卷曲蛋白在无翅型小鼠乳房肿瘤病毒整合位点家族-卷曲蛋白信号转导通路中的作用

卷曲蛋白（FRZ）最初鉴定于果蝇,因其与无翅型小鼠乳房肿瘤病毒整合位点家族（WNT）缠绕在一起而得名,是WNT家族的细胞表面受体,包括三个区域,是G蛋白偶联受体（GPCR）家族中的一员,具有和缺失GPCR的一些基本结构。FRZ信号转导通路分为依赖转录调节因子β-连环蛋白的经典和非经典信号转导通路。FRZ包括FRZ1~10,其调节作用非常广泛,不但在细胞水平上参与调控胚胎发育、干细胞分化和器官形成等过程,而且还在维持组织稳态、再生、塑性和修复中起着重要的作用。FRZ信号转导通路中的激动剂、拮抗剂以及以WNT/FRZ信号转导通路中的共受体,都被假定为潜在的治疗多种癌症、神经退行性变疾病和骨质疏松等重大疾病的靶点。WNT/FRZ相关信号转导通路网非常的复杂,其信号转导通路激活后的结果,潜在机制和相关因子研究都还不够透彻。探究该信号转导通路的特异性,量化其结合反应及系统的定位及其所激活的下游事件是非常重要的,但还需要更多的相关研究来逐步诠释这些问题。

卡培他滨联合照射对食管癌裸鼠移植瘤生长及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探究卡培他滨联合照射对食管癌裸鼠移植瘤生长、凋亡及无翅型MMTV整合位点家族成员(Wnt)/β-链蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法采用裸鼠皮下接种人食管癌Eca-109细胞,建立裸鼠皮下移植瘤模型。将70只建模成功的裸鼠随机分为对照组、顺铂(5 mg/kg)组、20 Gy(单纯照射,2 Gy/d,5次/w)组、2.67、0.67 mg组(单纯用药2.67、0.67 mg/20 g)、2.67 mg+20 Gy、0.67 mg+20 Gy(用药+照射联合)组,每组10只。用药期间密切观察肿瘤生长情况,计算肿瘤体积、移植瘤体积抑制率;苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织基本形态,原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肿瘤组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达;Western印迹检测肿瘤组织Wnt1、β-catenin、糖原合成酶激酶(GSK)3β、癌基因(c-Myc)蛋白表达。结果与对照组相比,其余组瘤体体积及瘤重明显小(P<0.05);肿瘤组织细胞凋亡、Caspase-3、Bax mRNA、GSK3β蛋白表达明显升高,Bcl-2 mRNA表达、Wnt1、β-catenin、c-Myc蛋白表达明显降低(P<0.05)。与20 Gy组、2.67 mg组相比,顺铂组、2.67 mg+20 Gy组、0.67 mg+20 Gy组食管癌裸鼠移植瘤的体积及瘤重显著降低(P<0.05);瘤组织可见大量坏死灶,细胞凋亡率、肿瘤组织Caspase-3、Bax mRNA、GSK3β蛋白表达显著升高(P<0.05),Bcl-2 mRNA表达、Wnt1、β-catenin、c-Myc蛋白表达显著降低(P<0.05);且2.67 mg+20 Gy组对肿瘤的抑制效果明显优于顺铂组(P<0.05)。结论卡培他滨联合照射能显著抑制食管癌肿瘤细胞的生长,诱导肿瘤细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

梓醇通过上调BMP-2表达激活Wnt/β-catenin信号通路促进大鼠股骨骨折愈合

目的:探讨梓醇对大鼠股骨骨折愈合的作用及其可能的作用机制。方法:将48只SD股骨骨折模型大鼠随机分为对照组、梓醇组、梓醇+sh-NC组和梓醇+sh-BMP-2组,每组12只。梓醇组大鼠灌胃50 mg/kg梓醇,梓醇+sh-NC组大鼠灌胃50 mg/kg梓醇和尾静脉注射300μL sh-NC慢病毒液,梓醇+sh-BMP-2组大鼠灌胃50 mg/kg梓醇和尾静脉注射300μL sh-BMP-2慢病毒液,对照组大鼠灌胃等量溶剂,1次/d,连续给药3周。X线检测骨折愈合;Micro-CT检测骨体积(BV)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(TB.N)、骨小梁间距(TB.Sp)和骨小梁厚度(TB.Th);RT-PCR检测BMP-2 mRNA表达;Western blotting检测BMP-2、Runx2、ColⅠ、β-catenin、cyclinD1和c-myc蛋白表达;ELISA检测血清ALP和OCN水平。结果:与对照组比较,梓醇组大鼠X线评分、BV、BV/TV、TB.N、TB.Th、BMP-2 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05),ALP和OCN水平以及Runx2、ColⅠ、β-catenin、cyclinD1和c-myc蛋白表达显著升高(P<0.05),TB.Sp无显著差异(P>0.05);梓醇组和梓醇+sh-NC组大鼠各项指标差异无统计学意义(P>0.05);与梓醇+sh-NC组相比,梓醇+sh-BMP-2组大鼠X线评分、BV、BV/TV、TB.N、TB.Th、BMP-2 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),ALP和OCN水平以及Runx2、ColⅠ、β-catenin、cyclinD1和c-myc蛋白表达显著降低(P<0.05),TB.Sp无显著差异(P>0.05)。结论:梓醇可能通过上调BMP-2表达激活人无翅型MMTV整合位点家族/β-连锁蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路促进大鼠股骨骨折愈合。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨VEGF基因转染骨髓源内皮祖细胞移植治疗大鼠缺血皮瓣的实验

目的分析基于无翅型MMTV整合位点家族(Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路,血管内皮生长因子(VEGF)基因转染骨髓源内皮祖细胞(EPCs)移植对大鼠缺血皮瓣的治疗作用。方法培养诱导分化大鼠EPCs,脂质体介导VEGF转染EPCs。Wistar大鼠制备缺血皮瓣模型分为对照组、VEGF-EPCs组、NC-EPCs组、Wnt/β-catenin信号通路激活剂氯化锂(LiCl)组。VEGF-EPCs组与NC-EPCs组皮瓣分别注射PcDNA3.1(+)/VEGF165质粒、PcDNA3.1(+)/NC空载对照质粒,对照组注射PBS溶液,LiCl组注射LiCl。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清VEGF水平;观察大鼠皮瓣存活情况;激光多普勒血液检测仪检测皮瓣蒂部血流;HE染色计算皮瓣毛细血管密度;Western blotting检测皮瓣组织Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达。结果镜下观察分离培养的EPCs外观呈“铺路石”状,经鉴定符合EPCs表面抗原。VEGF-EPCs组、NC-EPCs组、LiCl组血清VEGF水平、皮瓣存活率、PU值、毛细血管密度高于对照组,且VEGF-EPCs组高于NC-EPCs组、LiCl组,差异有统计学意义(P<0.05),NC-EPCs组与LiCl组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。VEGF-EPCs组、NC-EPCs组、LiCl组β-catenin、c-myc蛋白相对表达量高于对照组,LiCl组高于VEGF-EPCs组与NC-EPCs组,VEGF-EPCs组高于NC-EPCs组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论VEGF基因转染骨髓源EPCs移植能促进大鼠缺血皮瓣的存活,改善血液循环,增加微血管密度,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

温阳逐瘀汤对肾阳虚证大鼠急性脑缺血损伤后Wnt3a、β-catenin表达的影响

目的:观察温阳逐瘀汤对肾阳虚证大鼠急性脑缺血损伤后缺血脑组织无翅型MMTV整合位点家族成员3A(Wnt3a)、β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响,并探讨温阳逐瘀汤防治肾阳虚证大鼠脑缺血损伤的作用机制。方法:将176只雄性SD大鼠分为空白组(Blank组,44只)和肾阳虚组(SYX组,132只);成功建立肾阳虚证大鼠模型后随机分为假手术组(Sham组,44只)、脑缺血模型组(MCAO组,44只)、温阳逐瘀汤组(WYZY组,44只)。WYZY组大鼠灌胃温阳逐瘀汤,MCAO组与Sham组灌胃等体积蒸馏水。各组在术后1 d,运用Zea Longa评分标准进行大鼠神经行为学评分,于术后3、7、14、21 d取材,每个时间选11只大鼠。苏木精-伊红(HE)染色观察神经细胞形态变化;运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量;免疫蛋白印迹法(Western Blot)检测缺血侧脑组织Wnt3a、β-catenin表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Wnt3a、β-catenin mRNA表达。结果:与Blank组比较,SYX组cAMP含量下降(P<0.05)、cGMP含量升高(P<0.05)。HE染色结果显示,MCAO组细胞排列紊乱、大量细胞坏死、细胞膜消失、细胞核固缩,呈明显的脑缺血损伤表现;WYZY组前期细胞排列紊乱、部分细胞坏死,随着时间的延长,细胞损伤减轻,细胞排列逐渐密集,坏死细胞减少,脑缺血损伤显著改善。与MCAO组、Sham组比较,WYZY组cAMP含量升高,cGMP含量降低(P<0.05)。与MCAO组比较,WYZY组1、3、7、14、21 d神经行为学评分均降低(P<0.05)。与Blank组、Sham组比较,MCAO组、WYZY组缺血脑组织3、7、14、21 d Wnt3a、β-catenin表达均有增加(P<0.05);与MCAO组比较,WYZY组Wnt3a、β-catenin表达均增加(P<0.05),7 d Wnt3a达到峰值,14 dβ-catenin达到峰值。与Blank组、Sham组比较,MCAO组、WYZY组3、7、14、21 d Wnt3a、β-catenin mRNA表达均有增加(P<0.05);与MCAO组比较,WYZY组Wnt3a、β-catenin mRNA表达增加(P<0.05),7 d Wnt3a mRNA达到峰值,14 dβ-catenin mRNA达到峰值。结论:温阳逐瘀汤可改善肾阳虚证大鼠cAMP、cGMP水平及肾阳虚病理状态,可能通过上调Wnt3a、β-catenin表达减轻急性脑缺血损伤,减少神经功能缺损。

无翅型MMTV整合位点家族蛋白通路在调控脂肪干细胞成骨及成软骨分化中的分子机制

目的探讨无翅型MMTV整合位点家族蛋白(Wnt)通路和SRY相关高迁移率族盒基因9(Sox9)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)相互反馈调节在调控脂肪干细胞(ADSCs)成软骨和成骨分化中的作用机制.方法通过氯化锂(LiCl)、Dickkopf相关蛋白1(DKK-1)刺激ADSCs成软骨及成骨分化,检测早中晚后期成软骨和成骨分化的各项指标如Ⅱ型胶原蛋白(Collagen2a)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、核心结合因子α1(Runx2)、无翅型MMTV整合位点家族蛋白成员5A(Wnt5a)及Wnt通路关键蛋白Sox9、BMP-2、β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)表达情况.随后用慢病毒作为载体,将全长基因序列Sox9和BMP-2基因分别转染进ADSCs使其稳定表达后再次检测相关各项指标的表达水平.应用SPSS 20.0统计软件进行分析,并探讨分子机制.结果ADSCs成软骨诱导分化过程中,Wnt通路早中晚期促进其快速增殖并诱导其成软骨分化.Collagen 2a、Aggrecan的表达早期增高不明显,中晚期明显增高(t=1.484、0.792、8.598、8.788、3.333、8.285,P<0.05);后期则抑制成熟软骨表型并促进软骨肥大和早期软骨骨化;过表达则反馈抑制Wnt通路活性.Sox9表达早中期上调晚期下调(0.14±0.03比0.45±0.09、0.33±0.15比0.84±0.05、0.27±0.02比0.58±0.06,t=5.897,7.726,12.175,P<0.01).成骨诱导分化过程中,Wnt通路前期促进其快速增殖并诱导其成骨分化,Runx2、Wnt5a的表达与对照组比较早期无明显差异(t=0.543、1.755,P>0.05),中晚后期Runx2表达均明显增强(t=13.452、12.148、16.535,P<0.05),而Wnt5a表达均下降(t=-4.017、-19.901、-7.181,P<0.05);过表达则反馈激活Wnt通路,上调β-catenin(0.26±0.08比0.64±0.05,t=8.789,P<0.05),下调Wnt5a(1.35±0.23比0.51±0.26,t=-5.233,P<0.05).BMP-2表达在两组各时期均上调(0.26±0.03比0.64±0.05、0.47±0.03比1.15±0.15、0.63±0.11比1.31±0.09,t=16.340、8.750、29.721,P<0.01).结论Wnt通路分别通过调控Sox9和BMP-2来调节ADSCs成软骨及成骨分化,在诱导分化的不同时期其调控机制明显不同.

miR-148a-3p靶向Wnt1基因对人牙髓干细胞增殖活力及成骨分化的影响

目的:观察微小RNA(miRNA)-148a-3p对人牙髓干细胞(DPSCs)增殖活力及成骨分化的影响,并探讨可能机制。方法:取对数期DPSCs,分为空白组、NC组、inhibitor组、inhibitor+XAV939[无翅型MMTV整合位点家族蛋白(Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制剂]组。空白组不处理,NC组转染阴性对照质粒miR-148a-3p NC,inhibitor组转染miR-148a-3p inhibitor,inhibitor+XAV939组转染miR-148a-3p inhibitor并加入XAV939(40μmol/L)。转染48 h后qRT-PCR法检测miR-148a-3p表达量;MTT法检测增殖活力;ELISA法检测碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色法检测矿化能力;双荧光素酶实验验证miR-148a-3p靶向基因;Western blot法检测糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、β-catenin、Runt相关转录因子2(Runx2)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白1(DMP-1)以及Wnt1蛋白相对表达量。结果:与空白组、NC组比较,inhibitor组24 h、48 h、72 h吸光度值,GSK-3β蛋白表达量降低,ALP活性值,矿化结节面积占比,β-catenin、Runx2、DSPP、DMP-1以及Wnt1蛋白表达量升高(P<0.05);与inhibitor组比较,inhibitor+XAV939组24 h、48 h、72 h吸光度值,GSK-3β蛋白表达量升高,ALP活性值,矿化结节面积占比,β-catenin、Runx2、DSPP、DMP-1以及Wnt1蛋白表达量降低(P<0.05)。结论:抑制miR-148a-3p表达可提升DPSCs增殖活力并促进其成骨分化,推测其作用机制与负向调控下游的靶基因Wnt1有关。

骨硬化蛋白对牙骨质形成的影响及其机制

骨硬化蛋白是一种含有胱氨酸结的分泌型糖蛋白,可通过骨细胞突触传递至骨表面并作用于周围的成骨细胞,从而降低骨的发生发育速度。其机制在于骨硬化蛋白与无翅型小鼠乳房肿瘤病毒整合位点家族蛋白竞争性地结合辅助受体低密度脂蛋白受体相关蛋白5/6,促进β-连环蛋白磷酸化并降低β-连环蛋白水平,从而抑制成骨细胞的分化及活性。牙骨质为连接牙体和牙周组织间的桥梁,其功能在于维系牙体的稳固和牙周组织的健康。骨硬化蛋白参与并影响牙骨质的发生发育等各种生理性活动,因此进一步深入探讨骨硬化蛋白这一骨形成负性调控因子与牙骨质间的相互作用和机制,将有助于牙骨质相关再生领域的发展。

小檗碱靶向Wnt5a/NPC1信号通路调节脂自噬抑制动脉粥样硬化形成

目的:探讨小檗碱(BBR)在防治小鼠动脉粥样硬化(AS)病变中对脂自噬的调节作用及分子机制。方法:采用载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠50只随机分为AS模型组、阿托伐他汀组(5 mg·kg-1)、BBR低、中、高剂量组(2.5、5、10 mg·kg-1);另设10只C57BL/6J小鼠为空白组。12周后苏木素-伊红(HE)及油红O染色检测主动脉AS斑块病理学改变;生化检测血清脂质水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、氧化应激标记物活性氧(ROS)含量及血清脂自噬标记物Beclin1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)水平;黄嘌呤氧化酶法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活力;免疫组化(IHC)检测主动脉无翅型MMTV整合位点家族成员5a(Wnt5a)、C1型尼曼-匹克蛋白(NPC1)分布;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测主动脉Wnt5a、NPC1蛋白表达。结果:与空白组比较,AS模型组小鼠可见显著的AS斑块形成,血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、IL-6、TNF-α、ROS、主动脉Wnt5a分布及蛋白表达均显著升高(P<0.01),血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、SOD、Beclin1、LC3Ⅱ、主动脉NPC1分布及蛋白表达均显著降低(P<0.01);与AS模型组比较,阿托伐他汀组、BBR中剂量组及BBR高剂量小鼠AS斑块面积明显减少(P<0.05,P<0.01),血清TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、ROS、主动脉Wnt5a分布及蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),血清HDL-C、SOD、Beclin1、LC3Ⅱ、主动脉NPC1分布及蛋白表达均明显升高(P<0.05,P<0.01);与阿托伐他汀组比较,BBR中剂量组小鼠以上检测指标差异无统计学意义。结论:BBR可通过竞争性结合Wnt5a激活NPC1表达,上调脂自噬水平降低血脂,抑制炎症介质的释放及氧化应激损伤从而发挥防治AS功效。

川芎嗪通过Wnt/β-catenin通路调控滋养层细胞增殖和迁移改善子痫前期的研究

目的探索川芎嗪(TMP)治疗子痫前期(PE)的作用及机制。方法将人绒毛滋养层细胞HTR-8/SVneo分为对照组(常规培养)和低、中、高剂量实验组(0.5、1.0和2.0 mmol·L^(-1)TMP)及高剂量+抑制剂组(2.0 mmol·L^(-1)TMP+50μmol·L^(-1)PUN-74654)。用细胞计数试剂盒-8法检测细胞存活率,用平板克隆实验检测细胞克隆数,用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测细胞增殖情况,用Transwell实验法检测细胞迁移情况,用蛋白质印迹法检测无翅型MMTV整合位点家族成员1(Wnt1)、β-连环蛋白(β-catenin)、G1/S-特异性周期蛋白(CyclinD1)蛋白的表达水平。结果对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组和高剂量+抑制剂组的细胞存活率分别为(100.00±0.00)%、(119.57±10.71)%、(142.07±6.02)%、(174.48±13.45)%和(118.71±9.73)%,细胞迁移数目分别为(39.67±3.94)、(53.50±4.43)、(64.67±5.06)、(84.00±4.50)和(68.00±3.46)个,Wnt1蛋白相对表达水平分别为1、2.55±0.03、3.82±0.11、5.01±0.08和1.42±0.06,β-catenin蛋白相对表达水平分别为1、1.47±0.03、2.81±0.10、4.93±0.07和1.45±0.05,CyclinD1蛋白相对表达水平分别为1、1.44±0.03、2.67±0.05、4.02±0.11和1.59±0.04。低、中、高剂量组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量实验组的上述指标与高剂量+抑制剂组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论TMP可通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进滋养层细胞增殖和迁移,从而改善PE,且存在剂量依赖性。

阿托伐他汀对牙周炎大鼠的影响及可能机制

目的观察阿托伐他汀(ATV)对牙周炎大鼠的治疗效果。方法45只牙周炎模型大鼠随机分为牙周炎组、ATV组、联合组,各15只;健康组15只不做处理。ATV组大鼠灌胃阿托伐他汀钙生理盐水溶液5 mL(含阿托伐他汀钙3 mg·kg^(-1)),1 h后腹腔注射二甲基亚砜(DMSO)溶液0.2 mL;联合组大鼠灌胃阿托伐他汀钙生理盐水溶液5 mL(剂量mg·kg^(-1)),1 h后腹腔注射XAV939 DMSO溶液0.2 mL(剂量20 mg·kg^(-1));健康组、牙周炎组大鼠灌胃生理盐水溶液5 mL,1 h后腹腔注射DMSO溶液0.2 mL,每日1次,持续干预4周。检测各组牙龈出血指数(SBI)、菌斑指数(PLI);观察牙槽骨骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、从釉牙骨质界至牙槽嵴顶的距离(CEJ-AC);检测糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、Runt相关转录因子2(Runx2)、β-连环蛋白(β-catenin)、p-β-catenin蛋白表达量。结果与牙周炎组比较,ATV组SBI、PLI、Tb.Sp、CEJ-AC均降低(P<0.05),Tb.Th、Tb.N均升高(P<0.05);与ATV组比较,联合组SBI、PLI、Tb.Sp、CEJ-AC均升高(P<0.05),Tb.Th、Tb.N均降低(P<0.05);与牙周炎组比较,ATV组牙周组织Runx2蛋白表达量、p-β-catenin/β-catenin升高,GSK-3β蛋白表达量降低(P<0.05);与ATV组比较,联合组牙周组织Runx2蛋白表达量、p-β-catenin/β-catenin降低,GSK-3β蛋白表达量升高(P<0.05)。结论ATV可抑制牙周炎大鼠牙槽骨吸收及炎症反应,可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路来实现。

闹羊花毒素Ⅲ通过调控Wnt1/Dvl1/β-catenin通路影响成纤维样滑膜细胞增殖凋亡的实验研究

目的探讨闹羊花毒素Ⅲ对类风湿关节炎(RA)的治疗作用及其机制。方法采用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导RA成纤维样滑膜细胞(RA-FLS细胞)作为RA的细胞模型。以雷公藤多苷作为阳性对照药物,过表达蓬乱蛋白1(Dvl1)后加入闹羊花毒素Ⅲ研究其作用机制。细胞增殖毒性检测法(CCK-8法)检测细胞活力,蛋白质免疫印迹(Western Blot)检测B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(Bax)、无翅型MMTV整合位点家族成员1(Wnt1)、Dvl1、β-连环蛋白(β-catenin)的表达量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测Wnt1、Dvl1、β-catenin mRNA水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清中IL-6、IL-8、IL-10、IL-4、CC趋化因子配体2(CCL2)、CC趋化因子配体5(CCL5)的含量。结果RA细胞模型构建成功,随着闹羊花毒素Ⅲ浓度的增加,RA-FLS细胞增殖减缓(P<0.05),凋亡增加(P<0.01);闹羊花毒素Ⅲ与雷公藤多苷降低了RA-FLS细胞中IL-6、IL-8、CCL2、CCL5并且增加了IL-10、IL-4的含量(P<0.05);降低了Wnt1、β-catenin、Dvl1蛋白与mRNA的表达量(P<0.01)。闹羊花毒素Ⅲ可以逆转由过表达Dvl1所造成的RA-FLS细胞增殖的增加(P<0.05)、促炎因子(IL-6、IL-8)与趋化因子(CCL2、CCL5)的增加(P<0.05),并逆转Wnt通路中Wnt1,Dvl1,β-catenin蛋白与mRNA表达的增加(P<0.01)。结论闹羊花毒素Ⅲ通过调控Wnt1/Dvl1/β-catenin通路影响TNF-α诱导的RA-FLS细胞增殖凋亡及炎症因子等的变化,可能通过这种机制治疗RA。

依托咪酯对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞损伤的影响

目的 探讨依托咪酯对白细胞介素(IL)-1β诱导的软骨细胞损伤的影响。方法 将人CHON-001软骨细胞分为空白组(常规培养基培养)、模型组(用10 ng·mL^(-1) IL-1β培养)、高剂量实验组(用5μmol·L^(-1)依托咪酯+10 ng·mL^(-1) IL-1β培养)、抑制药组[用5μmol·L^(-1)无翅型MMTV整合位点家族成员3a(Wnt3a)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制药IWR-1-endo+10 ng·mL^(-1) IL-1β培养]、抑制药+高剂量实验组(用10 ng·mL^(-1) IL-1β+5μmol·L^(-1)依托咪酯+5μmol·L^(-1) IWR-1-endo培养)。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞的增殖情况,用膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙啶(PI)染色法检测细胞凋亡情况;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中促炎因子的含量;用蛋白质印迹法测定基质金属蛋白酶(MMP)-13、Ⅱ型胶原(COL2A1)、聚集蛋白聚糖(ACAN)、Dickkopf相关蛋白1(DKK-1)的蛋白表达水平。结果 空白组、模型组、高剂量实验组、抑制药组、抑制药+高剂量实验组的细胞活力分别为(100.20±5.40)%、(51.33±3.62)%、(77.28±4.87)%、(80.10±5.21)%和(88.42±6.37)%,细胞凋亡率分别为(3.21±1.14)%、(28.09±4.51)%、(15.60±3.85)%、(13.76±2.31)%和(8.09±0.98)%,TNF-α水平分别为(58.80±4.73)、(143.23±11.39)、(96.71±10.50)、(89.27±7.86)和(71.42±5.43)pg·mL^(-1),IL-6水平分别为(99.70±6.51)、(202.55±14.88)、(131.33±12.40)、(123.42±9.31)和(102.07±6.78)pg·mL^(-1),MMP-13蛋白表达水平分别为0.26±0.03、0.88±0.05、0.51±0.02、0.43±0.05和0.22±0.03,COL2A1蛋白表达水平分别为0.90±0.04、0.17±0.03、0.54±0.06、0.67±0.03和0.81±0.08,ACAN蛋白表达水平分别为0.85±0.06、0.15±0.02、0.42±0.05、0.58±0.04和0.83±0.06;DKK-1蛋白表达水平分别为0.89±0.05、0.16±0.02、0.39±0.05、0.49±0.03和0.71±0.05。模型组上述指标与空白组比较,高剂量实验组上述指标与模型组比较,抑制药+高剂量实验组上述指标与高剂量实验组、抑制药组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 依托咪酯可能通过Wnt3a/β-catenin通路对IL-1β损伤的人CHON-001软骨细胞发挥保护作用。

非奈利酮对2型糖尿病心肌细胞凋亡的影响

目的探讨非奈利酮对2型糖尿病心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法体外培养HCM心肌细胞,将细胞分为对照组(5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖)、高糖组(33.0 mmol·L^(-1)葡萄糖)、非奈利酮组(33.0 mmol·L^(-1)葡萄糖+500.0 nmol·L^(-1)非奈利酮)和XAV939组(33.0 mmol·L^(-1)葡萄糖+500.0 nmmol·L^(-1)非奈利酮+20.0μmol·L^(-1)SKL2001)。以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测细胞活力,以蛋白质印迹(Western blot)法检测各组细胞相关蛋白表达情况,以5-乙炔基-2-脱氧尿苷(Edu)实验检测各组细胞增殖情况,以流式细胞术检测细胞凋亡和周期进程。结果对照组、高糖组、非奈利酮组和XAV939组细胞无翅型MMTV整合位点家族成员(Wnt)3a(Wnt3a)蛋白表达水平分别为0.27±0.03、1.10±0.07、0.47±0.03、0.95±0.07,Edu阳性细胞率分别为(41.21±2.48)%、(20.99±1.15)%、(39.55±2.69)%、(19.30±1.61)%,凋亡率分别为(3.16±0.21)%、(21.97±1.32)%、(9.81±0.35)%、(21.30±1.14)%,G0/G1比例分别为(50.50±3.52)%、(67.77±5.94)%、(53.68±3.07)%、(65.33±3.30)%,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达水平分别为0.88±0.06、0.36±0.03、0.77±0.05、0.31±0.02,裂解的胱天蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白水平分别为0.27±0.03、1.01±0.03、0.52±0.05、0.93±0.07。以上指标,高糖组与对照组比较、非奈利酮组与高糖组比较、XAV939组与非奈利酮组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论非奈利酮可通过抑制细胞凋亡、促进增殖、改善周期阻滞减轻高糖诱导的心肌细胞损伤,这可能与调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路有关。

水飞蓟宾对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞损伤的影响

目的 探讨水飞蓟宾对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响及其机制。方法 将体外培养的软骨细胞分为对照组、诱导组(以10 ng·mL^(-1)IL-1β诱导处理)和低、中、高剂量实验组(在10 ng·mL^(-1)IL-1β诱导基础上分别以40,80,160μmol·L^(-1)水飞蓟宾处理)。用流式细胞术检测细胞凋亡率,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞中微管相关蛋白1(Beclin-1)、无翅型小鼠乳房肿瘤病毒整合位点1(Wnt1)和β-连环蛋白(β-catenin)表达水平。结果 对照组、诱导组、低剂量实验组、中剂量实验组和高剂量实验组细胞凋亡率分别为(3.24±0.60)%,(31.18±2.51)%,(28.04±2.10)%,(22.03±1.79)%和(17.48±0.69)%;MMP-13水平分别为(21.18±3.09),(84.05±5.12),(75.16±4.15),(59.71±3.31)和(40.43±2.72)μg·L^(-1);TNF-α水平分别为(4.66±0.55),(57.22±3.53),(50.38±2.16),(38.75±2.36)和(15.64±0.73)ng·L^(-1);IL-6水平分别为(7.38±0.69),(68.76±4.73),(60.88±3.21),(49.74±2.86)和(32.35±2.14)ng·L^(-1);Beclin-1蛋白表达水平分别为0.85±0.06,0.26±0.02,0.35±0.03,0.48±0.03和0.61±0.04;Wnt1蛋白表达水平分别为0.26±0.03,0.85±0.06,0.66±0.03,0.45±0.04和0.35±0.03;β-catenin蛋白表达水平分别为0.13±0.02,0.76±0.05,0.66±0.05,0.53±0.04和0.42±0.03。诱导组和对照组相比,各剂量实验组与诱导组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 水飞蓟宾可改善IL-1β诱导的软骨细胞损伤,其作用机制可能与抑制炎症反应和Wnt/β-catenin信号通路活化有关。

异牡荆素对非小细胞性肺癌细胞自我更新和凋亡的影响

目的研究异牡荆素(ISO)对非小细胞性肺癌(NSCLC)细胞的影响和潜在的机制。方法将A549和H1650细胞分别分为空白组、低剂量实验组(4μmol·L^(-1) ISO)和高剂量实验组(16μmol·L^(-1) ISO)。用噻唑蓝法检测NSCLC细胞活性,用肿瘤球形成实验检测NSCLC细胞的细胞球形成率,用Western blot法检测NSCLC细胞凋亡、自我更新、无翅型MMTV整合位点家族/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路相关蛋白的表达水平。结果与空白组比较,低、高剂量实验组中A549和H1650细胞在24,48和72 h的细胞活性均显著降低。低、高剂量实验组和空白组中A549细胞的细胞球形成率分别为(4.18±0.45)%,(2.01±0.67)%和(6.02±0.57)%,切割的半胱氨酸蛋白酶-3相对表达量分别为0.24±0.08,1.25±0.13和0.06±0.07,SRY相关高迁移率族盒蛋白-2相对表达量分别为0.49±0.04,0.25±0.03和1.00±0.09,Kruppel样因子4相对表达量分别为0.68±0.04,0.44±0.03和1.01±0.06,Wnt1相对表达量分别为0.63±0.06,0.28±0.04和1.00±0.06,β-catenin相对表达量分别为0.41±0.05,0.22±0.03和1.01±0.09;与空白组比较,低、高剂量实验组中A549细胞的上述指标的差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。上述3组中H1650细胞的上述指标也呈现一致的现象。结论ISO可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来抑制NSCLC细胞活性和自我更新,并促进其凋亡。