两种人早孕绒毛滋养层细胞的原代培养方法

目的:比较两种不同方法进行人早孕绒毛滋养层细胞原代培养的异同。方法:分别用组织块培养法和3种酶联合消化法(Ⅳ型胶原酶、低浓度胰酶及DNaseⅠ)、Ficoll 400梯度密度离心法对人早孕绒毛滋养层细胞培养。结果:两种方法进行早孕滋养层细胞的培养均获得成功,其生长率比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:组织块培养法简单易行,但细胞数量少,生长缓慢,难以完成后续实验;3酶联合消化、Ficoll 400梯度密度离心法相比较而言,可获得数量更多的活力好、纯度较高的具有不同分化功能的滋养层细胞,为进一步研究其侵袭、增殖能力等生理、病理作用提供了坚实的基础。

人早孕绒毛滋养层细胞的分离纯化及马鞭草对其分泌绒毛膜促性腺激素的影响

从正常妊娠６～８周早期胎盘Ｐｅｒｃｏｌ梯度离心分离出滋养层细胞进行体外培养，观察马鞭草对培养的滋养层细胞形态及绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）分泌功能的影响，探讨了马鞭草抗早孕的细胞学作用机理。结果表明２５，５０ｍｇ／ｍｌ马鞭草乙醇提取液对滋养层细胞ＨＣＧ分泌有明显的抑制作用，给药后２４ｈ即见部分细胞变圆，４８ｈ大多固缩死亡。一定浓度的马鞭草可直接杀伤滋养层细胞，抑制ＨＣＧ的分泌而中止早孕。

人早孕绒毛滋养层细胞的分离纯化及马鞭草抗早孕机理的初步研究

目的 :探讨马鞭草抗早孕的细胞学作用机理。方法 :正常妊娠 6～ 8周早期胎盘 Percoll梯度离心分离出滋养层细胞进行体外培养 ,观察马鞭草对培养的滋养层细胞形态及绒毛膜促性腺激素分泌功能的影响。结果 :2 5、50、mg/ ml马鞭草乙醇提取液对滋养层细胞生长及绒毛膜促性腺激素分泌有明显的抑制作用。结论 :一定浓度的马鞭草可直接杀伤滋养层细胞 。

胰岛素样生长因子系统在人早孕绒毛滋养层细胞中的表达

目的 探讨胰岛素样生长因子系统 (IGFs)在体外培养的人早孕绒毛滋养层细胞中的基因表达及其作用。方法 采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)技术半定量检测体外培养的人早孕绒毛滋养层细胞中IGFs m RNA的表达。结果 体外培养的人早孕绒毛滋养层细胞中可以检测出 IGF- m RNA、IGF- R m RNA、IGFBP- 3m RNA的表达。结论 IGFs可能在早期细胞滋养层的侵入、增殖分化、胎盘形成和胚胎生长发育过程中以自分泌和

米非司酮对早孕绒毛滋养层细胞Bcl-2和caspase-3表达的影响

目的 :探讨米非司酮对人早孕绒毛滋养细胞中Bcl 2和cas pase 3表达的影响及其在滋养细胞凋亡中的作用。方法 :将10 5例自愿要求终止妊娠的早孕妇女随机分成两组 ,即米非司酮流产组 (5 5例 )及人工流产组 (5 0例 )。采用免疫组化染色方法检测早孕妇女的绒毛组织中Bcl 2和caspase 3的表达。结果 :米非司酮组与人流组绒毛滋养细胞中Bcl 2的表达率分别为 5 4 .6 %和 88.0 % ;caspase 3的表达率分别为 89.1%和 4 2 .0 %。米非司酮组与人流组相比较绒毛滋养层细胞Bcl 2呈低表达(P <0 .0 1) ,caspase 3呈高表达 (P <0 .0 1)。结论 :Bcl 2和caspase

低分子肝素对不同氧浓度下早孕绒毛滋养层细胞侵袭力的影响作用

目的:研究低分子肝素(LMWH)对不同氧浓度下早孕绒毛滋养层细胞侵袭力的影响。方法:取妊娠8~10周正常绒毛组织,酶消化法分离人早孕绒毛滋养层细胞,分别置2%和20%O_2分压的细胞培养箱培养。用不同浓度LMWH(0、0.1、5、10IU/ml)处理滋养细胞,观察滋养层细胞侵袭力的改变,检测细胞中HIF-1α、MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-3表达。结果:低氧浓度下,早孕绒毛滋养层细胞的侵袭能力随着LMWH浓度(0,0.1,5IU/ml)升高而增强,但高浓度的LMWH(10IU/ml)对其有抑制作用;随着LMWH浓度增加,HIF-1α和MMP-2表达呈先上升后下降的趋势;TIMP-2、TIMP-3表达改变的趋势与MMP-2相同。正常氧浓度下的滋养层细胞,其侵袭能力未见显著增强,各细胞因子的表达无上调。结论:低氧环境下,一定浓度的LMWH可提高早孕绒毛滋养层细胞的侵袭能力,其发生机制可能是通过诱导、增强滋养层细胞HIF-1α和MMP-2基因表达。

吗啡对人早孕绒毛膜滋养层细胞μ阿片受体mRNA表达的影响

全球性的药物滥用和药物依赖已经成为当前社会最受关注的问题，其中吸毒人数的不断增加，尤其是女性吸毒者的绝对数和相对数大幅度的增加给社会、家庭和个人带来了极大的危害。几乎90％的吸毒女性是处于生育期，吸毒不仅危害自身健康。而且毒品还可以通过胎盘影响胎儿及新生儿，导致胎儿宫内窘迫、窒息，早产儿、新生儿戒断综合征等。

人早孕绒毛组织的体外原代培养和人滋养细胞株的建立

目的:建立快速、有效的绒毛滋养细胞体外原代培养的方法以及建立人滋养细胞株和初步评价。方法:采用胰酶和胶原酶I混合消化法消化绒毛组织,用胰蛋白酶消化传代体外培养,通过光镜、透射电镜和免疫荧光激光共聚焦方法对培养出的细胞进行形态和骨架评价。结果:显微镜下可见细胞呈多边形,细胞平铺生长,有细胞融合后形成的合体滋养层细胞;透射电镜下可见细胞表面的微绒毛丰富;胞质丰富,内质网扩张明显,有丰富的糖原颗粒、髓样小体和明显的脂滴,以及细胞间紧密的桥粒样结构连接;直接免疫荧光双标记染色检测到角蛋白18和波形蛋白均为阳性。结论:采用胰酶和胶原酶I混合消化法可获得较纯的滋养细胞,通过光镜、透射电镜和免疫荧光激光共聚焦检测细胞外形和骨架,确定该体外传至56代的细胞株为滋养细胞株。

survivin(存活素)在早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中的表达

目的:研究早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中survivin(存活素)的组织定位和表达,探讨survivin与妊娠滋养细胞疾病的关系。方法:采用免疫组化SP法检测14例正常早孕绒毛、14例葡萄胎、12例侵蚀性葡萄胎及12例绒癌滋养细胞中survivin的表达。结果:survivin在滋养细胞细胞核及细胞浆的表达强度PU值依下列顺序增加:正常早孕组、葡萄胎组、侵蚀性葡萄胎组及绒癌组,各组间的表达强度差异有统计学意义(P <0 0 5 )。结论:适度survivin是正确完成胚胎细胞有丝分裂和细胞增殖的必要条件。

早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中癌基因表达的研究

目的 :研究癌基因c-myc和N -ras在早孕绒毛及GTD中的表达。方法 :地高辛标记的c -myc、N-ras裸核探针与石腊包埋的 18例早孕绒毛及 5 4例GTD组织进行原位杂交。结果 :c -mycmRNA在早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌中阳性表达率分别为 2 7.8%、4 4 .4 %、5 5 .5 %和 84 .4 %。N -rasmRNA在早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌组织中阳性表达率分别为 83.8%、88.9%、77.8%和 4 4 .4 %。Ⅲ -Ⅳ期GTT中c -myc阳性表达率高于Ⅰ期。c -myc和N -ras在GTT组织中共同表达率为 4 7.2 %。结论 :c-myc与GTD病变的发展及临床分期有关 ,N

瘦素及白血病抑制因子在早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病的表达及意义

目的研究早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中瘦素及白血病抑制因子的组织定位和表达,探讨瘦素及白血病抑制因子与妊娠滋养细胞疾病的关系。方法采用免疫组化S-P法及图像分析仪检测14例正常早孕绒毛、14例葡萄胎、12例侵蚀性葡萄胎及12例绒癌滋养细胞中瘦素及白血病抑制因子的表达。结果瘦素在正常早孕组、葡萄胎组、侵蚀性葡萄胎组及绒癌组滋养层的表达强度PU值分别为17.62±1.32,20.65±2.15,23.81±1.96,27.31±2.14;白血病抑制因子在正常早孕组、葡萄胎组、侵蚀性葡萄胎组及绒癌组滋养层的表达强度PU值分别为14.34±2.05,18.65±2.43,22.56±2.45,28.19±2.01。即瘦素及白血病抑制因子在滋养细胞的表达强度依下列顺序增加:正常早孕组、葡萄胎组、侵蚀性葡萄胎组及绒癌组,各组间的表达强度差异有统计学意义(P<0.05)。结论瘦素及白血病抑制因子表达的增强促进了妊娠滋养细胞疾病中滋养细胞浸润、转移,间接促进妊娠滋养细胞疾病的发展。

TGF-β1对人早孕滋养层细胞细胞周期和凋亡的影响

目的:研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对人早孕滋养层细胞细胞周期和凋亡的影响。方法:用流式细胞术法研究TGF-β1对人早孕滋养层细胞细胞周期和凋亡的影响。结果:随着TGF-β1浓度的增高,早孕滋养层细胞的凋亡逐渐呈浓度依赖性增加,并且高浓度组的凋亡与低浓度相比,凋亡峰明显增大,各浓度组组间比较,差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:TGF-β1能诱导人早孕滋养层细胞的凋亡,从而预防其过度生长而导致恶性病变的发生。

20例人早孕绒毛滋养细胞的体外培养

目的建立快速、有效的绒毛滋养细胞体外培养的方法。方法采用0．25％胰酶和Ⅱ型胶原酶混合消化法消化绒毛组织，用胰蛋白酶消化传代体外培养，通过光镜对培养出的细胞进行形态评价；用细胞角蛋白和波形蛋白单克隆抗体检测细胞纯度。结果联合消化法的细胞生长迅速，接种6～8d可以传代，原代细胞生长时间明显缩短，所得细胞纯度达95％。结论联合消化法是一种较有效的人早孕绒毛滋养细胞培养方法。

早孕绒毛滋养细胞FasL表达异常与自然流产的关系

通过比较正常早孕与自然流产者滋养细胞表面FasL表达 ,进一步从分子免疫学角度探讨自然流产的发病机理。方法 :用特异性的FasL抗体进行免疫组化染色 ,并通过高清晰彩色病理免疫组化测量系统对其定量分析 ,SSPS对两组进行比较。结果 :自然流产组滋养细胞表面FasL表达面积及强度均明显低于正常早孕组 ,两者间差异有显著性意义。结论 :滋养细胞表面FasL表达减少 ,引起母胎间的免疫耐受的破坏 ,是导致自然流产的一重要免疫病因 ,诱导FasL的产生或调节母胎间的免疫耐受将为临床治疗自然流产提供新的方向。

超声诊断剂量与人早孕绒毛细胞凋亡

目的 :检测超声诊断剂量与人早孕绒毛细胞凋亡的关系。材料与方法 :将拟进行人工流产的 2 4例早孕 (45～6 0d)妇女随机分为 4组 :对照组为空白照射组、10min组、2 0min组和 30min组。应用Hp 85 0 0彩色多普勒超声诊断仪 ,对孕囊进行不同时间的持续照射 ,照射后 2 4h取材。用原位末断脱氧核苷酸转移酶标记 (TUNEL)技术检测上述各组绒毛组织凋亡细胞。结果 :超声照射后 10min组绒毛组织凋亡细胞与对照组无差别 ,2 0min组和 30min组凋亡细胞明显增加 ,显著大于对照组和 10min组 (P <0 0 0 1)。结论 :诊断超声持续照射早孕孕囊组织 >10min可引起绒毛滋养层细胞凋亡增加 ,且随照射时间延长而继续增加。

诊断超声照射后人早孕绒毛细胞Fasm RNA FasL mRNA表达的改变

目的 探讨诊断超声与人早孕绒毛Fas/FasLmRNA表达的关系。方法 对拟进行人工流产的 2 4例早孕 (4 5～ 6 0d)妇女随机分为 4组 :Ⅰ组 (对照组 )、Ⅱ组 (10min组 )、Ⅲ组 (2 0min组 )和Ⅳ组 (30min组 )。应用HP 85 0 0彩色多普勒超声诊断仪 ,对孕囊进行不同时间的持续照射 ,照射后 2 4h取材。用原位杂交技术检测上述各组绒毛滋养层细胞Fas/FasLmRNA表达情况。结果 超声照射后 10min组绒毛滋养层细胞Fas/FasLmRNA表达率与对照组差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,2 0min组和 30min组滋养层细胞表达率明显增加 ,显著大于对照组和10min组 (P <0 0 0 1)。结论 诊断超声持续照射早孕孕囊组织 >10min可引起绒毛滋养层细胞Fas/FasLmRNA表达率增加 。

米非司酮促进早孕绒毛及蜕膜细胞凋亡的研究

目的 探讨绒毛及蜕膜细胞凋亡及细胞周期动力学的变化与药物终止早孕的关系。方法 对米非司酮配伍米索前列醇终止早孕 16例 (米非司酮组 )、负压吸引终止早孕 16例 (对照组 )的绒毛与蜕膜 ,采用流式细胞技术进行DNA和细胞周期动力学分析。结果 米非司酮组和对照组绒毛凋亡水平分别为 (8.5 2± 4.12 ) %、(4 .2 4± 3.93) % (P <0 .0 5 ) ,蜕膜凋亡水平分别为 (14.83± 8.70 ) %、(6 .2 7± 5 .80 ) % (P <0 .0 1)。米非司酮组绒毛滋养层G0 、G1期细胞明显增加 (P <0 .0 1) ,G2 、M期细胞明显减少 (P <0 .0 1) ,细胞增生指数明显降低 (P <0 .0 1)。结论 米非司酮通过诱导绒毛和蜕膜细胞凋亡终止早孕 ,可能机制为阻止滋养层细胞从G0 、G1期向S期转化 ,从而使其增生与凋亡失衡。

诊断用经阴道彩色多普勒超声辐照对人早孕绒毛细胞凋亡的影响

目的探讨诊断用经阴道彩色多普勒超声（TVCD）辐照对人早孕绒毛细胞早期凋亡的影响，以期为TVCD的产科安全应用提供新的佐证。方法将拟行人工流产的25例健康早孕妇女（孕40-60d）按TVCD辐照时间的不同随机分为5组：对照组、照射5min组、10min组、20min组、30min组，每组5例。应用TVCD，按不同时间固定持续照射孕囊。照射后24h取绒毛，采用流式细胞仪检测绒毛细胞早期凋亡的水平。结果（1）流式细胞仪直方图显示：对照组偶见散在的早期凋亡细胞；5min组及10min组出现早期凋亡细胞；20min组及30min组的早期凋亡细胞明显增多，以30min组最为明显；（2）早期凋亡率比较：照射各组与对照组比较，均有显著性差异（P均〈0.01），照射10min组与5min组之间差异有显著性（P〈0.01），照射30min组与10min组之间差异有显著性（P〈0.01）。结论TVCD辐照可引起人早孕绒毛细胞凋亡增多，且绒毛细胞的早期凋亡率会随着辐照时间的延长而增高。

持续阴道超声辐射后人胚早孕绒毛细胞超微结构的变化研究

目的探究持续阴道超声辐射后人胚早孕绒毛细胞超微结构的变化。方法选取我院2010年9月至2012年3月期间进行人流的早孕患者80例，将其均分为两组，试验组患者阴道超声照射10min，而对照组患者则照射5min，然后在照射后24-30h进行人流并取绒毛组织进行检测，比较两组患者照射后绒毛组织DNA及其超微结构的变化情况。结果经过检测得到，试验组患者的绒毛组织单链DNA量为（0．19±0．06）μg／μl，双链DNA量为（0．15±0．09）μg／μl，明显低于对照组患者的（0．23±0．07）μg／μl和（0．19±0．07）μg／μl，差异均具有统计学意义（P〈0．05），试验组患者的绒毛组织超微结构发生异常者40．00％，对照组为10．00％，差异也具有统计学意义（P〈0．05）。结论降低患者进行阴道超声辐射的时间可以减少患者绒毛细胞超微结构的改变。