高良姜素通过激活cGAS/STING信号通路抑制骨肉瘤MG63细胞的恶性生物学行为

目的:探讨高良姜素(Gal)是否通过调节cGAS/STING信号通路影响骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡。方法:体外培养人骨肉瘤MG63细胞,分别使用0、5、15、25、50、100、200μmol/L的Gal培养48 h后,CCK-8法检测Gal对细胞活力的影响。将MG63细胞分为对照组(未处理细胞)、Gal低浓度组(Gal-L组,50μmol/L Gal处理)、Gal高浓度组(Gal-H组,100μmol/L Gal处理)和Gal-H+STING抑制剂组(Gal-H+H-151组,100μmol/L Gal+8μmol/L H-151处理)。采用EdU染色法、划痕愈合实验、Transwell小室法、流式细胞术检测各组细胞增殖活力、迁移、侵袭和凋亡能力,WB法检测各组细胞中cGAS、STING蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,Gal-L组、Gal-H组细胞增殖活力、迁移、侵袭能力均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率和cGAS、STING蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05);与Gal-H组比较,Gal-H+H-151组细胞增殖活力、迁移和侵袭能力均显著升高(均P<0.05),细胞凋亡率和cGAS、STING蛋白表达水平均显著降低(均P<0.05)。结论:Gal可能通过激活cGAS/STING信号通路抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。

骨碎补UPLC指纹图谱与人骨肉瘤细胞MG63中碱性磷酸酶活性的谱效关系研究

建立骨碎补生品和砂烫品提取物的UPLC指纹图谱,并研究骨碎补提取物与人骨肉瘤细胞MG63中碱性磷酸酶(ALP)活性之间的谱效关系。采用UPLC法建立骨碎补生品和烫品的指纹图谱并通过UPLC-Q-TOF MS法对其化学成分进行鉴别;通过测定MG63细胞中ALP活性检测骨碎补提取物对MG63细胞成骨分化的影响;采用灰色关联度分析、双变量相关性分析以及偏最小二乘回归分析法分析骨碎补生品和烫品的UPLC特征指纹峰与其促ALP活性之间的谱效关系。在标定的12个共有峰中,确定了4、5、12号峰与ALP活性呈正相关,其对应的物质依次是咖啡酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、儿茶素7-葡糖苷、柚皮苷,为深入研究骨碎补的促成骨分化活性物质基础提供依据。

亲环素D介导的线粒体通透性转换孔开放对骨肉瘤MG63细胞生物学行为的影响

目的:探讨干扰线粒体关键蛋白亲环素D(CypD)对骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移、凋亡等生物学行为的影响。方法:构建3种转染不同siRNA的MG63细胞系,分别为CypD-siRNA1、CypD-siRNA2和CypD-siRNA3组,采用qRT-PCR和Western blot检测3组细胞中CypD的表达水平,筛选用于后续实验的CypD-siRNA。将MG63细胞分为阴性对照组(转染siRNA-NC)和敲减组(转染CypD-siRNA2)。采用CCK-8法和平板克隆实验检测细胞的增殖能力,Transwell小室实验检测细胞的迁移能力;采用MitoSOX Red检测线粒体活性氧(mROS)水平,钙黄绿素-钴评价线粒体通透性转换孔的开放状态;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞迁移和凋亡相关蛋白的表达。结果:与CypD-siRNA1组和CypD-siRNA3组相比,CypD-siRNA2组中CypD mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05)。与阴性对照组相比,敲减组细胞克隆形成数和迁移数减少,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率升高,N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平降低(P<0.05),Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase 3/Caspase 3以及E-cadherin和细胞色素C蛋白表达水平升高(P<0.05)。敲减组细胞mROS水平高于阴性对照组,而线粒体通透性转换孔开放程度低于阴性对照组(P<0.05)。结论:敲减CypD表达可上调MG63细胞氧化应激水平,抑制其增殖、迁移能力,并通过线粒体途径诱导其凋亡。

雌二醇对人成骨肉瘤MG63细胞株护骨素、护骨素配体及其相关因子的调节

目的 观察 17β 雌二醇 (17β E2 )和ICI 182 780对人成骨肉瘤MG6 3细胞株表达护骨素(OPG)、OPG配体 (OPGL)及其相关因子 [TRAIL、巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF)、转化生长因子 β(TGFβ) ]的影响。方法 用逆转录PCR(RT PCR)法检测基因表达情况 ,用Westernblot分析法检测蛋白表达情况。结果 (1) 17β E2 能上调MG6 3细胞中OPG及TGFβ的表达 ,下调OPGL、M CSF及TRAIL的表达。 (2 )ICI 182 780对被检测基因有不同的调节活性。结论 雌激素缺乏可能导致成骨细胞中OPG、TGFβ的表达减少 ,而解除了对OPGL、M CSF和TRAIL等细胞因子的抑制作用 ,使破骨细胞的数量和活性增加 ,骨吸收增强和骨量丢失 ,这可能是绝经后骨质疏松症的一个重要的发病机制 ;ICI 182 780并非纯雌激素受体拮抗剂 ,而属于选择性雌激素受体调节剂。

人参皂苷Rg1组合诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中Prohibitin的表达与定位变化

选择性抽提经人参皂苷Rg1组合(RCT)诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞核基质,对prohibitin在核基质中的存在、分布及其与相关基因产物在RCT处理前后MG-63细胞中的共定位关系进行观察研究.蛋白质组学分析结果显示,prohibitin存在于人成骨肉瘤MG-63细胞核基质蛋白组分中,并在RCT处理后细胞核基质中表达下调;蛋白质印迹杂交确证了prohibitin在MG-63细胞核基质中的存在及其在RCT处理后下调变化;免疫荧光显微镜观察进一步证实prohibitin定位在核基质上,经RCT处理后出现分布位置与表达水平变化;激光共聚焦显微镜观察可见prohibitin与c-Fos、c-Myc、p53和Rb基因产物均存在共定位关系,并在RCT处理后共定位分布区域出现变化.本研究证实了prohibitin是一种新发现的核基质蛋白,其在核基质上的定位与表达在RCT诱导分化前后发生显著变化,并与相关癌基因、抑癌基因产物存在共定位关系.实验表明RCT处理引起的prohibitin的变化与人成骨肉瘤MG-63细胞的诱导分化与调控具有密切关系,为深入揭示RCT等中药有效成分诱导肿瘤细胞分化的机理提供了重要科学依据和深入探索的新方向.

HMBA诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中hnRNP A2/B1的表达与定位

背景与目的:核基质蛋白的差异表达与细胞癌变和增殖分化调控关系密切。本研究观察了hnRNP A2/B1在诱导分化处理前后人成骨肉瘤MG-63细胞核基质中的存在和分布,及其与Actin、Prohibitin的共定位关系。方法:选择性抽提经环六亚甲基双乙酰胺(hexamethylene bisacetamide,HMBA)诱导处理前后的MG-63细胞核基质,并运用双向电泳、质谱分析、蛋白质印记杂交、免疫荧光、激光共聚焦等技术检测hnRNP A2/B1在核基质中的表达与定位变化,及其与相关蛋白的共定位关系。结果:双向电泳及蛋白质印迹杂交结果证实了hnRNP A2/B1存在于MG-63细胞核基质蛋白组分中,并在HMBA处理后细胞核基质中表达下调;免疫荧光显微镜观察显示hnRNP A2/B1定位在核基质上,经HMBA处理后hnRNP A2/B1表达减弱。激光共聚焦显微镜观察结果显示,hnRNP A2/B1与细胞核基质蛋白组分Actin、细胞增殖相关调控因子Prohibitin具有共定位关系,但在诱导处理后细胞内的共定位关系减弱。结论:hnRNP A2/B1在MG-63细胞诱导分化过程中的表达分布,及其与Actin、Prohibitin的共定位关系的改变对MG-63细胞分化具有重要影响,值得进一步探索和研究。

丹参酮IIA对人成骨肉瘤MG-63细胞形态结构和终末分化指标的影响

目的:观察中药有效成分丹参酮IIA(Tan IIA)对人成骨肉瘤MG-63细胞形态与超微结构和相关终末分化指标的影响,以鉴定其对肿瘤细胞终末分化的诱导作用。方法:0.5μg/mL丹参酮IIA处理MG-63细胞,光镜、电镜观察和免疫细胞化学检测系统研究MG-63细胞处理前后细胞形态、超微结构变化和成骨细胞相关终末分化蛋白的表达变化。结果:光镜与电镜观察结果显示经Tan IIA处理细胞产生了核质比例减小、异染色质减少、常染色质增多、细胞器丰富发达、细胞表面微绒毛减少等显著变化;免疫细胞化学检测显示处理后MG-63细胞Ⅰ型胶原蛋白、骨粘素和骨钙蛋白的表达呈阳性,并观察到钙化糖原颗粒增多和典型骨结节的形成。结论:丹参酮IIA能显著改变MG-63细胞形态与超微结构恶性特征,并促进与成骨细胞相关的终末分化指标的表达变化,从而对人成骨肉瘤细胞的终末分化具有明显的诱导作用。

人成骨肉瘤MG-63细胞分化特性及分化过程中的基因表达

观察人成骨肉瘤MG 6 3细胞分化特性及分化过程中的基因表达。在细胞培养的不同时间 ,用α 磷酸奈酚法测定碱性磷酸酶 (ALP)活性 ;放射免疫法测定骨钙素 (BGP)含量 ;半定量逆转录聚合酶链反应测I型胶原、基质金属蛋白酶 (MMP) 1和基质金属蛋白酶抑制因子 (TIMP) 1基因mRNA表达 ;VanGieSon氏苦味酸酸性复红染色法染色细胞I型胶原。结果表明MG 6 3细胞接种培养第 7d后I型胶原基因表达较高。MMP 1表达量随时间推移逐渐增加 ,至第 2 4d达到高峰。第 1～ 9dTIMP 1表达量逐渐增加 ,其后基本恒定。ALP活性第 0～ 12d逐渐增高 ,至第 12d达最高 ,其后逐渐下降。第 18d后 ,细胞有许多大小不等的结节形成 ,I型胶原结节染色较无结节处深。MG 6 3细胞具有成骨细胞表型特征。MG 6 3细胞生长分为细胞增殖、骨基质成熟、骨基质矿化阶段 ,且I型胶原 ,MMP 1,TIMP 1基因表达及ALP活性呈时间特异性。

人参皂甙Rg1对人成骨肉瘤MG-63细胞形态结构和终末分化指标的影响

为了研究人参皂甙Rg1对人成骨肉瘤MG-63细胞(以下简称"MG-63细胞")形态与超微结构及终末分化指标的影响,鉴定其对MG-63细胞的诱导分化作用,以50μg/mL人参皂甙Rg1处理MG-63细胞,光学显微镜与电子显微镜观察MG-63细胞形态、超微结构变化,免疫细胞化学方法检测成骨细胞相关终末分化蛋白的表达变化,并同步以HMBA处理MG-63细胞作为阳性对照.光学显微镜与电子显微镜观察结果显示细胞形态与超微结构产生了细胞形态规则、大小一致、细胞铺展体积增大,核质比例减小、核内核仁数目减少、细胞器丰富发达等与正常细胞相似的恢复性变化.观察到MG-63细胞终末分化指标I型胶原、骨粘素、骨钙蛋白的阳性表达及钙化糖原颗粒的增多与典型骨节结的形成,其变化结果与HMBA处理细胞类似.本研究证实人参皂甙Rg1能显著改变MG-63细胞形态与超微结构恶性特征,并增强成骨细胞相关的终末分化指标的表达,从而对MG-63细胞的终末分化具有一定的诱导作用.

人参皂甙Rg1组合对人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中核基质构型与蛋白质组成的影响

目的研究中药有效成分人参皂甙Rg1、肉桂酸CINN及丹参酮TanⅡA的组合(简称RCT),诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中,细胞核基质构型与蛋白质组成的变化。方法应用流式细胞仪检测细胞周期变化,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,以选择性抽提整装光镜与电镜技术及蛋白质组学技术分析观察处理前后MG-63细胞核基质构型与蛋白质组成的变化。结果生长曲线显示,RCT处理后MG-63细胞的增殖受到明显抑制,增殖抑制率在第7天达到72.37%,细胞周期出现明显的G0/G1期阻滞。MG-63细胞核基质为典型的肿瘤细胞恶性表型,在RCT处理后发生了向正常细胞转变的恢复性变化。RCT处理后的细胞中多种核基质功能蛋白的表达发生了变化。结论RCT能显著抑制体外培养MG-63细胞的增殖活动,将细胞周期阻滞于G0/G1期,诱导核基质构型发生了显著的恢复性变化,并改变核基质蛋白的组成,对MG-63细胞具有显著的分化诱导作用。

沉默Bcl2、Bak1基因表达对成骨肉瘤MG-63细胞增殖及成骨能力的影响

目的探讨沉默Bcl2、Bak1基因表达对成骨肉瘤MG-63细胞增殖及成骨能力的影响。方法收集对数生长期MG-63细胞,随机分为sh Bcl2组、sh Bak1组、共转染组和空白对照组。sh Bcl2组、sh Bak1组、空白对照组分别单独转染sh Bcl2、sh Bak1重组腺病毒和空载腺病毒,共转染组同时转染sh Bcl2及sh Bak1重组腺病毒。转染48 h,采用MTT法检测细胞增殖率,对硝基苯磷酸盐法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,Western blotting法检测成骨相关蛋白骨形态发生蛋白4(BMP4)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)、TNF-α表达。结果 sh Bcl2组细胞增殖率、ALP活性及BMP4、OPN、Runx2相对表达量均低于空白对照组,TNF-α相对表达量高于空白对照组(P均<0.01)。sh Bak1组细胞增殖率、ALP活性及BMP4、OPN、Runx2相对表达量均高于空白对照组,TNF-α相对表达量低于空白对照组(P均<0.01)。空白对照组与共转染组细胞增殖率、ALP活性、BMP4、OPN、Runx2、TNF-α相对表达量比较均无统计学差异(P均>0.05)。结论沉默Bcl2基因表达可抑制MG-63细胞增殖及成骨能力,沉默Bak1基因则具有相反的作用;Bcl2与Bak1共同参与MG-63细胞的凋亡及成骨过程。

人参皂甙Rg1组合诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中Nucleophosmin的表达与定位变化

选择性抽提经中药有效成分人参皂甙Rg1组合(简称RCT)诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞核基质,对nucleophosmin(NPM)在核基质中的存在、分布及其与相关基因产物在MG-63细胞中的共定位关系进行了观察研究。双向凝胶电泳和质谱鉴定结果显示NPM存在于MG-63细胞核基质蛋白组分中,在RCT处理后细胞核基质蛋白中表达下调。蛋白质印迹杂交结果证实了NPM在RCT处理前后的MG-63细胞核基质蛋白中的存在及其表达下调变化。免疫荧光显微镜观察显示NPM定位于MG-63细胞核基质上,经RCT处理后出现分布位置与表达水平的变化。免疫荧光-激光扫描共聚焦显微镜的观察结果显示NPM在MG-63细胞中与c-fos、c-myc、RB、p53等基因产物具有共定位关系,并在RCT处理后细胞核内其共定位区域发生了变化。研究结果证实了NPM存在于核基质上,是一种核基质蛋白,其在RCT诱导人成骨肉瘤MG-63分化过程中的表达与分布变化及其与相关癌基因、抑癌基因的关系显然对MG-63细胞分化具有重要影响,这为深入揭示中药有效成分诱导肿瘤细胞分化的机制提供了重要科学依据和深入探索的新方向。

成骨诱导因子缓释系统修饰国产多孔钽对MG63细胞功能的影响

背景:课题组前期研究发现,国产多孔钽有利于MG63细胞的早期黏附、增殖,可用作骨组织工程支架材料。目的:进一步探讨成骨诱导因子缓释系统修饰的国产多孔钽对MG63细胞黏附增殖及分化能力的影响。方法:在聚乳酸-羟基乙酸共聚化合物凝胶中加入体积分数为15%的成骨诱导因子溶液,构成成骨诱导因子缓释系统。取第3代MG63细胞,分别接种于单纯多孔钽表面(对照组)、聚乳酸-羟基乙酸共聚化合物凝胶涂覆的多孔钽表面(凝胶涂覆组)、成骨诱导因子缓释系统涂覆的多孔钽表面(缓释系统涂覆组),共培养5 d后,利用鬼笔环肽染色观察材料表面细胞骨架,流式细胞仪检测细胞增殖,Western blot、RT-qPCR检测材料表面细胞Ⅰ型胶原、骨桥蛋白、RUNX-2的蛋白和mRNA表达。结果与结论:①鬼笔环肽染色显示,MG63细胞在3组多孔钽表面及内部黏附生长,细胞分泌的基质覆盖在材料表面;②流式细胞仪检测显示,缓释系统涂覆组细胞增殖快于对照组、凝胶涂覆组(P<0.05);③Western blot、RT-qPCR检测显示,缓释系统涂覆组Ⅰ型胶原、骨桥蛋白、RUNX-2的蛋白和mRNA表达均高于对照组、凝胶涂覆组(P<0.05);④结果表明,经成骨诱导因子缓释系统修饰的国产多孔钽有利于MG63成骨细胞的黏附、增殖及分化。

人参皂甙Rg1、肉桂酸与丹参酮ⅡA组合对体外人成骨肉瘤MG-63细胞形态结构和终末分化指标的影响

目的研究中药有效成分人参皂甙Rg1、肉桂酸和丹参酮ⅡA组合（RCT）对人成骨肉瘤MG-63细胞的形态与超微结构改变和终末分化的影响，鉴定其对人成骨肉瘤细胞终末分化的诱导作用。方法以中药有效成分组合（33mg／L人参皂甙Rg1＋2mmol／L肉桂酸＋0．3mg／L丹参酮ⅡA）处理MG-63细胞7d，对照组与处理组样本各3次重复，免疫细胞化学检测及光镜与电镜观察系统研究RCT组合对MG-63细胞的细胞生物学效应。环六亚甲基双乙酰胺（HMBA）处理MG-63细胞作为分化诱导效果的阳性对照。结果免疫细胞化学检测显示，成骨肉瘤细胞终末分化指标I型胶原、骨黏素、骨钙蛋白的表达呈强阳性，并观察到钙化糖原颗粒增多与典型骨结节的形成；光镜与电镜观察结果显示，处理后的MG-63细胞产生了细胞形态规则，大小-致，细胞铺展体积增大，核质比例减小，核内核仁数目减少，细胞器丰富发达等趋向正常细胞特征的显著改变。结论RCT组合能显著改变MG．63细胞形态与超微结构恶性特征，并促进终末分化标志物的表达，从而对人成骨肉瘤MG-63细胞的终末分化具有显著诱导作用。

Prohibitin在姜黄素诱导人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡过程中的调控机制

目的探讨姜黄素(curcumin)诱导成骨肉瘤细胞凋亡前后,Prohibitin(PHB)蛋白的定位与表达变化,及PHB与凋亡相关基因产物的共定位关系。方法选择性抽提经姜黄素诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞核基质蛋白,以蛋白质组学、免疫印迹法和激光扫描共焦显微技术对PHB在核基质中存在、分布及其与凋亡相关基因产物在MG-63细胞中的共定位关系进行了研究。结果双向凝胶电泳、质谱鉴定和免疫印迹法结果显示,PHB存在于MG-63细胞核基质蛋白组分中,细胞凋亡后在细胞核基质蛋白中表达下调。免疫荧光显微镜观察显示,PHB定位于MG-63细胞核基质纤维上,经姜黄素处理后出现分布位置与表达水平的变化。激光扫描共焦显微镜观察结果显示,PHB在MG-63细胞凋亡过程中与Bax、Bcl-2、Fas、P53、c-Myc和Rb等基因产物具有共定位关系,且共定位区域发生了变化。结论 PHB是一种核基质结合蛋白;PHB在MG-63细胞凋亡过程中的表达与分布变化,及其与细胞凋亡相关基因的共定位关系,对MG-63细胞凋亡具有重要影响。

不同转移特性人成骨肉瘤MG-63细胞亚系的建立及特征

目的建立高低不同转移特性人成骨肉瘤MG63细胞亚系并研究其生物学特性。方法通过体外克隆技术和体内移植,筛选并建立了6个细胞亚系,测量其细胞电泳率、细胞增殖率,利用琼脂克隆形成实验和裸鼠体内成瘤实验,比较各细胞亚系的转移特性。结果A2、A3、A16亚系的细胞电泳率、细胞增殖率、琼脂克隆形成能力和肺转移灶形成率均明显高于A1、A6、A20亚系。结论通过体外克隆技术和体内移植的方法可建立不同转移特性的MG63细胞亚系,有助于骨肉瘤转移机理的进一步研究。

HMBA诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中prohibitin的表达与定位变化

本文以HMBA诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞为对象,对prohibitin在核基质中存在、分布及其与相关基因产物在HMBA处理前后MG-63细胞中的共定位关系进行观察研究。蛋白印迹杂交结果确证prohibitin存在于人成骨肉瘤MG-63细胞核基质蛋白组分中,并在HMBA处理后细胞核基质中表达下调,免疫荧光显微镜观察显示prohibitin定位在核基质上,经HMBA处理后出现分布位置与表达水平的变化,激光共聚焦显微镜观察可见prohibitin与MG-63细胞中c-fos、c-myc、p53和rb基因产物均存在共定位关系,但在HMBA处理后细胞中其共定位分布区域出现变化。研究结果证实prohibitin是一种核基质蛋白,定位于核基质上,prohibitin在人成骨肉瘤MG-63细胞诱导分化过程中的表达分布及其与相关癌基因、抑癌基因产物的共定位现象值得进一步探索和研究。

人参皂甙Rg1、肉桂酸和丹参酮IIA组合对成骨肉瘤MG-63细胞增殖与相关基因表达的影响

研究中药有效成分人参皂甙Rg1、肉桂酸和丹参酮IIA组合对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制和相关基因表达影响,探索其对肿瘤细胞的生物学效应。以33ìg/ml人参皂甙Rg1、296.32ìg/ml肉桂酸和0.3ìg/ml丹参酮IIA的组合(简称RCT)处理人成骨肉瘤MG-63细胞,以肿瘤细胞分化诱导物HMBA处理MG-63细胞为平行对照,用流式细胞仪、免疫细胞化学检测及光镜观察系统研究RCT组合对MG-63细胞的作用。生长曲线及细胞周期检测显示RCT组合可显著抑制MG-63细胞的增殖,细胞生长抑制率达72.37%,细胞周期阻滞于G0/G1期;免疫细胞化学检测显示RCT组合处理后MG-63细胞的癌基因c-fos、c-myc表达下调,抑癌基因p27、Rb表达上调。RCT组合对MG-63细胞增殖及相关基因表达的影响与分化诱导物六亚甲基双乙酰胺(HMBA)处理组相似。

M007介导的光动力疗法对人成骨肉瘤MG63细胞增殖的影响

目的观察新型光敏剂M007介导的光动力疗法(PDT)对体外培养人成骨肉瘤MG63细胞增殖能力的影响。方法取1mL含人成骨肉瘤MG63细胞1×106/mL的单细胞悬液加至培养皿中,分为实验组(M007-PDT组)、空白对照组(B组)、光照对照组(L组)和光敏剂对照组(M007组),按分组加入不同浓度M007(0,2,4,8,16μmol/L),分别用多光源红光光照系统或暗反应处理10min。采用AnnexinⅤ-FITC/PI染色的流式细胞分析法,检测各组的细胞残存率及死亡方式;四甲基偶氮唑盐比色(MTT)实验和细胞集落形成实验评估不同组残存细胞的增殖能力。实验组和对照组同步进行,每组重复6次。结果 M007浓度为2～16μmol/L时,其介导的光动力疗法能使超过90%的MG63细胞以晚期凋亡/坏死,或成为裸核的方式被灭活,在4～16μmol/L时,维持残存率小于1%;2～8μmol/L M007-PDT组中的残存细胞生长曲线低平,其光吸收值未随培养时间延长而增加(P>0.05),并且不能形成细胞集落,但2μmol/L M007-PDT组偶见一次16个活细胞。结论 M007浓度大于4μmol/L后,其介导的光动力疗法能完全灭活人成骨肉瘤MG63细胞,该技术应用于肿瘤术野血液回收有着良好的前景。

姜黄素诱导人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡过程中hnRNP A2/B1表达与定位

姜黄素(curcumin)诱导处理的人成骨肉瘤MG-63细胞,在光镜和电镜观察细胞凋亡的基础上,对hnRNP A2/B1在核基质中存在、分布及其与凋亡相关基因产物在MG-63细胞中的共定位关系进行了研究.经姜黄素处理后,细胞出现染色质凝聚、细胞核固缩、凋亡小体等典型的细胞凋亡形态特征;双向凝胶电泳和质谱鉴定结果显示,hnRNP A2/B1存在于MG-63细胞核基质蛋白组分中,在姜黄素处理后细胞核基质蛋白中表达下调.蛋白质印迹杂交结果,证实hnRNP A2/B1在姜黄素处理前后的MG-63细胞核基质蛋白中的存在及其表达下调变化.免疫荧光显微镜观察显示,hnRNP A2/B1定位于MG-63细胞核基质纤维上,经姜黄素处理后出现分布位置与表达水平变化.激光扫描共聚焦显微镜的观察结果显示,hnRNP A2/B1在MG-63细胞凋亡过程中与Bax、Bcl-2、Fas和p53等基因产物具有共定位关系,且其共定位区域发生了变化.研究结果证实了hnRNP A2/B1定位于核基质纤维上,是一种核基质蛋白,在姜黄素诱导人成骨肉瘤MG-63凋亡过程中的表达与分布变化及其与凋亡相关基因的关系显然对MG-63细胞凋亡具有重要影响,这为深入揭示肿瘤细胞凋亡的机制提供了重要科学依据和深入探索的新方向.