车前草黄酮提取优化及其对过氧化氢损伤肝细胞的保护作用

目的通过响应面法优化富含车前子苷的车前草黄酮提取工艺,并探究车前草黄酮对过氧化氢(H_(2)O_(2))损伤的L02细胞的保护作用及其作用机制。方法通过单因素研究乙醇浓度、提取温度、液料比对车前草黄酮得率及其中车前子苷转移率的影响,在此基础上使用Central-Composite中心组合试验设计和响应面分析法筛选出车前草黄酮提取得率最高,车前子苷转移率最大的提取条件。通过测定该车前草黄酮对过氧化氢诱导的人正常肝细胞L02存活率、细胞凋亡、线粒体膜电位的影响,及其对L02细胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化物歧化酶(SOD)含量,HO-1、Nrf2、SOD蛋白表达量的影响来探究车前草黄酮对过氧化氢损伤的L02细胞的保护作用。结果研究结果表明,提取温度80℃、乙醇浓度65%、液料比为15∶1时,提取得到的车前草黄酮得率和车前子苷转移率均最大,分别为1.82%和35.01%。该条件下提取得到的车前草黄酮在25~100μg·mL^(-1)内可明显降低过氧化氢损伤的L02细胞的凋亡率(P<0.001),降低其线粒体膜电位损伤程度(P<0.001),增加细胞内SOD和GSH的表达量(P<0.001),降低细胞中MDA含量(P<0.01,P<0.001)。此外,该车前草黄酮可以调节过氧化氢损伤的L02细胞中HO-1、Nrf2、SOD的表达量,降低过氧化氢损伤肝细胞中HO-1、Nrf2蛋白表达水平,并增加细胞中SOD蛋白的表达量(P<0.05,P<0.01)。结论使用响应面法筛选出的车前草黄酮提取工艺操作简便,关键有效成分车前子苷的含量丰富,可为车前草黄酮的实际生产提供参考。该方法提取得到的车前草黄酮可降低过氧化氢损伤的肝细胞的氧化应激水平,对L02细胞具有一定的氧化损伤保护作用,研究结果可以为车前草黄酮作为护肝保健品的开发应用奠定基础。

何首乌含药血清对体外培养的人肝细胞活性的影响

目的:观察何首乌含药血清对体外培养的人肝细胞活性的影响,考察何首乌入血成分是否具有肝细胞毒作用。方法:采用血清药理学方法制备何首乌含药血清及空白对照组血清,作用于体外培养的人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞,MTT法检测不同浓度血清对两种细胞活力的影响;倒置相差显微镜观察各浓度血清作用后两种细胞的形态变化;测定含药血清作用于两种细48 h后,细胞培养液转氨酶活性变化。结果:何首乌含药血清对人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞的活力没有明显影响。两种细胞含药血清组与空白血清组相比,细胞形态都没有发生明显改变,细胞培养液转氨酶活性(ALT、AST)也没有显著差异(P>0.05)。结论:何首乌含药血清对体外培养的两种人源肝细胞活性均没有明显影响。

黑色素瘤缺乏因子2在缺氧复氧损伤介导的肝细胞焦亡中的作用

目的探讨黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)在缺氧复氧损伤介导的肝细胞焦亡中的作用。方法(1)采用缺氧复氧法干预L02细胞以构建肝脏缺血再灌注损伤体外模型。检测未建模L02细胞(空白对照组)以及缺氧后复氧1 h、3 h、6 h、12 h、24 h的L02细胞的活性、细胞焦亡率以及焦亡相关蛋白[半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1、白细胞介素(IL)-1β、IL-18]、AIM2蛋白的表达水平。(2)将L02细胞分为空白对照组、缺氧复氧模型组、缺氧复氧+si-AIM2组、缺氧复氧+si-NC组。缺氧复氧+si-AIM2组、缺氧复氧+si-NC组细胞分别转染si-AIM2、si-NC后进行缺氧6h/复氧培养12 h的干预;缺氧复氧模型组细胞仅进行缺氧培养6 h、复氧培养12 h,空白对照组细胞在常氧条件下等时长培养。检测各组细胞活性、焦亡率及焦亡相关蛋白表达水平。结果(1)与空白对照组相比,复氧6 h后L02细胞活性开始降低,复氧3 h后L02细胞焦亡率开始上升(P<0.05);复氧3 h、6 h、12 h、24 h后L02细胞活性依次降低而焦亡率依次升高(均P<0.05)。与空白对照组相比,复氧3 h后L02细胞AIM2蛋白的表达水平开始增加,复氧6 h后L02细胞Caspase-1、IL-1β、IL-18表达水平开始升高(均P<0.05);复氧24 h后L02细胞以上蛋白的表达水平高于2个或2个以上不同复氧时间组(均P<0.05)。(2)与缺氧复氧模型组和缺氧复氧+si-NC组比较,缺氧复氧+si-AIM2组细胞活性升高,且焦亡率、Caspase-1和IL-1β的表达水平均降低(P<0.05),而缺氧复氧模型组和缺氧复氧+si-NC组之间差异并无统计学意义(P>0.05);缺氧复氧+si-AIM2组IL-18的表达水平亦低于缺氧复氧+si-NC组(P<0.05)。结论AIM2参与缺氧后复氧诱导的L02细胞焦亡;干扰AIM2基因的表达可能通过抑制Caspase-1、IL-1β、IL-18的表达水平来改善缺氧后复氧引起的L02细胞焦亡。