猫人参注射液对两种肝癌细胞及正常肝细胞的体外作用观察

目的:观察猫人参注射液体外对两种肝癌细胞株及正常肝细胞增殖的影响。方法:将人肝癌BEL-7402细胞株、小鼠肝癌H22细胞株和人正常肝细胞L-02细胞株进行体外培养,采用MTT法测定不同浓度、不同时间猫人参注射液的体外抑制作用。结果:猫人参注射液对人肝癌BEL-7402细胞和小鼠肝癌H22细胞具有较强抑制作用,对L-02细胞在较低浓度下抑制作用不明显。结论:猫人参注射液在体外对人肝癌BEL-7402细胞和小鼠肝癌H22细胞具有较强的抑制作用,而在较低浓度下对于L-02细胞则无明显抑制作用。

伏马菌素B_1对人正常食管上皮细胞细胞周期相关基因mRNA表达的影响

本研究采用体外实验,分离鉴定人正常食管上皮细胞,用RT-PCR方法测定伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)对细胞周期相关基因Cyclin D1、Cyclin E、P16、P21、P27mRNA表达的影响。结果表明:FB1作用人正常食管上皮细胞后可以在转录水平上影响Cyclin D1、Cyclin E、P16、P21、P27基因的表达,导致Cyclin D1mRNA高表达,Cyclin E、P16、P21、P27基因mRNA低表达。提示,细胞周期相关基因的异常表达与癌症密切相关,该研究从体外实验进一步证实FB1可能与人类食管癌的发生有关。

山柰素与熊果苷对体外培养人正常黑素细胞的作用

目的比较山柰素与熊果苷对体外培养人正常黑素细胞增殖、黑素合成及其酪氨酸酶活性的影响,为探索色素沉着性皮肤病的发病机制以及筛选新的治疗药物提供理论依据。方法以不同浓度(1～100μmol/L)山柰素与熊果苷干预体外培养的人正常黑素细胞,比较两者对黑素细胞的黑素含量、细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响。结果对于黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量的抑制作用,山柰素在各个浓度均优于熊果苷,差异有统计学意义(P<0.05),山柰素对细胞增殖抑制率无明显影响,而熊果苷在各浓度对细胞增殖抑制作用显著,且随其浓度增加,抑制率逐渐增强。结论山柰素对黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的抑制作用强于熊果苷,并对黑素细胞的增殖及形态无明显的负面影响,是一种有良好应用前景的酪氨酸酶抑制剂。

紫薯黄酮对酒精诱导人正常肝细胞氧化损伤保护作用

目的：研究紫薯黄酮对酒精损伤人正常肝细胞（HL7702）的保护作用。方法：分别以酒精培养（摩尔浓度100、200、300、400、500、600、700、800 mm）HL7702,CCK-8检测细胞的生存率以筛查复制模型的最佳浓度以及考察紫薯黄酮对细胞的毒性的影响。并使用试剂盒比色法检测各组细胞超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢（H2O2）及总抗氧化能力（T-AOC）水平。采用统计分析软件SPSS17.0进行统计学分析。结果：建立酒精诱导损伤模型最佳浓度为500 mm;紫薯黄酮最适宜的给药范围是100~800μg/m L;200、400、600、800μg/m L的紫薯黄酮可以剂量依赖性的升高酒精损伤模型中HL7702的存活率,并提高HL7702细胞内的T-AOC、SOD、CAT及GSH-PX水平,同时降低H2O2的生成。结论：紫薯黄酮能够保护酒损伤的HL7702,其保护机制与增强T-AOC、SOD、CAT及GSH-PX活性,降低H2O2含量有关。

去甲肾上腺素对人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞L-02增殖、凋亡的影响

目的观察去甲肾上腺素(NE)对人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞L-02增殖、凋亡的影响。方法体外培养HepG2细胞和L-02细胞,分别加入不同浓度NE处理,继续培养,采用MTT法观察细胞增殖情况,HE染色和Annexin V-FITC/PI染色法观察细胞形态学变化,流式细胞术观察细胞凋亡情况。结果经0.1、1、10、50μmol/L NE处理24、48 h,HepG2细胞OD值显著下降(P均<0.05),L-02细胞OD值无明显变化。10μmol/L NE作用于HepG2细胞可见典型的凋亡形态学改变,胞质收缩、深染,核染色质浓缩;L-02细胞在NE作用前后形态学均无明显改变。HepG2细胞加入10μmol/L NE后部分细胞呈绿色(为早期凋亡表现),加入50μmol/L NE后部分细胞膜呈绿色,细胞核呈红色(为晚期凋亡表现);L-02细胞均未显示有荧光。0.1、1、10μmol/L NE作用于HepG2细胞24 h后,其凋亡率均显著高于对照组(0μmol/L NE),且呈剂量依赖关系(P均<0.05);而上述浓度NE作用于L-02细胞24 h后,其凋亡率较对照组先增高后降低(P均<0.05)。结论 NE可以抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,而对L-02细胞增殖和凋亡没有影响,提示其在特定类型肝癌临床治疗中具有潜在价值。

纳米氧化锌对人正常肝细胞HL-7702的毒性作用研究

[目的]研究食品添加剂纳米氧化锌对人正常肝细胞HL-7702的毒性作用。[方法]采用不同浓度(5、10、25、50、100、250μg/ml)的纳米氧化锌对HL-7702细胞进行染毒;光学显微镜下观察细胞的形态学变化;采用MTT法检测纳米氧化锌对HL-7702细胞生长活性的影响;应用荧光探针活性氧检测技术检测细胞内活性氧(ROS)的生成情况。[结果]纳米氧化锌可引起HL-7702细胞形态变化;MTT检测显示,纳米氧化锌对HL-7702细胞的生长活性具有明显的抑制作用;荧光探针活性氧检测发现,染毒后HL-7702细胞内ROS的生成量增加。[结论]纳米氧化锌作为一种新型锌源,建议控制其添加量或使用量。

5种常用中药注射剂对人正常肝细胞L-02的影响

目的 :观察 5种中药注射剂 (榄香烯、鸦胆子、华蟾素、康莱特、肝力 )体外对人正常肝细胞L 0 2增殖的影响。方法 :将人正常肝细胞L 0 2进行体外培养 ,采用MTT法测定不同浓度、不同时间 5种中药注射剂的体外抑制作用。结果 :榄香稀、鸦胆子对L 0 2细胞具有较强的抑制作用 ,康莱特具有一定的抑制作用 ,而肝力抑制作用不明显 ,华蟾素则具有明显的时间依赖性。结论 :榄香烯和鸦胆子在体外对L 0 2细胞具有较强的抑制作用 ,康莱特抑制作用较弱 ,肝力则无明显抑制作用 。

双黄连注射剂及其与头孢拉定合用对人正常肝细胞的毒性作用研究

目的:研究双黄连注射剂及其与头孢拉定联合应用对人正常HL-7702肝细胞的毒性作用。方法:不同浓度的双黄连注射剂(0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mg/mL)及其与头孢拉定(0.046mg/mL)联合应用处理HL-7702肝细胞,四甲基噻唑蓝比色法(MTT法)测定含药培养液对细胞生长抑制率的影响,计算IC50,并测定药物作用后培养上清液中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性。同时采用细胞爬片法,光学显微镜下观察细胞形态的变化。结果:MTT法实验中细胞生长抑制率与双黄连注射液剂量成正相关性,IC50为1.185mg/mL;头孢拉定联合应用可增加双黄连注射液的肝细胞毒性,IC50为0.442mg/mL。高浓度双黄连组及其与头孢拉定合用组培养上清液中AST、ALT和LDH活性显著升高,细胞形态发生明显改变,细胞出现大量的凋亡与坏死。结论:高浓度的双黄连注射液对体外培养的肝细胞有一定损伤,且与头孢拉定联合应用可增加肝细胞毒性。

去整合素基质金属蛋白酶19抑制人正常胎盘来源滋养层细胞的侵润能力

去整合素基质金属蛋白酶19(ADAM-19)是新近发现的ADAMs家族成员,在胎盘组织中有较高水平的表达,但其在胎盘发生过程和滋养层细胞侵润中的功能还是未知的.我们以人正常胎盘来源的细胞滋养层细胞(NPC)为体外模型,利用基因转染、RT-PCR、蛋白质印迹、免疫组织化学及细胞侵润分析等手段,证实ADAM-19在人胎盘组织中有特异表达,存在于多种滋养层细胞中;转化生长因子β1(TGF-β1)可以显著上调NPC细胞中ADAM-19的表达,呈现剂量依赖性;过表达hADAM-19可使NPC细胞中MMP-9的mRNA和蛋白质表达下调,并降低细胞的侵润能力.研究结果表明,人滋养层细胞中存在ADAM-19表达的旁分泌调节机制,而ADAM-19在调节滋养层细胞侵润中发挥一定作用.这一结果为阐明ADAM-19在胎盘发生中的功能提供了新的科学资料.

MicroRNA-126对人正常肝细胞株脂代谢的影响

目的探讨循环中MicroRNA-126在1型和2型糖尿病影响肝细胞的糖代谢及对正常肝细胞系Chang liver细胞脂代谢的影响。方法以人正常肝细胞系为对象,设置MicroRNA-126 mimics转染组、MicroRNA-126 inhibitor转染组、阴性对照组、阴性对照抑制组、转染试剂组与正常对照组。通过转染MicroRNA-126类似物及拮抗物,改变MicroRNA-126表达。RT-PCR法检测各组细胞中MicroRNA-126的表达量;转染MicroRNA序列48 h后,继而胰岛素作用12 h,甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)定量检测试剂盒检测每组肝细胞内TG和TC的含量。结果 RT-PCR结果显示MicroRNA-126 mimics转染组较正常对照组的MicroRNA-126表达量显著增加(t=26.18,P<0.05),其余各组较正常对照组的MicroRNA-126表达量则无显著差别(P=0.609)。胰岛素作用后,MicroRNA-126 mimics转染组、MicroRNA-126 inhibitor转染组、阴性对照组、阴性对照抑制组、转染试剂组与正常对照组相比,TG和TC含量无显著差别(F=1.074,0.436,均P>0.05)。结论 MicroRNA-126对正常肝细胞株TG及TC的代谢可能没有影响。

Raft培养可诱导人正常上皮细胞分化

人的正常上皮细胞在一般的体外培养情况下很难分化成类似于机体的上皮样结构。为了得到上皮样结构进行相关研究 ,近年来 ,国外建立了Raft(船式 )培养方法。本文在长期从事细胞培养的工作中 ,摸索出了适合国内一般实验室条件的Raft细胞培养操作方案 ,模拟体内人皮肤结构的分化层次 ,以纤维细胞与胶原作为混合基质 (作为上皮细胞的滋养物 ) ,同时加入一些生长因子、激素和必需的蛋白等成分。将纤维细胞、胶原和添加成分做为基层过夜培养 ,次日将培养好的上皮细胞种到上面 ,过夜培养后即为“skinequivalent”(皮肤等价物 ) ,将“皮肤等价物”移到一种网状金属架上以使细胞在气—液状态下培养 ,在这种条件下 ,培养中的上皮细胞与体内上皮细胞自然生长的状态、环境非常类似 ,在体外导致上皮细胞分化成清晰可见的层次。此项技术在临床治疗烧伤以及其它皮肤损伤的疾病方面有潜在的应用价值 ,也为研究皮肤的正常生理功能以及癌症的发生、发展以及治疗提供了一种模型。

电离辐射诱导人正常角化细胞衰老死亡的作用机制研究

目的研究电离辐射对人正常角化细胞的影响,探讨放射治疗引起口腔黏膜炎的可能作用机制。方法原代培养正常人角化细胞在5 Gy辐射后,SAβ-Gal染色法检测细胞衰老情况,CM-H2DCF-DH染色法检测细胞活性氧产生情况,实时荧光定量PCR检测氧化酶基因表达情况,γ-H2AX免疫荧光染色检测细胞DNA修复能力。结果电离辐射可引起人正常角化细胞衰老死亡,细胞内活性氧大量产生,氧化酶基因表达明显增高,细胞DNA双链断裂。结论电离辐射引起的正常角化细胞衰老死亡与活性氧产生和DNA损伤有关,这可能是放射治疗引起口腔黏膜炎的作用机制之一。

蚓激酶对正常与软脂酸诱导的人肝细胞增殖的影响

目的:探讨不同浓度蚓激酶(EFE)在体外对LO2细胞株(人正常肝细胞)及软脂酸(PA)诱导的LO2细胞增殖的影响及EFE的最佳作用浓度。方法:用不同浓度(100 u/m L、200 u/m L、400 u/m L、600 u/m L、800 u/m L、1 000 u/m L)EFE作用于LO2细胞,分别在作用6 h、12 h、24 h,通过MTT法检测各组细胞的OD值;用20μg/m L的PA作用LO2细胞24 h,然后用不同浓度(100 u/m L、200 u/m L、400 u/m L、600 u/m L、800 u/m L、1 000 u/m L)的EFE进行干预,并于6 h、12 h、24 h检测细胞增殖情况。结果:200 u/m L、400 u/m L的EFE可促进LO2细胞的增殖,但无统计学意义,高浓度(800 u/m L、1 000 u/m L)的EFE能明显抑制LO2细胞的增殖(P<0.05),且其抑制作用随着时间的延长而增强;低浓度(100 u/m L)的EFE可促进经PA诱导的LO2细胞的增殖,其作用效果显著(P<0.05);200 u/m L、400U/m L的EFE对经PA诱导的LO2细胞的促进作用极显著(P<0.01)。结论:EFE能缓解PA诱导的细胞损伤,对PA诱导的LO2细胞具有保护作用,且其最佳作用浓度为400 u/m L。

人正常上皮细胞的原代培养

传统的人正常上皮细胞原代培养方法存在培养率低、培养出的细胞活性差、操作繁琐等缺点,为了解决这些问题,近年来国内外的众多研究者对人正常上皮细胞的原代培养过程进行了大量研究和不断改进。笔者主要综述人正常上皮细胞分离纯化的一些方法(如组织块分离法、酶消化分离法、机械刷取法、红细胞裂解法、Percoll分层液密度梯度分离法等)以及培养传代中可应用到的一些方法(如无血清培养基联合低浓度血清培养基培养法、鼠尾胶原包被法、玻璃培养瓶联合塑料培养皿培养法);其次阐述了人正常上皮细胞的生物学特性及免疫细胞化学染色法、台盼蓝拒染法等生物学性状检测的方法,并且对培养中无菌操作、培养时和分离时细胞外环境的条件、差速贴壁的次数、添加剂的选择与用量等影响因素作了归纳。

脂多糖对正常人肝内胆管上皮细胞TLR4-NF-кB通路的影响

目的探讨脂多糖(LPS)对正常人肝内胆管上皮细胞(Hi BECs)中TLR4-NF-кB通路的影响。方法 Hi BECs常规细胞培养后,加入不同浓度的LPS(0.1、1、4、8、10μg/m L),刺激不同时间(3、6、9、12、24 h),用Realtime RT-PCR分析细胞内TLR4和NF-κB mRNA表达水平。结果 LPS刺激Hi BECs后TLR4和NF-κB mRNA表达水平均增加,Hi BECs在受到LPS(4μg/m L)刺激后TLR4和NF-κB mRNA表达水平随时间延长而增加,于6小时达高峰,之后下降。以相同时间(6 h)刺激Hi BECs后,TLR4和NF-κB mRNA表达水平随LPS浓度增高而增加,LPS浓度为4μg/m L时达高峰,之后下降。结论 LPS可以激活Hi BECs中的TLR4-NF-кB通路,并且有时效和量效依赖关系。

D-半乳糖引起人正常二倍体细胞衰老的机制

目的 研究D-半乳糖处理后引起人正常二倍体细胞衰老的机制.方法 MTT法检测细胞存活率,衰老相关的β-半乳糖苷酶染色鉴定衰老细胞,流式细胞术检测细胞内活性氧自由基水平,免疫印迹法检测衰老相关蛋白的表达.结果 D-半乳糖处理人胚胎肺细胞和肝细胞,均能抑制细胞的增殖.被处理的细胞衰老相关的β-半乳糖苷酶染为蓝色,细胞内活性氧自由基水平明显升高,衰老信号通路相关蛋白p53、p21、caviolin-1的表达均升高.结论 D-半乳糖引起人正常二倍体细胞出现典型的细胞衰老表型,可以作为衰老的可靠模型.

ERK在黑素瘤细胞和人正常黑色素细胞中的表达

目的:研究ERK1/2和P-ERK1/2在人正常黑色素细胞和黑素瘤细胞A375中表达强度的差异,并分析其意义。方法:从健康青年人阴茎包皮中分离并培养原代黑色素细胞;传代培养黑素瘤细胞A375;Western-blot检测两种细胞中ERK1/2和P-ERK1/2的表达强度,并进行统计比较。结果:ERK1/2、P-ERK1/2在黑素瘤细胞A375的表达强度均明显高于人正常黑色素细胞,差异均具有统计学意义(t值分别为17.75、104.39,P值均<0.01)。结论:黑素瘤的发生、发展可能与MAPK/ERK通路有关。

玉米赤霉烯酮对人正常肝细胞(LO_2)和人胚肾细胞(HEK293)的毒性作用研究

以体外培养的人正常肝细胞(LO2)和人胚肾细胞(HEK293)为模板,用MTT比色法研究了玉米赤霉烯酮对以上两种细胞株的毒性作用,结果表明,在所测浓度范围内,玉米赤霉烯酮对这两种细胞的抑制率随其作用浓度的增加而增强,而其作用浓度到达一定程度时,玉米赤霉烯酮对这两种细胞的抑制率保持在一定的范围内不再增加。实验结果证明在2.50μg/mL和1.25μg/mL的最高浓度下,玉米赤霉烯酮对人正常肝细胞(LO2)和人胚肾细胞(HEK293)的抑制率分别为86.61%和67.06%,可见其肝毒性和肾毒性明显。

车前草黄酮提取优化及其对过氧化氢损伤肝细胞的保护作用

目的通过响应面法优化富含车前子苷的车前草黄酮提取工艺,并探究车前草黄酮对过氧化氢(H_(2)O_(2))损伤的L02细胞的保护作用及其作用机制。方法通过单因素研究乙醇浓度、提取温度、液料比对车前草黄酮得率及其中车前子苷转移率的影响,在此基础上使用Central-Composite中心组合试验设计和响应面分析法筛选出车前草黄酮提取得率最高,车前子苷转移率最大的提取条件。通过测定该车前草黄酮对过氧化氢诱导的人正常肝细胞L02存活率、细胞凋亡、线粒体膜电位的影响,及其对L02细胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化物歧化酶(SOD)含量,HO-1、Nrf2、SOD蛋白表达量的影响来探究车前草黄酮对过氧化氢损伤的L02细胞的保护作用。结果研究结果表明,提取温度80℃、乙醇浓度65%、液料比为15∶1时,提取得到的车前草黄酮得率和车前子苷转移率均最大,分别为1.82%和35.01%。该条件下提取得到的车前草黄酮在25~100μg·mL^(-1)内可明显降低过氧化氢损伤的L02细胞的凋亡率(P<0.001),降低其线粒体膜电位损伤程度(P<0.001),增加细胞内SOD和GSH的表达量(P<0.001),降低细胞中MDA含量(P<0.01,P<0.001)。此外,该车前草黄酮可以调节过氧化氢损伤的L02细胞中HO-1、Nrf2、SOD的表达量,降低过氧化氢损伤肝细胞中HO-1、Nrf2蛋白表达水平,并增加细胞中SOD蛋白的表达量(P<0.05,P<0.01)。结论使用响应面法筛选出的车前草黄酮提取工艺操作简便,关键有效成分车前子苷的含量丰富,可为车前草黄酮的实际生产提供参考。该方法提取得到的车前草黄酮可降低过氧化氢损伤的肝细胞的氧化应激水平,对L02细胞具有一定的氧化损伤保护作用,研究结果可以为车前草黄酮作为护肝保健品的开发应用奠定基础。

亚硫酸钠暴露对人正常肝细胞自噬的影响及其作用机制

目的探讨亚硫酸钠(Na_(2)SO_(3))暴露对人正常肝细胞自噬的影响及其作用机制。方法人正常肝细胞HL-7702分别暴露于含10%胎牛血清的DMEM培养基(阴性对照组)、0.2%DMSO(溶剂对照组)、Na_(2)SO_(3)暴露组(0.1、1、2.5、5 mmol/L)和20 mmol/L CCl_(4)(阳性对照组)2 h、48 h。采用CCK-8法检测不同浓度Na_(2)SO_(3)暴露2 h、48 h后各组细胞存活率;免疫荧光法检测Na_(2)SO_(3)各浓度暴露组2 h、48 h自噬相关蛋白LC3B表达水平;Western blotting检测Na_(2)SO_(3)各浓度暴露组2 h、48 h自噬相关蛋白LC3B、p62和AMPK,细胞凋亡相关蛋白caspase-3表达水平;荧光素酶化学发光法测定HL-7702细胞内Na_(2)SO_(3)各浓度暴露组2 h、48 h ATP含量。结果与阴性对照组比较,1、2.5、5 mmol/L Na_(2)SO_(3)暴露组2 h、48 h细胞存活率随Na_(2)SO_(3)浓度的升高而降低(P<0.05);阳性对照组细胞存活率也明显下降(P<0.05)。与阴性对照组比较,2.5 mmol/L、5 mmol/L Na_(2)SO_(3)暴露组和阳性对照组在48 h时,HL-7702细胞中LC3B免疫荧光强度明显减弱。与阴性对照组比较,HL-7702细胞中LC3B-Ⅱ、p62蛋白在48 h 5 mmol/L Na_(2)SO_(3)暴露组表达显著降低(P<0.05);活化的caspase-3蛋白在48 h 1、2.5、5 mmol/L Na_(2)SO_(3)暴露组表达升高(P<0.05)。与阴性对照组比较,暴露2 h、48 h时0.1、1、2.5、5 mmol/L Na_(2)SO_(3)暴露组HL-7702细胞中ATP含量显著升高(P<0.05)。结论高浓度Na_(2)SO_(3)(5 mmol/L)可能抑制人正常肝细胞自噬而致细胞损伤,其机制可能是通过降低LC3B和p62蛋白表达来实现的。