急性氧化应激状态下人晶状体上皮细胞株SRA01/04中衰老标记蛋白30、Caspase-3、Ca2+-ATP表达的变化

目的:探讨在急性氧化应激状态下人晶状体上皮细胞株SRA01/04内衰老标记蛋白30(SMP30)、Caspase-3、Ca^2+-ATP表达的变化。方法:通过慢病毒转染建立SMP30过表达(OE)组、过表达空载对照(NC-OE)组、SMP30沉默(KD)组及沉默空载(NC-KD)组SRA01/04细胞,RT-PCR和Western blotting检测SMP30含量鉴定细胞是否转染成功;用300μmol/L H2O2 作用2 h,构建急性氧化应激状态时,PCR检测各组细胞SMP30基因的表达情况,Western blotting检测各组细胞SMP30、Caspase-30和Ca^2+-ATP蛋白的表达量。结果:在正常状态时,OE组SMP30基因及其蛋白表达量高于NC-OE组(P<0.05),KD组的SMP30基因及其蛋白表达量低于NC-KD组(P<0.05)。OE组及KD组细胞SMP30基因表达量均出现增加(P<0.05),与正常状态时相比,急性氧化应激状态时OE组细胞SMP30蛋白表达上调(P<0.05);正常状态时,OE组Caspase-3蛋白表达量低于NC-OE组,KD组Caspase-3蛋白表达量高于NC-KD组(P<0.05)。急性氧化应激状态时,OE组Caspase-3蛋白表达量低于NC-OE组,KD组Caspase-3蛋白表达量低于NC-KD组(P<0.05)。在急性氧化应激状态时OE组Caspase-3蛋白表达量低于正常状态时;KD组的Caspase-3蛋白表达量高于正常状态时KD组(P<0.05)。在正常状态时,OE组Ca^2+-ATP蛋白表达量高于NC-OE组,KD组Ca^2+-ATP蛋白表达量低于NC-KD组(P<0.05)。在急性氧化应激状态时,OE组Ca^2+-ATP蛋白表达量高于NC-OE组,KD组Ca^2+-ATP蛋白表达量低于NC-KD组(P<0.05)。在急性氧化应激状态时OE组的Ca^2+-ATP蛋白表达量高于正常状态时(P<0.05)。结论:在急性氧化应激状态时,SMP30含量出现反应性增加,过表达SMP30可能对人晶状体上皮细胞株SRA01/04具有抗氧化、抗凋亡、增加钙调节活性的作用。

d-δ-生育酚抑制人晶状体上皮SRA细胞生长及相关机制

目的:探究d-δ-生育酚对人晶状体上皮SRA细胞生长的影响以及相关分子机制,为d-δ-生育酚用于治疗与预防后发性白内障提供实验依据。方法:实验分为6组,即空白对照组及实验组,即5个不同浓度的d-δ-生育酚(40、60、80、100、120μmol/L),噻唑兰(MTT)法检测各组细胞的增殖抑制率。在倒置显微镜下观察人晶状体上皮SRA细胞形态。流式细胞仪检测细胞周期,蛋白印迹法(Western blot)检测bcl-2、bax、Cyclin D1、P21蛋白表达。结果:随着d-δ-生育酚的浓度逐渐增加,SRA细胞较对照组细胞明显减少;作用时间的延长,SRA细胞增殖抑制率逐渐增高(P<0.05);S期细胞所占比例与对照组比较逐渐增高,细胞被阻滞于S期(P<0.05);d-δ-生育酚干预人晶状体上皮SRA细胞48h后,人晶状体上皮SRA细胞P21、Cyclin D1和bcl-2表达量逐渐降低,bax表达量逐渐增高(P<0.01)。结论:d-δ-生育酚能明显抑制人晶状体上皮SRA细胞的增殖,阻滞细胞周期于S期。其机制可能是通过抑制bcl-2、P21、Cyclin D1的表达,诱导bax的表达实现的。

磷酸肌苷钠对人晶状体上皮细胞的保护作用

目的考察磷酸肌苷钠(sodium inosinmonophosphate,IMP-NA)对过氧化氢(H2O2)诱导的人晶状体上皮细胞SRA01/04(human lens epithelial cells SRA01/04,HLEC SRA01/04)损伤的保护作用,为IMP-NA治疗白内障疾病提供科学依据。方法采用MTT法建立H2O2诱导的HLECSRA01/04氧化损伤模型,根据相应量-效曲线确定H2O2模型的最佳作用浓度及作用时间,同时进行一般形态学观察。考察IMP-NA对HLEC SRA01/04的保护作用。酶联免疫法检测IMP-NA调控凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达情况。结果 H2O2损伤模型最优条件下为最佳作用浓度200μmol.L-1、作用时间24 h,与H2O2处理组比较,浓度为0.1、1.0、10.0、100.0μmol.L-1IMP-NA可显著提高HLEC SRA01/04的存活率(P<0.05)。酶联免疫结果显示,IMP-NA在浓度为1.0～100.0μmol.L-1内显著上调Bcl-2基因的表达、下调Bax基因的表达(P<0.01)。结论 IMP-NA对H2O2诱导的HLEC SRA01/04氧化损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与调控凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达情况有关。

松果菊苷固体脂质纳米粒的表征及体外细胞摄取评价

[目的]对本实验室前期处方优化的松果菊苷固体脂质纳米粒(ECH-SLN)的物理性质和体外细胞摄取情况进行评价,为今后眼部制剂的改进奠定基础。[方法]根据本实验室前期优化的处方,采用乳化-固化法制备ECH-SLN,运用差示扫描量热法(DSC)及X射线衍射法(XRD)表征其物理性质,并选取人角膜上皮HCEpiC细胞与人晶状体上皮SRA01/04细胞,对罗丹明123固体脂质纳米粒(Rhodamine123-SLN,Rh123-SLN)进行体外细胞毒性评价及细胞摄取研究。[结果]DSC结果显示仅松果菊苷和物理混合物(空白SLN∶松果菊苷=5∶1)在150℃出现松果菊苷的熔化吸热特征峰,空白SLN、ECH-SLN和物理混合物在110℃和230℃均出现SLN的两个熔化吸热特征峰;XRD结果显示松果菊苷和物理混合物在20°时出现明显的松果菊苷特征峰,空白SLN,ECH-SLN和物理混合物在20°~25°范围均显示SLN的范围特征峰;结果均表明松果菊苷作为药物以分子分散状态被包裹在固体脂质纳米粒(SLN)中;细胞活力影响实验结果显示Rh123-SLN浓度为5.13μg/mL和10.25μg/mL时对两种细胞均无明显毒性,与对照组相比无显著性差异;细胞摄取实验结果表明Rh123溶液不能被细胞所摄取,而Rh123-SLN的细胞摄取量与药物浓度和孵育时间呈正相关。[结论]ECH-SLN能够将松果菊苷递送到眼细胞,这可能为氧化性白内障的治疗提供一种有效的药物递送系统。