人整合素分子β7亚基片段的表达鉴定及多抗制备

目的 在大肠杆菌中高效表达人整合素分子β７片段并制备多抗。方法 ＤＮＡ重组法构建表达质粒，经ＩＰＴＧ诱导在大肠杆菌中获高效表达。表达产物经免疫印迹鉴定后，用８ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解包涵体，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纯化，免疫家兔获得多抗。结果 β７片段在大肠杆菌中训效表达。表达产物以包涵体形式存在。免疫印迹鉴定为目的蛋白。多抗效价达１：１０２４００。结论 制备了抗β７的多抗，对β７整合素的功能研究有重要意义。

人整合素α4亚基cDNA片段的克隆表达和纯化

整合素(integrins)分子是一类由不同的α和β亚基组成的异二聚体。α4整合素有α4β1和α4β7两种,二者都是表达于细胞表面的粘附分子,其相应的最佳配体分别为VCAM-1(vascu-lar cell adhesion molecule-1)和MAdCAM-1(mucosal addressin cell adhesion molecule-1)。人α4亚基由999个氨基酸残基组成,其cDNA长3 kb,糖基化后分子量为150 ku,N端有7个重复序列。在分子的偏中位置有一个蛋白酶作用位点,该位点可将α4分为30和70

MadCAM-1与整合素β7免疫细胞浸润在食管癌发生中的作用

目的探讨M adCAM-1(m ucosal addressin cell adhesion m olecu le-1)的变化及整合素β7免疫细胞浸润在食管癌发生中的作用。方法用免疫组织化学SP法,检测50例行食管癌根治术所收集的癌组织、癌旁组织、正常食道黏膜组织中M adCAM-1与免疫细胞上整合素β7的表达。结果M adCAM-1表达率在正常食道黏膜、癌旁组织及癌组织中分别为78%(39/50),64%(32/50)和40%(20/50)。癌组织中的阳性表达率明显低于正常组织(P<0.01)和癌旁组织(P<0.01);而正常组织与癌旁组织之间差异无统计学意义(P>0.05);M adCAM-1阳性表达患者中在低年龄组(<45 y)中的表达低于高年龄组(>45 y)(P<0.05);M adCAM-1阳性表达率与TNM分型、肿瘤部位、肿瘤大小及癌细胞的浸润深度和分化程度无关(P>0.05)。M adCAM-1阳性表达组中β7免疫细胞数量癌组织中明显低于癌旁及正常组织(P<0.01)。结论M adCAM-1参与肿瘤局部免疫过程,与食管癌发生、发展有关。食管癌组织中M adCAM-1的表达减少,β7免疫细胞浸润减少。提高M adCAM-1表达是肿瘤免疫治疗的一种方法。

与HEp-2细胞粘附现象相关的大肠杆菌O157基因的发现

将产志贺毒素大肠杆菌O157∶H7菌株97094培养于含有不同质量浓度的萘啶酮酸(nalidixicacid,NA)的麦康凯(MacConkey)琼脂平板上,获得对NA有抗性的菌株。用含有自杀性质粒pRT733的供体菌SM10λpir(携带转座子TnphoA)和抗萘啶酮酸的97094菌株做接合试验,使转座子TnphoA转入受体菌97094,经过约200个接合试验,有503个菌株在含有Km、NA、XP的LB琼脂平板上形成蓝色菌落,说明在这些菌株中形成了phoA融合基因,并能表达phoA基因。在这503个Kmr,NAr变异体中,有6株完全失去了对HEp-2细胞的局灶型粘附(localadherence,LA)现象。对构建的6株大肠杆菌O157TnphoA变异体,克隆TnphoA及其两侧的大肠杆菌O157DNA序列,用根据TnphoA融合接点处的phoA的DNA序列设计合成的寡核苷酸引物,对各克隆中TnphoA上游的大肠杆菌O157的DNA片段部分进行测序,测序结果做BLAST搜索,发现有4个变异体的TnphoA插入到已知的大肠杆菌O157紧密素基因eae中,有2个变异体的TnphoA分别插入到eae之外的核苷酸序列中,分别插入到一个功能未知的菌毛分子伴侣基因和一个功能未知的Z4182基因的上游。这项研究表明,除紧密素外,大肠杆菌O157尚有其他因子参与对真核细胞的粘附。

血清N-MID、BMP-7水平与骨质疏松性椎体压缩性骨折术后骨折延迟愈合的关系

目的探讨血清骨钙素N端中分子片段(N-MID)、骨形态发生蛋白7(BMP-7)水平与骨质疏松性椎体压缩性骨折(OVCF)术后骨折延迟愈合的关系。方法选择接受经皮椎体成形术治疗的OVCF患者254例,术后12周出现骨折延迟愈合20例(观察组)、未出现骨折延迟愈合234例(对照组)。术后12周,采集空腹肘静脉血,离心留取血清,采用ELISA法检测血清N-MID、BMP-7;采用双能X线骨密度仪检测L 2~4骨密度(BMD);采用Oswestry功能障碍指数问卷表(ODI)评分评估胸腰椎椎体功能;拍摄椎体正侧位X线片,计算伤椎前缘丢失高度、伤椎前缘压缩率、伤椎后缘压缩率、矢状面后凸Cobb角。分析OVCF患者血清N-MID、BMP-7水平与BMD、椎体功能的关系。收集所有研究对象性别、年龄、基础疾病、骨折部位、受伤原因、手术时间、术中出血量、术后延迟负重等临床病历资料,采用多因素Logistic回归模型分析OVCF术后骨折延迟愈合的危险因素。结果观察组血清N-MID、BMP-7水平均低于对照组(P均<0.05)。观察组ODI评分、伤椎前缘丢失高度、伤椎后缘压缩率、矢状面后凸Cobb角均高于对照组,BMD低于对照组(P均<0.05);而两组伤椎前缘压缩率比较P>0.05。Pearson相关分析显示,OVCF患者血清N-MID、BMP-7水平与BMD均呈正相关关系,与ODI评分、伤椎前缘丢失高度、伤椎前缘压缩率、伤椎后缘压缩率、矢状面后凸Cobb角均呈负相关关系(P均<0.05)。单因素分析显示,两组合并糖尿病、术后延迟负重例数比较P均<0.05,两组性别、年龄、骨折部位、受伤原因、合并高血压、合并冠心病、手术时间、术中出血量比较P均>0.05。多因素Logistic回归分析发现,合并糖尿病、N-MID、BMP-7是影响OVCF术后骨折延迟愈合的危险因素(P均<0.05)。结论OVCF患者术后骨折延迟愈合者血清N-MID、BMP-7水平明显降低;血清N-MID、BMP-7是影响OVCF术后骨折延迟愈合的危险因素。

肠道淋巴细胞归巢与自身免疫性葡萄膜炎的相关性探讨

葡萄膜炎是由眼组织特异性T细胞介导的自身免疫性疾病。肠道菌群激活的眼组织特异性T细胞已被证实可引发小鼠葡萄膜炎,肠道淋巴细胞归巢是其中的关键环节。循环系统中的T淋巴细胞通过表面归巢受体整合素α4β7与其配体黏膜地址素细胞粘附分子-1(MAdCAM-1)特异性识别结合后进入到肠道,再被激活为活化的眼组织特异性T细胞,随后这些眼组织特异性T细胞从肠道不断迁移到眼部,穿越血视网膜屏障进入眼内,引发葡萄膜炎。因此,肠道淋巴细胞归巢在自身免疫性葡萄膜炎的发生发展中可能起重要作用。

肠出血性大肠杆菌O157∶H7紧密黏附素免疫保护性片段的基因克隆与表达

目的 克隆表达肠出血性大肠杆菌 (EHEC)O1 5 7∶H7紧密黏附素 (intimin)免疫保护性片段 (intiminC30 0 )。方法 设计引物采用PCR法自EHECO1 5 7∶H7基因组扩增紧密黏附素及其免疫保护性片段的编码基因eae与eaeC30 0 ,T A克隆后构建原核表达质粒pET 2 8a(+) eae及pET 2 8a(+) eaeC30 0 ,经测序鉴定后转化E .coliBL2 1 (DE3) ,IPTG诱导表达 ,PAGE检测。结果 PCR法自EHECO1 5 7∶H7基因组扩增出了约 2 80 0bp和 90 0bp的目的片段 ;原核表达质粒pET 2 8a(+) eae及pET 2 8a(+) eaeC30 0经酶切及测序鉴定与预期序列一致。转化E .coliBL2 1 (DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约 2 5 %和 30 %;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量 (Mr)约 96× 1 0 3和 35× 1 0 3,破菌后电泳证实目的蛋白均以包涵体形式表达。结论 EHECO1 5 7∶H7紧密黏附素免疫保护性片段经基因克隆后获得了较高的表达量 ,为进一步的生物学性质及免疫学特性研究奠定了基础。

克罗恩病概述

克罗恩病(CD)是一种病因未明确的侵犯胃肠全层的慢性炎症性疾病。病理学上可分为早期、活动期、慢性炎症期或消退期等。临床上相应可分早期、活动期、缓解期或慢性活动期。中国近年发病率有明显增高趋势,推算的发病率与患病率分别为0.848/10万和2.29/10万。肠道黏膜免疫学障碍的研究,很多已得到临床证实与应用。大体病理学特点为节段性(跳跃性)溃疡、卵石征、透壁性炎症和(或)瘘管及肠腔狭窄等;显微镜下可见淋巴细胞浸润,灶性分布,隐窝破坏,裂隙状溃疡及非干酪坏死性肉芽肿等。临床表现为腹痛腹泻,发热与消瘦等。必须依据患者的临床资料综合分析后才能作出诊断。不及时规范治疗,大多数患者需手术治疗,但仍会复发。平均期望寿命略低于正常人。