siRNA分析nm23-H1基因与人慢性髓性白血病的关系

设计并筛选靶向nm23-H1基因的siRNAs序列,探讨nm23-H1基因与人慢性髓性白血病之间的关系。依据siRNA设计原则,设计3条siRNA序列。将不同靶点的siRNA用lipofectamine2000转染人慢性髓性白血病细胞株K562。转染后24h RTPCR检测nm23-H1mRNA水平变化;转染后48h免疫细胞化学法检测nm23-H1蛋白表达。MTT法检测转染后24h、48h和72h有效siRNA对K562细胞生长的影响。3条siRNA中,siNM526能有效地抑制K562细胞nm23-H1基因表达,转染siNM526的K56细胞生长受到抑制。说明下调nm23-H1基因的表达有抑制K562细胞增殖的作用,即降低了K562细胞的恶性程度。nm23-H基因有可能成为白血病治疗潜在的分子靶点。

X连锁凋亡抑制蛋白在人慢性髓性白血病细胞K562对于伊马替尼耐药中的作用

目的研究X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在K562细胞对于伊马替尼耐药中的作用机制。方法采用首剂大剂量冲击和逐步增加剂量相结合的方法构建伊马替尼耐药的人髓性白血病耐药细胞K562/IMA。Western-Blot和RT-qPCR法检测耐药株中XIAP的表达水平。小干扰RNA沉默耐药株中XIAP的表达,将细胞分为对照组、siRNA-NC组以及siRNA-XIAP组。XIAP真核表达质粒转染普通K562细胞,构建XIAP过表达的K562细胞株,将细胞株分为对照组、空质粒组和实验组。CCK-8法检测各组细胞对于伊马替尼的敏感性,并计算半数抑制浓度IC50。流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。Western-Blot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达水平,TUNEL染色观察细胞的凋亡水平。结果构建的耐药株对10μmol·L^-1的伊马替尼耐药,在K562/IMA细胞株中XIAP表达水平显著增高。而XIAP沉默后,相比对照组,siRNA-XIAP组中细胞活力显著下调,凋亡率增高,IC50值下调,且凋亡蛋白Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达上调,Bcl-2的表达下调。K562过表达XIAP后,IC50值增高,凋亡率下调,与对照组比较,实验组中凋亡蛋白Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达下调,Bcl-2的表达上调。结论 XIAP在慢性髓性白血病对伊马替尼耐药中有着重要的作用,其表达水平增高可以降低细胞对于药物的敏感性,起到抗凋亡作用。