人成牙本质细胞L型钙离子通道α_1亚基D亚型特异性基因的克隆

目的:克隆人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因。方法:采用RT-PCR方法,从人成牙本质样细胞系中克隆人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基的特异性基因片段,将其亚克隆入pUC18载体进行序列测定。结果:从人成牙本质样细胞系中获得900bp的特异性片段。序列分析表明,与Gen-Bank登陆的人L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因序列完全一致。结论:成功地从人成牙本质样细胞系中克隆到人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因序列。

TNF-α调控HODs样细胞瞬时感受器电位TRVP2通道蛋白表达的初步研究

目的分析肿瘤坏死因子α(TNF-α)调控人成牙本质细胞(HODs)样细胞中瞬时感受器电位香草酸受体2(TRPV2)离子通道的表达特征和相关受体,进一步丰富对人牙髓TRPV2离子通道生理功能研究的认识。方法收集2016年9月—2017年1月在天津医科大学口腔医院口腔颌面外科门诊因正畸拔除的健康完整第三磨牙20颗,患者年龄18~25岁。获取牙髓组织,在含10%胎牛血清的培养基中孵育、诱导和传代,选取第4~6代细胞进行后续实验。免疫荧光染色检测诱导HODs样细胞标志性蛋白特异性抗体牙本质涎磷蛋白(DSPP)和nestin表达特征,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(WB)和流式细胞术(FCM)等方法分别检测0、1、10μg/L TNF-α对TRPV2离子通道表达水平的影响。使用肿瘤坏死因子受体(TNFR)1拮抗剂R-7050处理细胞,分析TNFR1在TNF-α调控TRPV2离子通道表达中的作用。结果免疫荧光染色鉴定HODs样细胞DSPP和nestin表达阳性,RT-qPCR和WB证实,与无TNF-α处理的对照组相比,10μg/L TNF-α能够明显上调TRPV2离子通道mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),FCM也发现TNF-α能够提高TRPV2蛋白表达水平。研究进一步证实,与未用R-7050处理的阴性对照组相比,使用R-7050后TNF-α诱导的HODs样细胞TRPV2离子通道表达水平明显下调(P<0.05)。结论TNF-α主要通过TNFR1调控HODs样细胞TRPV2离子通道表达水平上升。