阿仑膦酸钠对人成骨细胞株MG63活性功能的影响

本文研究了阿仑膦酸钠(Alen)对成骨细胞活性功能的影响,为其临床应用提供细胞学实验支持。采用体外细胞培养的方法观察不同浓度Alen对人成骨细胞株MG63细胞增殖、细胞形态、碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原以及钙沉积效应的影响。结果表明:较低浓度(1×10-9 mol/L和1×10-7 mol/L)时,Alen对MG63细胞增殖、细胞形态、ALP表达和Ⅰ型胶原合成无明显影响;在高浓度(1×10-5 mol/L)时,MG63细胞的增殖活性受到抑制,电镜观察可见细胞凋亡;浓度为1×10-9 mol/L时,Alen能促进MG63细胞的钙沉积,而浓度为10-5 mol/L时可抑制MG63细胞的钙沉积。本研究提示低浓度Alen能在一定程度上促进人成骨细胞的矿化能力,有利于骨形成。

转化生长因子β1对多孔钽/MG63成骨样细胞复合物细胞增殖及分泌功能的影响

背景:前期研究已得出国产多孔钽无毒性,具有良好的生物相容性,具有促成骨作用。目的:观察转化生长因子β1对国产多孔钽/MG63成骨样细胞复合物中成骨细胞生长增殖、细胞周期及分泌功能的影响,方法:取生长状态良好的第3代MG63成骨样细胞悬液,按1×10~9L^(-1)的细胞浓度接种于多孔钽材料上,分别以含0,0.5,5,10μg/L转化生长因子β1的培养基培养。CCK-8法检测培养1-13 d成骨细胞增殖水平;培养5,9 d,扫描电镜及透射电镜观察培养细胞形态及超微结构,检测细胞分泌Ⅰ型胶原水平。结果与结论:(1)0.5,5,10μg/L转化生长因子β1均可促进多孔钽上成骨细胞的增殖,其中以5μg/L转化生长因子β1的促增殖作用最明显;(2)在5μg/L转化生长因子β1作用下,成骨细胞在多孔钽支架表面及微孔内形成叠层黏附生长,向材料表面伸出较多的伪足,细胞分泌的基质基本覆盖多孔钽表面,胞浆内可见大量粗面内质网、游离核糖体及致密分布的线粒体,高尔基复合体较发达,并且胞质内出现较多基质小泡;(3)5μg/L转化生长因子β1组培养5,9 d的Ⅰ型胶原水平高于0.5及10μg/L转化生长因子β1组(P<0.05);(4)结果表明:转化生长因子β1可促进国产多孔钽表面MG63成骨样细胞的增殖,其中以5μg/L转化生长因子β1对成骨细胞的促增殖及Ⅰ型胶原分泌作用最明显。

体外冲击波对MG63细胞中碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

体外冲击波（ESW）是近年来用于治疗骨折不愈合的一种新的保守治疗方法，凶其费用低、痛苦小且有效而受到关注。但ESW治疗骨折不愈合的生物学机制还不清楚。有研究显示，ESW对成骨细胞的生物学活性、分化及各种细胞因子的表达有影响，但对碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）表达的影响报道较少。

用荧光强度反映Cbfa1活性成骨细胞模型的构建

目的构建稳定表达由6OSE2启动子驱动的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的MG63细胞株,并筛选出能反映Cbfa1活性的细胞株。方法合成6OSE2启动子的序列,并将其构建到T载体中;然后通过双酶切得到启动子片段;与去除CMV启动子的报告基因载体pEGFP-N1的酶切片段连接,构建真核表达载体;并转染到MG63细胞系,经G418筛选得到了稳定转染6OSE2-EGFP基因的MG63细胞株。用不同浓度的IGF-I和VD3处理,通过EGFP荧光强度分析,ALP活性测定,筛选出能够响应IGF-I和VD3的细胞株。结果构建了pUC-6OSE2扩增载体和p6OSE2-EGFP真核表达载体,通过稳定转染以及IGF-I、VD3筛选获得一株荧光强度随IGF-I和VD3处理而增强的细胞株-OSE-MG63。结论构建了能反应Cbfa1活性的成骨细胞模型,为进一步研究微重力对Cbfa1的转录活性及信号传导途径的影响奠定了基础。

中药桂皮醛对成骨细胞增殖及成骨功能的影响

牙周炎和种植体周围炎是牙菌斑引起的发生在牙周支持组织上的慢性感染性炎症,通常可导致牙周组织结构破坏,引起牙和种植体松动脱落。课题组前期研究发现中药桂皮醛能杀灭牙周可疑致病菌并具有良好的抗炎作用。目的:研究桂皮醛对成骨细胞增殖及成骨功能的影响。方法:以小鼠成骨细胞MG63细胞株为研究对象,通过MTT法检测128,64,32,16,8ugml-1五种浓度的桂皮醛对成骨细胞增殖的影响;通过碱性磷酸酶活性、钙含量的测定及矿化结节的观察等检测五种浓度的桂皮醛对成骨细胞成骨功能的影响。利用SPSS13.0软件对数据进行方差分析和t检验。结果:与空白对照组相比,16,8ugml-1组成骨细胞的增殖无明显抑制,碱性磷酸酶活性、钙含量及矿化结节数有升高(P<0.05);128,64,32ugml-1组成骨细胞增殖及成骨功能均有一定抑制,且抑制作用随着浓度升高而加强。结论:桂皮醛对成骨细胞增殖及成骨功能的影响与浓度有关,体现出效应剂量依赖性。较低浓度的桂皮醛(16,8ugml-1)对成骨细胞的成骨功能有促进作用。

国产多孔钽对MG63细胞中Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2和钙结合蛋白A4表达的影响

背景:目前有证据已证实国产多孔钽具有良好的生物相容性及促成骨性能,但具体的成骨机制及对成骨因子的影响尚不明确。目的:观察国产多孔钽材料对MG63细胞Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2及钙结合蛋白A4表达的影响。方法:将对数生长期的MG63细胞接种于24孔板,分3组培养:空白组加入常规培养基,钽浸提液组加入多孔钽材料浸提液,钽支架组加入多孔钽材料与常规培养基。培养第1,3,5,7,9天,CCK-8法检测各组细胞增殖;培养第5天,采用ELISA酶联免疫吸附法检测各组细胞分泌Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2和钙结合蛋白A4的水平,Western-blot法检测各组细胞中钙结合蛋白A4、Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2蛋白的表达。结果与结论:(1)随着培养时间的延长,各组细胞数量呈逐渐增加趋势,3组不同时间点的细胞增殖比较无差异(P> 0.05);(2)钽支架组Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2分泌高于空白组、钽浸提液组(P <0.05),钽浸提液组Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2分泌高于空白组(P <0.05);钽支架组钙结合蛋白A4分泌低于其他两组(P <0.05);(3)钽支架组中Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2蛋白表达均高于空白组、钽浸提液组(P <0.05),钽浸提液组中Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2蛋白表达高于空白组(P <0.05);钽支架组钙结合蛋白A4蛋白表达均低于空白组、钽浸提液组(P <0.05);(4)结果表明,国产多孔钽材料可促进MG63细胞分泌Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2,抑制其分泌钙结合蛋白A4。

17β-雌二醇对MG63细胞和正常人成骨细胞雌激素受体β表达的上调作用

观察不同浓度17β-雌二醇(17β-E_2)对培养MG63细胞和人成骨样细胞(HOB)雌激素受体β(ERβ)表达的影响,结果显示在MG63细胞ERβ的表达上调与17β-E_2(0～1×10^(-6)mol/L)呈剂量依赖性关系,而在HOB细胞ERβ最大表达的17β-E_2的最适浓度为1×10^(-8)mol/L。

10%纳米羟基磷灰石聚醚醚酮浸提液培养成骨细胞(MG63)Wnt3a/β-catenin信号通路的表达

目的:研究10%纳米羟基磷灰石聚醚醚酮(10%HA/SPEEK/PEEK)复合材料浸提液培养MG63细胞后Wnt3a/β-catenin信号通路中特征性蛋白的变化,评价复合材料的生物相容性。方法:Wnt3a持续作用于10%HA/SPEEK/PEEK浸提液培养的MG63细胞。应用免疫荧光染色技术,定性检测Wnt信号通路中β-catenin蛋白的存在。应用Western-Blotting技术相对定量检测β-catenin蛋白的多少。应用实时定量PCR技术相对定量检测信号通路下游基因c-myc、cyclin D1的表达情况。结果:免疫荧光染色和Western-Blotting实验结果显示,Wnt3a作用于10%HA/SPEEK/PEEK浸提液中培养的MG63细胞,β-catenin蛋白绿色深染,位于细胞核中,表达量显著增加。实时定量RTPCR实验结果显示Wnt3a作用于10%HA/SPEEK/PEEK浸提液中培养的MG63细胞,信号通路的下游靶向基因cmyc、cyclin D1表达显著增加,Wnt通路开放。结论:10%HA/SPEEK/PEEK对MG63细胞有良好的成骨作用,可以指导临床实验研究。

PEEK/HA对成骨细胞(MG63)增殖分化的影响

目的研究纳米PEEK/HA复合材料对MG63细胞相容性的影响。方法应用流式细胞仪技术研究不同组分的复合材料浸提液中MG63细胞增殖的情况;应用实时定量RT-PCR技术检测复合材料浸提液中MG63细胞特征性蛋白碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原的表达情况。结果流式细胞仪实验结果显示,4种浸提液中培养的MG63细胞,48 h后,均有稳定的增殖。10%HA/SPEEK/PEEK组增殖指数为59.3%,高于其他4组,差异有统计学意义。实时定量RT-PCR实验结果显示,4种材料的浸提液培养MG63细胞于14、21、28 d时成骨细胞特征性的蛋白ALP、COLI的DNA的量表达明显。10%nHA/SPEEK/PEEK组表达高于其他4组,差异有统计学意义。随着时间的延长,各组的表达均有所下降。结论纳米PEEK/HA复合材料对MG63细胞有良好的生物相容性。

磷酸锌矿化胶原膜对MG63细胞生物学行为的影响

目的:研究磷酸锌矿化胶原膜对人成骨样细胞MG63增殖及分化的影响。方法:制备磷酸锌矿化胶原膜并在其上接种MG63成骨细胞株,扫描电镜观察MG63细胞在胶原膜表面的生长情况,采用CCK-8及碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测MG63细胞的增殖及分化能力。结果:扫描电镜下可见胶原膜表面有大量晶体样沉积物,在其上培养1 d后MG63细胞粘附于胶原膜表面,开始向各方向伸出伪足,与胶原膜相互交联。与阴性对照组相比,磷酸锌矿化胶原膜于第3天明显促进MG63细胞增殖,于第1、5、7 d无显著影响;于第1 d可提高碱性磷酸酶活性,促进MG63细胞分化,于第7、14 d无显著影响。结论:磷酸锌矿化胶原膜具有良好的生物相容性,可促进MG63成骨细胞的早期增殖及分化。