形成细胞HaCaT共培养细胞生物学活性的影响。方法建立A375细胞与HaCaT细胞的共培养细胞体系,实验分为对照组(等体积培养液),紫铆花素低、中、高剂量组(以下简称低、中、高剂量组,0.5,1.0,5.0μg/L)。采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;采用流式细胞仪检测细胞的周期分布和线粒体膜电位;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测干细胞因子(SCF)和其受体c-Kit,以及小眼畸形相关转录因子(MITF)的mRNA表达水平;采用Western blot法检测细胞酪氨酸酶相关蛋白1,2(TRP-1,TRP-2)及SCF,c-Kit,MITF的蛋白表达水平。结果与对照组比较,中、高剂量组细胞的增殖率均显著升高(P<0.01);与对照组比较,各剂量组G0/G1期细胞比例均显著降低,S期和G_(2)/M期细胞比例均显著升高(P<0.01),高线粒体膜电位细胞比例均显著升高(P<0.05或P<0.01),SCF,c-Kit,MITF的mRNA表达水平及SCF,c-Kit,MITF,TRP-1,TRP-2的蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论紫铆花素可能通过调节SCF,cKit,MITF的表达而影响A375细胞与HaCaT细胞共培养细胞的增殖、细胞周期和线粒体膜电位等细胞生物学活性。

白藜芦醇对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖和凋亡的影响

目的探讨白藜芦醇对人黑色素瘤细胞A375体外增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法用不同浓度的白藜芦醇作用于人黑色素瘤细胞A375,通过MTT法和HE染色法检测白藜芦醇对细胞增殖的影响;TUNEL末端标记法和Annexin V-FITC双标记流式法检测白藜芦醇对细胞凋亡的影响。结果不同浓度白藜芦醇对人黑色素瘤A375细胞均有抑制增殖和促进凋亡的作用,并存在剂量和时间依赖性。结论达到一定浓度的白藜芦醇对人黑色素瘤A375细胞有明显的抑制增殖作用,主要通过诱导A375细胞凋亡(主要是早期凋亡)抑制其增殖。

人恶性黑色素瘤A375细胞黑素刺激素受体(MC1R)的检测

目的检测人恶性黑色素瘤A375细胞膜上MC1R蛋白及其cDNA,为研究黑色素瘤细胞表面受体及靶向配体奠定基础。方法利用放射配体分析法检测人恶性黑色素瘤A375细胞膜上的MC1R蛋白;用RTPCR方法扩增人恶性黑色素瘤A375细胞MC1R的cDNA,并克隆至pMD18T质粒,进行酶切分析鉴定及扩增片段DNA序列测定。结果放射配体分析结果表明,125IαMSH可与人恶性黑色素瘤A375细胞膜特异结合。RTPCR结果显示,扩增产物的大小与MC1R的cDNA相符。测序结果证实扩增片段为MC1R基因的特异片段。结论证实人恶性黑色素瘤A375细胞膜上表达MC1R蛋白。MC1R基因的成功克隆为其进一步研究提供了必要条件。

麻疯树叶提取物对恶性黑色素瘤A375细胞增殖抑制及诱导凋亡作用的研究

目的研究麻疯树叶提取物对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响。方法用MTT法测定不同浓度麻疯树叶提取物对体外培养的人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用,采用倒置显微镜观察细胞形态学的改变,并用An-nexin-V-FIFT/PI双染色法检测细胞的凋亡。结果麻疯树叶提取物能抑制A375细胞增殖,诱导其凋亡,引起细胞形态学的改变,这些影响呈药物浓度剂量依赖性,并与药物作用时间正相关。结论麻疯树叶提取物在体外对人恶性黑色素瘤A375细胞的增殖具有显著的抑制作用,并能诱导其发生凋亡。