鸽H9N2亚型禽流感病毒的分离鉴定及致病性试验

H9N2亚型禽流感病毒属于A型流感病毒,目前H9N2亚型禽流感病毒不仅可以感染家禽,而且可以感染猪、猫等哺乳动物,甚至出现人类感染现象。因此,H9N2亚型流感病毒不仅影响畜禽的健康养殖,同时也具有一定的公共卫生学意义。近年来鸽群感染流感病毒时有报道,这其中包括H5N1、H7N9以及H9N2亚型禽流感病毒。虽然H9N2亚型禽流感毒株的致病性相对于H5和H7亚型较低,但是该亚型病毒在我国家禽中存在较为普遍,且目前从鸽子已分离到重组的H9N2毒株,该毒株不仅引起鸽子感染而且具有优先与人类呼吸道表面受体结合的能力,因此加强流感病毒在鸽群中流行情况具有重要的现实意义。

2016-2018年中国大陆人感染高致病性H7N9禽流感疫情和死亡病例分析

目的分析2016—2018年中国大陆人感染高致病性禽流感(HPAI)H7N9病毒疫情和死亡病例,为降低疾病严重性,减少疾病负担提供科学依据。方法利用现有人感染H7N9禽流感监测数据,运用描述性流行病学方法对人感染HPAI病毒疫情的时间、空间及人群等相关流行病学特征进行分析,并比较存活病例与死亡病例的流行病学和临床特征差异。结果中国大陆共8个省份发现人感染HPAI H7N9病毒病例32例,死亡13例,病死率为40.63%,与人感染低致病性禽流感(LPAI) H7N9病毒病例(37.98%)比较差异无统计学意义(χ2=0.090,P=0.763)。人感染HPAI H7N9病毒病例中位年龄为59岁,男女性别比为1.67∶1,职业以农民为主(81.25%)。HPAI H7N9死亡与存活病例间在人群特征、发病时间、地区分布、病程关键时间间隔、暴露史和基础性疾病患病情况等因素方面差异无统计学意义。而与存活病例比较,急性呼吸窘迫综合征、肾功能不全、心力衰竭和感染中毒性休克等并发症为病例死亡的可能影响因素。结论 2016—2018年中国大陆人感染HPAI H7N9病毒病例病死率水平较高,特定临床症状或并发症的出现可能预示预后不良,应进一步加强临床诊疗相关研究,总结临床经验,同时有针对性地开展医务人员培训,以降低疾病的严重性。

广州市人感染H7N9禽流感病毒高致病性变异株监测与基因进化分析

目的通过对广州市人感染H7N9禽流感病毒高致病性变异株基因变异和进化特点进行分析,掌握本地区H7N9病毒病原学特点,为疾病防控提供参考。方法选取2017年广州市人感染H7N9禽流感病毒阳性标本10份,提取核酸扩增HA、NA、M基因进行测序,通过生物信息学软件分析病毒重要蛋白突变情况和遗传进化特点。结果广州地区H7N9禽流感病毒基因同源性差异较大,大部分毒株基因与广东毒株同源性最高,部分毒株基因与河南、内蒙古等地毒株同源性最高。监测到5株病毒为H7N9禽流感病毒高致病性变异株,部分病毒出现了HA蛋白Q226L的突变,提示对人呼吸道上皮细胞SAα-2, 6Gal受体结合能力增加。HA蛋白和NA蛋白上糖基化位点均有一定的增加和缺失突变。HA、NA和M1蛋白上毒力相关位点均突变增强。M2蛋白均呈现耐药突变,同时监测到2株高致病性突变株出现对神经氨酸酶抑制剂的耐药突变。遗传进化结果显示,HA基因和NA基因在华南和华东分支均有分布,M1基因进化特点相对复杂,分别与华南地区H9N2、H7N9病毒,及北方地区的H7N9病毒重组。结论 2017年广州地区发现2株对达菲耐药的人感染H7N9禽流感病毒高致病性变异株。H7N9禽流感病毒在广州地区不断发生进化重组,具有遗传多样性和复杂性,提示高致病性耐药株有向华南以外地区传播的风险。

神经氨酸酶E119D、R152K突变对人感染高致病性H7N9禽流感病毒药物敏感性的影响

2016年底出现的高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza,HPAI)H7N9病毒是H7N9禽流感病毒的变异体,HPAI H7N9病毒中耐药株比例较高且其在哺乳动物细胞中适应性强。为进一步研究HPAI H7N9病毒神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)耐药位点,本研究以HPAI H7N9病毒A/Guangdong/17SF006/2017株为骨架,利用反向遗传学技术分别制备NA E119D、NA R152K突变HPAI H7N9重配病毒,并分别命名为rg006-NA119D和rg006-NA152K。NA抑制试验结果显示,奥司他韦对rg006-NA119D(平均IC50(nM)±SD,7.87±0.20;升高5.50倍)和rg006-NA152K(平均IC50(nM)±SD,1.57±0.01;升高1.10倍)正常抑制。扎那米韦对rg006-NA152K(平均IC50(nM)±SD,10.54±0.15;升高6.13倍)正常抑制,但对rg006-NA119D抑制程度高度降低(平均IC50(nM)±SD,1068±3.00;升高620.93倍)。rg006-NA119D和rg006-NA152K病毒在MDCK细胞中均复制良好,其前期(18h、24h)复制水平与其对应的敏感株相当。在扎那米韦存在的条件下,HPAI H7N9敏感株基本不能复制,rg006-NA119D和rg006-NA152K病毒复制水平有所下降,但rg006-NA119D在后期(48h、72 h)复制水平较高,表明rg006-NA119D对扎那米韦耐药。本研究结果对于HPAI H7N9等人感染禽流感病毒的临床用药、风险评估具有一定的参考价值。

一例驼鸟低致病性禽流感病毒与沙门菌、产气荚膜梭菌混合感染的诊治

禽流感病毒可感染鸡、火鸡、鸭、鹅、麻雀、雉鸡、鹧鸪、驼鸟、孔雀、鸽子等多种家禽和野禽。高致病性禽流感是由A型正黏流感病毒引起的一种以导致呼吸系统症状及严重败血症为主要临床症状的传染病,病原主要是H5和H7亚型禽流感病毒。低致病性禽流感是由正黏病毒H9亚型弱毒株引起的,常伴随大肠杆菌、沙门菌等病原微生物的混合感染。

轻症和重症人感染H7N9禽流感病毒的致病性

【目的】研究来自不同临床类型H7N9感染者病毒分离株的致病性,探索病毒分子特性与致病差异的关系。【方法】建立人PBMC体外培养及病毒感染模型,人肺组织体外培养及病毒感染模型以及小鼠感染H7N9动物模型,分别从以上3个层次研究两株来自轻症和重症H7N9感染者病毒分离株(即GD-6和GD-7)的感染性及病理损伤状况。【结果】两株病毒均能感染人PBMC、人肺组织体外培养模型和Balb/C小鼠的肺组织,并在其中有效复制,且GD-7的增殖能力强于GD-6。病毒主要感染人肺组织的II型肺泡上皮细胞,GD-7引起肺组织的病例变化更加明显。在小鼠肺组织,GD-7的病毒载量高于GD-6,小鼠感染病毒后其肺指数增大,肺组织的病理变化明显,且GD-7对小鼠的致病力强于GD-6。【结论】重症分离株GD-7的复制能力和致病力强于轻症分离株GD-6,结合前期研究结果 ,两株病毒存在关键氨基酸位点的差异,其中PB2蛋白的627位点在GD-7发生了突变E627K,因此推测病毒载量及关键位点突变可能对病毒的致病力起重要作用。

全球首例人感染H7N4高致病性禽流感患者的临床护理

禽流感病毒属于正粘病毒科中的A(甲)型流感病毒属[1-2]。根据血凝素蛋白及神经氨酸酶蛋白的不同可分不同亚型。其中H7亚型因其高致病性而备受关注[3]。1997年11月,在澳大利亚Tamworth镇附近2个养鸡场中首次发现H7N4禽流感病毒[4]。2018年1月,本院收治全球首例人感染甲型H7N4禽流感患者,经过22 d的积极治疗与精心护理,患者病情好转出院,未出现护理并发症。现报告如下。

不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导鸡TLR-7和Mx基因mRNA转录水平的差异

本试验拟研究不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导SPF鸡、SPF鸡胚和鸡胚成纤维细胞中TLR-7和Mx基因mRNA转录水平的动态变化,为不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导IFN-Ⅰ产生差异的机制提供依据。150只6周龄SPF鸡随机分为3组,分别静脉接种PBS、105 EID50毒株SD/196和SD/818各0.2mL,分别于接种后的第1、3、5、7和10天每组剖杀8只,收集具有明显病变差异的组织;180枚10日龄SPF鸡胚分别尿囊腔接种PBS、104 EID50的SD/196毒株和SD/818毒株各0.1mL,分别于接种后的第4、8、16、24、32和48小时每组收集胚体10个;鸡胚成纤维细胞分别接种PBS、SD/196和SD/818毒株病毒液(1moi)进行37℃培养,于感染后的第4、8、16、24、32和48小时收集细胞;动态收集的病变组织、胚体和成纤维细胞通过荧光定量PCR测定TLR-7和Mx基因mRNA水平的表达。结果显示,肺、肾、十二指肠和法氏囊为主要病变差异组织,除鸡胚TLR-7的表达外,毒株SD/818大部分时间点诱导主要病变差异组织、鸡胚和成纤维细胞中TLR-7和Mx基因mRNA的表达显著高于毒株SD/196(P<0.05)。结果表明不同致病性H9N2亚型禽流感病毒明显诱导了SPF鸡主要病变差异组织、SPF鸡胚和鸡胚成纤维细胞中TLR-7和Mx基因mRNA的表达,且较高致病性毒株SD/818诱导表达量明显高于较低致病性毒株SD/196。

一例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)的流行病学调查

目的通过对1例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)的调查分析,为制定人禽流感预防控制措施提供科学依据。方法采用流行病学调查、临床检查、血清学检查和 RT-PCR、 Real-time PCR 法进行分析和诊断。结果发现1例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1),经救治无效因呼吸衰竭死亡。患者有明确的病、死禽接触史。采用隔离治疗、个人防护、医学观察、消毒等措施,疫情得到控制,未出现二代病例。结论需加强禽流感疫情监测,采取综合防控措施,预防疫情再次发生。

经鼻高流量氧疗治疗人感染H7N9禽流感患者的护理体会

人感染H7N9禽流感是由H7N9禽流感病毒引起的急性呼吸道传染病。2013年2月在安徽、上海等地被全球首次发现,作为高致病性亚型,一旦感染可直接引起严重肺部病变,迅速出现低氧症状,进展为急性呼吸窘迫综合征（ARDS）。

贵州省第2例高致病性禽流感A/H5N1病毒感染患者体外膜肺氧合的护理

高致病性禽流感A／H5N1病毒感染（简称人禽流感）一其临床特点表现为流行病学不典型、散在发病、发现晚、病情重、进展快、病死率高的特点，全球已确诊病例共582例，其中343例死亡；截至2012年1月5日，中国内地已确诊41例，其中27例死亡。

H7N9禽流感病毒及其高致病性的研究进展

2013年3月31日,中国卫生部确诊了3例感染H7N9禽流感病毒患者,目前该病毒在我国已发生五次大的流行,研究显示H7N9禽流感病毒流行区域逐步扩大,且逐渐由低致病性转变为高致病性。本文旨在对H7N9禽流感病毒及其高致病性的研究进展进行综述,为该病毒的预防及治疗提供科学依据。

H7N9禽流感病毒与其他流感病毒对雪貂致病性与传播力的比较

目的针对2013年3月中国爆发的人感染H7N9禽流感病毒,在雪貂体内进行致病性及传播力的研究,并与甲型H1N1流感病毒、H5N1禽流感病毒进行比较。方法对新发H7N9毒株、甲型H1N1流感病毒、H5N1禽流感病毒感染雪貂后的临床症状、体征,呼吸道排毒情况,组织病理学变化等进行评价和比较,并对H7N9毒株在雪貂群体中的传播力进行研究。结果雪貂模型的临床症状、死亡率、病毒传播以及组织病理学分析显示:H7N9病毒的致病性低于H5N1,与2009年起源于北美的甲型H1N1流感病毒相当。新发H7N9禽流感病毒可以在雪貂的呼吸道、心脏、肝脏以及嗅球进行复制。值得注意的是H7N9禽流感可以通过飞沫在雪貂间进行低水平的传播,并且在传播过程中,病毒基因组内有多个位点的氨基酸发生了替换。结论 H7N9禽流感病毒对雪貂的致病性较H5N1禽流感病毒低,与甲型H1N1流感病毒对雪貂的致病性相当,H7N9禽流感病毒可在雪貂间进行传播。

江西省2013-2017年人感染H7N9禽流感病例流行特征及时空聚集性分析

目的分析不同流行期江西省人感染H7N9禽流感病例的流行病学特点,为疫情防控提供依据。方法采用流行病学个案调查表对我省2013-2017年报告的人感染H7N9禽流感确诊病例进行流行病学调查,所得数据进行描述性流行病学分析和时空聚集性分析。结果52例病例主要发生在冬春季节,其中2017年发病数的73.08%;男女性别比例为1.47∶1,2017年前后病例的性别分布差异无统计意义(χ^2=0.049,P=0.82);2017年前后40岁以下和40岁以上病例分布差异有统计学意义(χ^2=4.17,P=0.041);前瞻性时空聚集性分析共探测到2个时空聚集区域,2016年12月至2017年3月赣东北地区存在聚集性(RR=26.43,LLR=37.88,P<0.01),2017年1月至2017年3月,聚集地为赣西北地区(RR=28.07,LLR=20.52,P<0.01)。结论尽管病例的大部分流行性别学相关指标未发生明显的变化,但2017年1-3月人感染H7N9禽流感发病存在较强的时空聚集性。

不同年代的低致病性HH7N9亚型禽流感病毒对SPF鸡致病性的研究

为了了解前4个流行波次中低致病性H7N9亚型禽流感病毒致病性的特点,选择2013~2016年不同年代的H7N9代表株进行了SPF鸡致病性试验,系统比较了各病毒在排毒、复制、诱导宿主免疫应答及引起鸡肺脏病理变化等方面的差异。致病性结果表明所有的鸡都没有明显的临床症状也未死亡。肺损伤及排毒结果显示,2016年分离的TZHY22引起的肺损伤最严重且其排毒能力最强、排毒持续时间长。病毒复制能力结果显示,2013年分离的TM24复制能力最强,能在多个脏器中(心、肝、脾、肺、肾、脑)高效复制。然而,2014年分离的JX148虽然复制能力和排毒能力都很弱,但其引起的细胞因子免疫应答最强烈,并对宿主脏器造成了一定的病理损伤。以上结果表明,不同年代的病毒在排毒、复制及致病力等方面各不相同,其强弱并没有随着年代的推移呈现规律性变化。研究为H7N9亚型禽流感病毒的致病机理研究和疫苗评价奠定了一定的基础。

感染性指标对人感染H7N9禽流感的诊疗价值研究

目的探讨甲型流感(甲流)病毒抗原、白细胞总数(WBC)、中性粒细胞(Neu)、淋巴细胞(Lym)、嗜酸性粒细胞(Eos)、血小板(PLT)、C反应蛋白(CRP)、降钙素(PCT)等感染性指标的变化及其对H7N9禽流感患者的临床价值,为人感染H7N9禽流感病的诊断、治疗及预后判断提供实验室依据。方法 9例确诊为H7N9禽流感患者作为H7N9组,382例已排除H7N9禽流感但甲流抗原检测阳性患者作为普通流感组,400例健康体检人员作为正常对照组,并根据患者康复情况再将H7N9组分为轻症组(5例,均为儿童)和重症组(4例)。比较各组感染性指标的变化。结果与正常对照组比较,H7N9组和普通流感组的甲流病毒抗原阳性率(77.8%、100.0%)和CRP均升高,Lym、Eos、PLT计数均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。与普通流感组比较,H7N9组CRP升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与轻症组比较,重症组WBC、Lym、Eos和PLT计数明显下降,CRP明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论甲流病毒抗原、WBC、Lym、Eos、PLT、CRP水平对H7N9禽流感患者临床诊断具有一定的参考意义,对H7N9禽流感患者的诊断和区分轻、重症及预后判断有一定的提示作用。

H7N9禽流感病毒对人类致病的分子基础分析

【目的】了解H7N9禽流感病毒对人类致病的分子特征,为更好地预防与治疗H7N9人禽流感提供科学依据。【方法】从GISAID数据库中下载中国2013年分离的所有H7N9禽流感病毒株的基因及蛋白序列,并从NCBI数据库中下载其他相关的流感病毒序列,运用生物信息学软件分析H7N9禽流感病毒基因的系统进化特征、受体结合位点、宿主特异位点、飞沫传播关键氨基酸位点、致病及毒力相关位点、耐药性位点及潜在糖基化位点等的变异情况。【结果】2013年中国流行的H7N9禽流感病毒为四源重组病毒,所有基因片段均来源于禽类,不含任何人流感病毒基因;病毒HA的受体结合位点发生了2个关键氨基酸的变异(G186V和Q226L);在与飞沫传播有关的关键氨基酸位点中,个别氨基酸已发生了变异(T160A、Q226L);该病毒具有8个毒力增强位点;所有分离株的M2均发生了S31N变异;分离株A/Shanghai/1/2013的NA的耐药位点发生了R294K变异;所有毒株的潜在糖基化位点均相对保守。【结论】H7N9禽流感病毒为四源重组的新型禽流感病毒。该病毒具有与人呼吸道上皮细胞SAa-2,6 Gal受体结合的分子基础,但目前尚未获得经飞沫传播的充分条件,人传人的可能性不大。该病毒具有低致病性禽流感病毒的分子特征,表明对禽类致病性不强,但其对人类呈高致病性,这可能与其毒力位点的特征有关。所有分离毒株均发生了对离子通道抑制剂金刚烷胺类药物的耐药性突变,个别毒株已发生了对神经氨酸酶抑制剂奥司他韦(达菲)的耐药性突变。

H5N1高致病性禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及免疫原性

用昆虫杆状病毒表达系统表达了高致病性禽流感H5N1 HA蛋白,经SDS-PAGE和Western blot检测,HA蛋白表达分子量约为70 ku;将HA蛋白制成油乳液,免疫BALB/c小鼠,免疫3次后,收集血清,以血凝抑制试验(HI)和血清IgG抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)评估体液免疫,酶联免疫斑点试验(ELISPOT)评估细胞免疫。试验结果表明:重组HA蛋白组和全病毒灭活疫苗组免疫小鼠后,血清中和抗体效价及ELISA IgG效价均显著高于PBS组,重组HA蛋白组和全病毒灭活疫苗组之间差异不显著。ELISPOT试验数据显示,重组HA蛋白组和全病毒灭活疫苗组小鼠脾单个核细胞分泌IFN-γ和IL-4细胞数量显著高于PBS组,而重组HA蛋白组和全病毒灭活疫苗组之间差异不显著。用昆虫杆状病毒表达系统表达H5N1 HA蛋白制成油乳液能诱导体液免疫和细胞免疫,能为预防高致病性禽流感H5N1候选疫苗的筛选提供依据。

人感染甲型H7N9禽流感疫情及动物源性疾病的防控措施分析

本文从病原学特征、流行情况、临床表现等方面论述了人感染甲型H7N9禽流感疫情的基本情况,并以禽流感的防控措施为例探讨了动物源性疾病防控工作的要点。