硫酸镍对永生化人支气管上皮细胞系的恶性转化研究

目的 建立硫酸镍 (NiSO4)对永生化人支气管上皮细胞系 ( 16HBE)的恶性转化模型 ,为下一步关于镍化合物致癌的分子机制的研究提供相应的恶性转化细胞。方法 通过克隆形成率实验确定NiSO4对 16HBE细胞转化浓度后 ,对 16HBE细胞进行分阶段多次染毒 :每隔 2 0d染毒一次 ,每次染毒 2 4h。染毒 12次后 ,通过软琼脂集落形成实验和裸鼠体内致瘤实验鉴定细胞恶性转化程度。结果 经NiSO4多次处理 16HBE细胞至 75代时 ,细胞生长速度加快 ,排列紊乱 ,失去接触抑制 ,出现复层生长 ,并可在软琼脂上生长 ,且呈剂量反应关系 ,但在第 75代之前的细胞则不能在软琼脂上生长。转化细胞在裸鼠体内形成瘤 ,病理组织学证实为低分化鳞状细胞瘤。结论 NiSO4具有使

反式——BPDE诱发人支气管上皮细胞系P53基因突变的研究

目的 检测苯并 (a)芘的代谢产物反式—BPDE诱发的人支气管上皮细胞系P5 3基因突变 ,探讨苯并 (a)芘在人肺癌发生中的作用。方法 用银染PCR—SSCP方法检测P5 3抑癌基因第 5、6、7、8外显子的点突变情况。结果 经反式—BPDE处理的人支气管上皮细胞系 ,2 0d后 ,P5 3基因第 8外显子出现点突变。结论 结果提示 ,P5 3基因点突变可能是苯并 (a)

乙酸镍对人支气管上皮细胞系的恶性转化研究

目的 :建立乙酸镍(nickelacetate)对永生化人支气管上皮细胞系(16HBE)的恶性转化模型 ,为下一步关于镍化合物致癌的分子机制的研究提供相应的恶性转化细胞。 方法 :通过克隆形成率实验确定乙酸镍对16HBE细胞转化浓度后 ,对16HBE细胞进行分阶段多次染毒 :每隔20d染毒1次 ,每次染毒24h。染毒12次后 ,通过软琼脂集落形成试验和裸鼠体内致瘤试验鉴定细胞恶性转化程度。 结果 :经乙酸镍多次处理16HBE细胞至75代时 ,细胞生长速度加快 ,排列紊乱 ,失去接触抑制 ,出现复层生长 ,并可在软琼脂上生长 ,且呈剂量反应关系 ,但在第75代之前的细胞则不能在软琼脂上生长。转化细胞在裸鼠体内成瘤 ,病理组织学证实为低分化鳞状细胞癌。 结论 :乙酸镍具有使16HBE细胞发生恶性转化的能力。

Wnt-5a/JNK信号通路参与PM2.5诱导的人支气管上皮细胞系16HBE分泌IL-6和TNF-α

目的探讨PM2.5是否通过Wnt-5a/JNK信号通路诱导人支气管上皮细胞系16HBE中IL-6和TNF-α的分泌。方法本研究分为大鼠和16HBE细胞两部分。具体如下:将大鼠分为对照组和吸入机动车尾气组(浓度1.5 mg/m2,2 h/d,1月);将16HBE细胞分为对照组、PM2.5组(20μg/mL)、阴性对照siRNA+PM2.5组、Wnt-5a siRNA+PM2.5组、Wnt-5a siRNA+对照组、JNK抑制剂SP600125+PM2.5组、SP600125+对照组。采用免疫组化检测肺组织p-JNK和p-c-Jun表达水平;Western blot检测细胞中Wnt-5a、JNK、c-Jun、p-JNK和p-c-Jun表达水平;ELISA检测IL-6和TNF-α的分泌。结果与大鼠对照组相比,机动车尾气组的p-JNK和p-c-Jun表达水平显著增加(P<0.05);与16HBE细胞对照组相比,PM2.5组的Wnt-5a、p-JNK、p-c-Jun、IL-6和TNF-α的表达水平显著增加(P<0.05);与PM2.5组相比,Wnt-5a siRNA+PM2.5组Wnt-5a、p-JNK、p-c-Jun、IL-6和TNF-α的表达水平显著减少(P<0.05),SP600125+PM2.5组p-c-Jun、IL-6和TNF-α的表达水平显著减少(P<0.05)。结论Wnt-5a/JNK信号通路参与了PM2.5诱导的人支气管上皮细胞系分泌IL-6和TNF-α。

乙酸镍诱导的人支气管上皮细胞系转化细胞基因组不稳定性分析

背景与目的:检测乙酸镍对基因组不稳定性的影响,从而进一步探讨镍化合物致癌的分子机制。材料与方法:采用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术来对经乙酸镍在诱导人支气管上皮细胞系(16HBE)的恶变细胞中的基因组不稳定性进行分析。结果:本实验所选用的7条随机引物均能扩增出清晰、明显的条带,条带数在1-6条之间。7条引物中第4、7两条引物扩增的片段在实验组和对照组之间无差异。其余五条引物均有差异,对于同一随机引物它们都具有特异的带型。结论:乙酸镍能诱发16HBE细胞基因组不稳定。

NiCl_2诱导人支气管上皮细胞系恶性转化的研究

目的 建立NiCl2 诱导永生化人支气管上皮细胞系 (16HBE)恶性转化的模型 ,为下一步关于镍化合物致癌的分子机制的研究提供相应的恶性转化细胞。方法 通过克隆形成率实验确定NiCl2 诱导 16HBE细胞转化浓度后 ,对 16HBE细胞进行分阶段多次染毒 ,每隔 2 0d染毒 1次 ,每次染毒 2 4h。染毒 12次后 ,通过软琼脂集落形成试验和裸鼠体内致瘤试验鉴定细胞恶性转化程度。结果 经NiCl2 多次处理 ,16HBE细胞至 75代时 ,细胞生长速度加快 ,排列紊乱 ,失去接触抑制 ,出现复层生长 ,并可在软琼脂上生长 ,且呈剂量 -反应关系 ,但在第 75代之前的细胞则不能在软琼脂上生长。转化细胞在裸鼠体内成瘤 ,病理组织学证实为低分化鳞状细胞癌。结论 NiCl2 具有使

石英诱发人支气管上皮细胞恶性转化模型的建立

目的研究石英诱发永生化的人支气管上皮细胞系(16HBE)的恶性转化作用。方法用新研磨的浓度为300 mg/L的石英染毒16HBE细胞共10次,软琼脂集落形成实验和裸鼠成瘤实验鉴定转化细胞的恶性程度。结果细胞培养至35代,发现石英可以诱导16HBE发生恶性转化。转化细胞排列紊乱,重叠生长,在软琼脂中的集落形成率显著高于对照组(P<0.01);转化细胞在裸鼠体内成瘤。结论石英具有较强的诱导16HBE恶性转化能力。

分子免疫学

0216418 细胞因子领域与免疫应答的两极分化/Kourilsky P∥Trends Immunol.-2001,22(9).-502～509 北大图0216419 gp 130结合细胞因子上Broncho-Vaxom(OM-85 BV)的清晰的效应/RothM∥Thorax.-2000,55(8).

呼吸系统药物

9803789 H2O2

Smad7基因过表达的促增殖作用机制探讨

目的 研究Smad7过表达使人支气管上皮细胞系增殖能力增强的机制。方法 用Smad7真核表达载体PCISmad7.neo同携带有报告基因碱性磷酸酶的c myc顺式增强子元件pMyc SEAP共转染 ,检测Smad7基因对增殖信号通路的影响。用RT PCR方法 ,检测稳定转染Smad7基因前后永生化及恶性化的人支气管上皮细胞系BEP2D和BERP35T2细胞内c myc、p15、p2 1表达水平的变化 ,调查Smad7基因对TGF β介导的抗增殖基因反应的调控。 结果 报告基因检测结果表明 ,Smad7基因可使参与增殖信号通路的c myc顺式增强子元件活性增强。RT PCR结果表明 ,在稳定转染Smad7基因的细胞中 ,c myc表达上调 ,p15表达降低 ,对TGF β刺激的应答丧失 ,p2 1表达降低。 结论Smad7基因可通过调控TGF β介导的抗增殖基因应答来影响细胞的生长。