MicroRNA-126对人正常肝细胞株脂代谢的影响

目的探讨循环中MicroRNA-126在1型和2型糖尿病影响肝细胞的糖代谢及对正常肝细胞系Chang liver细胞脂代谢的影响。方法以人正常肝细胞系为对象,设置MicroRNA-126 mimics转染组、MicroRNA-126 inhibitor转染组、阴性对照组、阴性对照抑制组、转染试剂组与正常对照组。通过转染MicroRNA-126类似物及拮抗物,改变MicroRNA-126表达。RT-PCR法检测各组细胞中MicroRNA-126的表达量;转染MicroRNA序列48 h后,继而胰岛素作用12 h,甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)定量检测试剂盒检测每组肝细胞内TG和TC的含量。结果 RT-PCR结果显示MicroRNA-126 mimics转染组较正常对照组的MicroRNA-126表达量显著增加(t=26.18,P<0.05),其余各组较正常对照组的MicroRNA-126表达量则无显著差别(P=0.609)。胰岛素作用后,MicroRNA-126 mimics转染组、MicroRNA-126 inhibitor转染组、阴性对照组、阴性对照抑制组、转染试剂组与正常对照组相比,TG和TC含量无显著差别(F=1.074,0.436,均P>0.05)。结论 MicroRNA-126对正常肝细胞株TG及TC的代谢可能没有影响。

MicroRNA126对人正常肝细胞株葡萄糖代谢的影响

旨在研究microRNA126过表达时人正常肝细胞株葡萄糖代谢的改变。体外培养chang liver细胞系,优化转染条件确定核苷酸序列的转染浓度后,分别转染microRNA126的类似物、抑制物及相应的对照序列。实时荧光定量PCR测定microRNA126相对表达量以检测细胞转染效率。转染48 h后,加入100 nmol/L胰岛素和对应底物处理2 h,检测各组葡萄糖利用率、糖原合成量、糖异生以及糖酵解指标。结果显示实时荧光定量PCR测定microRNA126类似物组microRNA126相对表达量明显高于其他各组（ P〈0.05）。 microRNA126类似物组与其他各组相比,人正常肝细胞葡萄糖利用率下降,糖原合成量减少,糖异生增强,乳酸生成量减少,丙酮酸激酶活力下降（均P〈0.05）。 microRNA126在肝细胞过表达时,可影响细胞的葡萄糖代谢,可能增加肝糖输出。

纳米锰锌铁氧体对肝细胞L-02的细胞毒性

目的研究纳米锰锌铁氧体对正常人肝细胞株(L-02)的体外毒性。方法使用透射电镜(TEM)以及X射线衍射仪(XRD)对纳米锰锌铁氧体进行表征,采用噻唑蓝实验(MTT比色法)检测M0.5Zn0.5Fe2O4纳米材料不同浓度(6.25、25、50、100、200、400和800μg/ml)以及不同染毒时间24、48和72 h对L-02细胞活性的影响,观察染毒48 h后细胞形态的改变并检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率。结果纳米Mn0.5Zn0.5Fe2O4为粒径大约15 nm左右的圆形或椭圆形尖晶石型锰锌铁氧体。L-02细胞的生长活性随着Mn0.5 Zn0.5 Fe2O4浓度的升高和染毒时间的延长而下降。各剂量组细胞活力在染毒48 h后趋于平稳,当纳米颗粒浓度达到200μg/ml时,细胞的存活率明显低于对照组(P<0.01)。与对照组相比,当浓度达到100μg/ml时,染毒48 h的L-02细胞形态发生改变,培养液上清中LDH活性明显升高(P<0.05)。结论随着浓度的增加和时间的延长纳米锰锌铁氧体对L-02细胞毒性增加,破坏细胞膜完整性可能是锰锌铁氧体纳米颗粒造成细胞损伤的途径之一。

登革热病毒SCID-LO2人鼠嵌合模型的建立与评价

目的构建登革热病毒(DENV)感染的小动物模型,为阐明其致病机制提供实验材料。方法向严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠腹腔内接种人正常肝细胞(LO2)构建"人鼠嵌合体"动物模型,进而腹腔注射DENV,通过检查病毒在体内分布和主要器官的组织学改变,对DENV感染的动物模型进行评价。结果 SCID小鼠成功移植LO2,并且嵌合小鼠感染DENV后出现病毒血症及严重的器官损伤等表现,但无后肢麻痹等无关症状。结论成功构建了SCID-LO2人鼠嵌合模型,嵌合小鼠能够支持DENV复制,并表现出部分人类感染DENV的临床症状,该小鼠感染模型为研究DENV的致病机制提供了有价值的实验材料。