人感染禽流感病毒H7N9的流行和防治:证据、挑战与思考

2013年2月我国安徽省和上海市报道了3例全球首发人感染新型H7N9禽流感病毒病例,随后疫情迅速波及到临近的浙江、江苏等省。截至2013年5月30日,WHO已报告发病132例,死亡37例,病死率28%。本文针对此次重大突发疫情,基于数据和证据,回顾性分析其病原学、流行病学、临床特点、治疗和防控证据现状。对这种新发种间传播疾病爆发流行的风险监控和管理,我国乃至全球尚缺乏经验和证据。准确快速发现禽流感病毒变异和传播规律及速度成为防控、治疗的关键。依靠全球当前可得的最佳综合性证据,中西医并重,中西药并用,做到循证决策,才能有效防控疫情、治疗患者、减少损失。

广州市人感染H7N9禽流感病毒高致病性变异株监测与基因进化分析

目的通过对广州市人感染H7N9禽流感病毒高致病性变异株基因变异和进化特点进行分析,掌握本地区H7N9病毒病原学特点,为疾病防控提供参考。方法选取2017年广州市人感染H7N9禽流感病毒阳性标本10份,提取核酸扩增HA、NA、M基因进行测序,通过生物信息学软件分析病毒重要蛋白突变情况和遗传进化特点。结果广州地区H7N9禽流感病毒基因同源性差异较大,大部分毒株基因与广东毒株同源性最高,部分毒株基因与河南、内蒙古等地毒株同源性最高。监测到5株病毒为H7N9禽流感病毒高致病性变异株,部分病毒出现了HA蛋白Q226L的突变,提示对人呼吸道上皮细胞SAα-2, 6Gal受体结合能力增加。HA蛋白和NA蛋白上糖基化位点均有一定的增加和缺失突变。HA、NA和M1蛋白上毒力相关位点均突变增强。M2蛋白均呈现耐药突变,同时监测到2株高致病性突变株出现对神经氨酸酶抑制剂的耐药突变。遗传进化结果显示,HA基因和NA基因在华南和华东分支均有分布,M1基因进化特点相对复杂,分别与华南地区H9N2、H7N9病毒,及北方地区的H7N9病毒重组。结论 2017年广州地区发现2株对达菲耐药的人感染H7N9禽流感病毒高致病性变异株。H7N9禽流感病毒在广州地区不断发生进化重组,具有遗传多样性和复杂性,提示高致病性耐药株有向华南以外地区传播的风险。

一例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)的流行病学调查

目的通过对1例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)的调查分析,为制定人禽流感预防控制措施提供科学依据。方法采用流行病学调查、临床检查、血清学检查和 RT-PCR、 Real-time PCR 法进行分析和诊断。结果发现1例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1),经救治无效因呼吸衰竭死亡。患者有明确的病、死禽接触史。采用隔离治疗、个人防护、医学观察、消毒等措施,疫情得到控制,未出现二代病例。结论需加强禽流感疫情监测,采取综合防控措施,预防疫情再次发生。

2014—2016年广东省肇庆市人感染H7N9禽流感病毒基因组特征分析

目的了解广东省肇庆市2014-2016年人感染H7N9禽流感病毒基因进化特征。方法对肇庆市17例H7N9患者咽拭核酸直接进行8节段基因序列扩增与测定,用BioEdit5.0、MEGA6.0进行同源性和重要氨基酸位点分析,采用Neighbor-Joining法构建进化树,参比序列从GenBank下载。结果 7份H7N9病例标本获得8节段全基因序列,HA与A/chicken/Dongguan/695/2014(H7N9)相似度最高,NA与A/chicken/Dongguan/1075/2014(H7N9)相似度最高;内部基因与2013—2014年广东东莞、深圳禽源H7N9及H9N2相似度较高。HA和NA基因与广东省东莞、广州、深圳等地市的H7N9序列同处于珠三角进化分支,与安徽、浙江、江苏等长三角分支的序列相似性低。HA蛋白受体结合位点发生G186V、Q226L变异,裂解位点序列均为PEIPKGR↓GLF,含有2个碱性氨基酸;M2蛋白上发现耐药位点S31N,PB2蛋白上发现E627K突变,NA蛋白上未发现耐神经氨酸酶的位点变异。结论肇庆市人感染H7N9病毒株可能来源于2013—2014年广东省珠三角地区禽源H7N9和H9N2,G186V、Q226L和E627K位点变异增强了对人的易感性。

鄂州市首例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)病例报告

2010年05月31日鄂州市疾病预防控制中心接到鄂州市中心医院报告1例不明原因重症肺炎病例,患者女性,22岁,怀孕5个月。2010年05月20日左右出现畏寒、发热、体温39.2℃。发病前曾参与死鸡宰杀后的拔毛并食用了少量病死鸡肉。

人感染H6N1禽流感病毒HA基因的分子特征及进化分析

目的检测人感染H6N1禽流感病毒HA基因的分子特征、致病机制、来源及进化。方法从Flu和GISAID两大数据库中获得人感染H6N1及近缘禽流感病毒的HA序列,通过ML、MP、BI法构建系统发育树,推测进化速率和最近共同祖先(TMRCA)时间,并分析相关变异位点、糖基化位点及裂解位点。结果人感染与台湾3株禽感染H6N1病毒聚成一支,最近共同祖先时间为2002年,目前正在流行,且进化速度很快。其氨基酸序列含有5个N-糖基化位点和2个O-糖基化位点,裂解位点上游仅1个碱性氨基酸,拥有两个特异的变异位点P186L和A287T。结论人感染H6N1禽流感病毒目前仍是一种低致病性禽流感病毒,其HA基因由家鸡的序列进化而来。由于其高的进化速率及病毒重配的可能性,应引起高度重视。

广东省2015年人感染H7N9禽流感病毒基因特征分析

目的分析2015年广东省人感染H7N9禽流感病毒基因特征。方法对2015年1—12月送检广东省疾病预防控制中心的4份人感染H7N9禽流感病毒株进行病毒分离纯化并进行Ion Torrent高通量测序获得H7N9禽流感病毒全基因组8个基因片段。使用生物信息学软件将RNA序列与Gen Bank得到序列进行多重比对,并对病毒关键位点的分子变异情况进行分析,使用MEGA 7.0软件中最大似然法绘制遗传进化树进行基因进化分析。结果A/Guangdong/SZ17/2015(H7N9)、A/Guangdong/JM51/2015(H7N9)、A/Guangdong/ZH57/2015(H7N9)这3株人感染H7N9禽流感病毒的HA和NA基因与2014年广东省汕头、东莞等地的H7N9禽流感病毒进化距离最近,A/Guangdong/SW20/2015(H7N9)病毒的HA、NA基因与2014—2015年浙江温州、江苏淮安等地的H7N9禽流感病毒进化距离最近。ZH57病毒除NP基因与深圳H9N2亚型病毒高度同源(99.4%)以外,其余7个基因片段均与2013—2014年广东省内H7N9亚型禽流感毒株高度同源;其余3株病毒除HA和NA基因外,其余6个基因片段均与江西、安徽、江苏等地H9N2亚型病毒高度同源。分析相关致病位点得知,4株毒株中均出现可导致宿主特异性改变、病毒传播力、致病力、毒力及复制能力增强的位点突变,其中,4株病毒的HA蛋白受体结合区均发生G186V和Q226L这2个关键氨基酸位点的变异,对人呼吸道上皮细胞SAα-2,6Gal受体的结合能力增加,提示广东省H7N9禽流感病毒更容易感染人类。4株病毒的NA蛋白茎杆区69~73位氨基酸均出现缺失,这是禽流感病毒由野生水禽适应陆生家禽(鸡、鹌鹑等)的结果。4株病毒的M2蛋白均发生S31N突变,该突变会使流感病毒对M2离子通道抑制剂(金刚烷胺类药物)产生耐药性。所有毒株均保留了病毒对神经氨酸酶抑制剂的敏感性。结论 2015年广东省人感染H7N9病毒株具有遗传多样性及复杂性、致病力增强、对M2离子通道抑制剂的耐药性位点突变等趋势,存在对人和家禽宿主体内增殖及重配的可能性。

3例人感染H7N9禽流感病毒病例的流行病学特征及其对策分析

目的:分析2014年度苏州市姑苏区外环境监测的数据与该区2014年12月—2015年1月间确诊报告的3例人感染H7N9病毒病例的流行病学特征,以便进一步了解外环境与人感染H7N9病毒发病之间关联,为采取切实可行防控人禽流感措施提供依据。方法:对苏州市姑苏区所有存在禽类交易的农贸市场进行外环境采样,对确诊病例与病例的密切接触者进行个案调查并采样送检,分析其对流行病学特征。结果:3例病例发病时间都与去过农贸市场的外环境监测阳性一致,其病例呈高度散发,病例之间无流行病学关联,发病时间均为冬季,均有农贸市场暴露史;将病例采取隔离治疗,对密切接触者进行医学观察、疫点终末消毒;建议政府对检出阳性标本的市场暂停交易活禽,未检出阳性的市场应加强管理,落实定期休市与消毒的制度,控制疫情扩散。结论:具有活禽交易的农贸市场实施采样,其阳性与3例具有农贸市场暴露史的人感染高H7N9禽流感病毒病例的发病存在关联,暂未发现人传人的证据;早期发现和救治患者是提高患者预后的关键,应加强人感染H7N9禽流感病毒疫情的监测,并根据《苏州市活禽交易管理办法》相关规定,向政府建议对检出阳性标本的市场暂停交易活禽,未检出阳性的市场应加强管理,落实"四分开"和定期休市与消毒的制度。

湖北省首例人感染高致病性禽流感病例的流行病学调查

目的通过对1例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)的调查分析,为科学防控提供依据。方法采用病例流行病学调查方法,调查病例发病经过、可能的感染来源、传播途径及暴露因素等,医学观察患者的密切接触者,同时对患者进行临床诊治、实验室检测。结果确诊1例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1),经救治无效死亡。患者无明确病死禽接触史,有健康禽接触史。实验室检测鼻分泌物和下呼吸道灌洗物均分离出禽流感病毒H5N1,下呼吸道灌洗物禽流感病毒H5N1核酸阳性。患者的密切接触者中均未发现异常临床表现。结论存在感染来源不明的人禽流感病例,需加强不明原因肺炎监测和进一步研究人禽流感有关危险因素。

人感染H7N9禽流感病毒危重症患者的救治与护理

目的研究对人感染H7N9禽流感病毒危重症患者的救治及护理措施。方法回顾性分析我院收治的5例人感染H7N9禽流感病毒危重症患者的临床资料,探讨其救治及护理方法。结果本组5例患者中病情稳定且顺利出院4例,另有1例进入康复期。此外,在救治及护理过程中,未有任何医护人员感染H7N9禽流感病毒。结论通过对人感染H7N9禽流感病毒危重症患者开展科学有效的专科护理,可确保成功抢救。

贵州省首次报道人感染H9N2禽流感病例的病原学诊断及意义

目的通过病原学诊断确诊贵州省首例人感染H9N2禽流感病例。方法采集符合流感样病例定义的标本,进行实时荧光定量(Real-Time)PCR检测,同时通过病毒分离技术分离病毒。结果实时荧光定量(Real-Time)PCR结果显示禽流感病毒H9N2亚型阳性;成功分离出H9N2亚型禽流感病毒,细胞培养物红细胞凝集试验滴度为1:16,Real-Time PCR检测为禽流感病毒H9N2亚型阳性。结论贵州省禽类外环境监测中,H9N2禽流感病毒一直处于较高的感染水平,监测发现的人感染H9N2禽流感病例为贵州省首次报道。

理化条件对人感染H9N2禽流感病毒灭活效果的评价

目的评价温度、紫外线以及3种消毒剂对人感染H9N2禽流感病毒的灭活效果,确定H9N2病毒的灭活条件。方法含有10^10.67TCID50/ml病毒悬液分别在50℃、56℃、60℃、65℃温度下作用10~60 min;紫外线(UV)照射从10 min至80 min,每间隔10 min取样。物理条件作用的病毒残留活性在MDCK细胞上测定,通过Reed-Muench方法计算组织半数感染剂量(TCID50)来评估物理灭活效果。含有1010.37EID50/ml病毒悬液与等体积的10%的84消毒液、75%乙醇、1%浓度Virkon溶液作用1~15 min后接种SPF鸡胚,通过病毒鸡胚培养是否阴性来评估杀灭效果。当病毒滴度下降4 lgTCID50/ml或鸡胚病毒培养阴性视为该方法有效。结果人感染H9N2禽流感病毒经56℃15 min处理后病毒滴度下降4.02 lg TCID50,而作用30 min后病毒活性将降低到检测水平以下;60℃和65℃热灭活大于10 min,病毒活性将降低到检测水平以下。在UV照射20 min后病毒活性下降5.67 lgTCID50,作用70 min后病毒将降低到检测水平以下。10%84消毒剂、75%乙醇消毒液、1%Virkon作用3 min之后不能检测到病毒增殖。结论人感染H9N2禽流感病毒需要在特定条件下才能被有效灭活,我们的研究为人感染H9N2禽流感病毒的生物安全操作提供了实验依据。

江西省3例H10N8禽流感病毒感染者回顾性分析

目的：分析和探讨江西省H10N8禽流感病毒感染患者的感染来源。方法采用江西省2013年底及2014年年初报告的H10N8禽流感病毒感染患者的流行病学个案调查资料和相关标本检测结果进行描述性流行病学分析。结果3例H10N8感染患者均由重症肺炎监测发现，其中2例死亡，1例病程超过6个月；发病前均有活禽或活禽市场暴露史；3例患者的含漱液或下呼吸道抽吸液标本经南昌市及江西省疾病预防控制中心检测，结果显示为甲型流感2009pdmH1、H3、H5、H7、H9等亚型阴性，患者1和患者2的标本为甲型流感通用引物阳性，患者3的标本为H10阳性。3份标本经国家流感中心进行检测，结果显示为H10N8阳性。33名密切接触者在1周的观察期内未出现流感样症状；患者暴露活禽市场环境监测标本中H10N8禽流感病毒RT-PCR检测阳性率为5.19%；落实各项防控措施后，无新发患者。结论江西省3例H10N8禽流感病毒感染患者可能与暴露于活禽市场有关。

2017年安徽省宿州市人感染H7N9禽流感病毒基因组特征分析

目的分析2017年安徽省宿州市人感染H7N9禽流感病毒的基因组分子进化特征。方法收集宿州市4例H7N9病例的咽拭子样本，分离培养后进行扩增和测序，构建血凝素HA基因进化树并进行重要氨基酸位点的变异分析。结果4株毒株的HA与A／Henan／15337／2017（H7N9）的相似度最高（99％）；神经氨酸酶NA与A/changsha，44／2017（H7N9）的相似度最高（99％-100％）；其他内部基因与2013-2017年浙江省、湖南省、江西省和广东省等地区分离到的H9N2相似度较高（94％-100％）。分子进化树显示均为长三角分支。HA蛋白受体结合位点未发生G186V、Q226L突变；NA蛋白上未发现耐神经氨酸酶的位点突变；PB2蛋白发生E627V突变；M1蛋白出现N30D、T215A突变；NS1蛋白出现P42S突变、盘状同源区域模块缺失；M2蛋白出现S31N突变。结论4株人感染H7N9禽流感病毒均处于长三角分支，M2蛋白s31N突变提示对M2离子通道抑制剂出现耐药，应及时关注其遗传变异演变方向，为H7N9禽流感的有效防治提供科学依据。

河南省首例人感染H7N9禽流感病例的流行病学调查

[目的]通过对1例人感染H7N9禽流感病毒患者的调查分析,为人感染H7N9禽流感的科学防控提供依据。[方法]采用流行病学调查方法,调查病例的发病经过、可能的感染来源、传播途径及暴露因素等,医学观察患者的密切接触者,同时对患者进行临床诊治、实验室检测。[结果]确诊1例人感染H7N9禽流感病毒,经救治后痊愈出院。患者有明确的活禽接触史,咽拭子检测H7N9禽流感病毒核酸阳性。患者的密切接触者中均未发现异常临床表现。通过扩大监测流感病例160例和职业人群858例,均未发现H7N9禽流感病毒核酸阳性。当地活禽交易市场鸡咽拭子标本检出2份H7N9禽流感病毒核酸阳性,阳性鸡来源于外省。[结论]活禽暴露是人感染H7N9禽流感病毒的关键风险因素,暂无证据人传人,未发现人群隐性感染和轻症病例。仍需开展扩大监测和流行病学调查,以完善对感染谱的认识。

2017年贵州省H7N9禽流感病毒血凝素基因特性分析

为了解2017年贵州省H7N9禽流感病毒的分子特征和疾病风险,运用生物信息学软件对14株病毒HA基因的同源性、遗传进化、受体结合关键位点、致病相关和糖基化位点进行分析,明确了其HA基因核苷酸同源性为95.9%~100%,与WHO推荐的A/Shanghai/2/2013和A/Anhui/1/2013疫苗株的同源性分别为96.8%~97.8%和96.8%~97.9%;14株毒株均属于长三角分支,来源于5个不同的毒株;其中13株为低致病性禽流感毒株,而A/Guizhou-Weining/CSY01/2017为高致病性禽流感毒株;受体结合关键位点14株毒株均存在G186V的突变,13株存在Q226L的突变;潜在糖基化位点无变异。

长沙市1例人感染H3N8禽流感病例的流行病学调查和病原学分析

目的了解人感染H3N8禽流感病例的流行病学特征和临床特征及其病原的分子生物学特征,为人感染H3N8禽流感防控提供科学依据。方法采用流行病学调查方法对长沙市2022年5月1例人感染H3N8禽流感病例的可疑暴露史、感染途径、发病及就诊经过,以及密切接触者、可疑暴露者等涉疫重点人员进行现场调查,并进行描述性分析;采用核酸检测和基因测序技术,进行病原学检测和基因特征分析。结果病例发病前6 d有活禽交易市场暴露史,在活禽交易市场、活禽来源批发市场均检测出禽流感H3、N8亚型阳性。深度基因测序显示,病毒对哺乳动物发生适应性突变,对烷胺类药物敏感性降低,未检测到神经氨酸酶抑制剂类药物和聚合酶抑制剂类药物相关的耐药性突变。结论病例暴露于被H3N8禽流感病毒污染的活禽交易市场环境而感染,未发现人际间传播。

中国台湾地区H6N1禽流感病毒血凝素基因的适应性进化

2013年在中国台湾地区发现了第一例人感染H6N1禽流感,研究该地区H6N1病毒血凝素基因(HA)的适应性进化特征和种群动力学,将为人感染H6N1病毒的来源、进化及致病机制的理解提供更多信息,为进一步的研究和防治提供一定帮助。本研究从Flu和GISAID两大数据库中获得中国台湾地区所有已释放的H6N1病毒的HA序列,构建系统发育树和进化动力曲线,并推测其进化速率,分析其适应性进化特征。结果表明中国台湾地区H6N1病毒的HA有五种类型,其中人感染H6N1病毒的HA所属类型为目前当地优势类型;该病毒种群于1971年底第一次扩张,2008年迅速减少,而后又略有增加。同时在长期的进化过程中,3个位点受到正选择作用的影响,增加了病毒的适应能力;89个位点受负选择作用的影响,它们在病毒的复制、流行中可能具有重要的功能;其中剪切位点附近的329位所受负选择作用强烈(PSLAC0.001、PFEL0.000、BFREL137),此位点可能与病毒毒力有关。中国台湾地区H6N1病毒的HA已发生了明显的适应性进化,具有发生疫情的可能性,人们应高度重视,并能及时给与监测和防治。

福州市人感染H7N9流感病毒基因特性分析

目的了解福州市人感染H7N9流感病毒基因特性及进化分布。方法对2013-2016年福州市流感监测网络实验室从监测哨点医院采集的不明原因肺炎病例中人感染H7N9流感病毒核酸检测阳性的标本进行病毒分离,选取部分H7N9禽流感病毒株进行基因组基因序列测定,使用DNAman.exe分析软件进行基因序列比对,并对病毒关键位点的氨基酸变异情况进行分析,绘制遗传进化树进行进化分布分析。结果血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因进化树分析结果显示福州市人感染H7N9禽流感病毒株与以上海、浙江为代表的长三角分支相近。7株毒株中均出现可导致宿主特异性改变、病毒传播力、致病力、毒力及复制能力增强的相关致病位点突变。病毒的HA蛋白受体结合区均发生G186V和Q226L这2个关键氨基酸位点的变异,HA蛋白裂解位点序列均为PEIPKGR↓GLF,含有2个碱性氨基酸。7株病毒的NA蛋白茎杆区69~73位氨基酸均出现缺失。病毒的M2蛋白均发生S31N突变。结论福州市人感染H7N9病毒株具有遗传多样性及复杂性,呈现致病力增强、对金刚烷胺类药物耐药等特点,在监测工作中应加强病原学的监测和遗传变异特性的研究。

人感染H7N9禽流感患者二例救治分析

人感染高致病性H7N9禽流感是由H7N9亚型禽流感病毒引起的急性呼吸道传染病,其病程进展快,其中重症肺炎病例常可合并急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory disease syndrome,ARDS）、呼吸衰竭（respiratory failure）、感染性休克（septic shock）,甚至多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrame,MODS）,病死率较高。