葛根芩连汤对幽门螺杆菌感染人正常胃黏膜上皮细胞增殖与凋亡的影响及机制研究

目的 观察葛根芩连汤对幽门螺杆菌(Hp)感染人正常胃黏膜上皮(GES-1)细胞增殖与凋亡的影响及相关机制。方法 按照葛根芩连汤干预剂量的不同、是否有Hp感染将人GES-1细胞分为空白对照组、模型组、葛根芩连汤低剂量组(10μmol/L)、葛根芩连汤中剂量组(20μmol/L)、葛根芩连汤高剂量组(40μmol/L)及阳性药对照组(阿莫西林5μmol/L)。培养结束后,采用细胞增殖检测分析法(CCK-8法)检测细胞存活率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞p38、丝裂原活化蛋白激酶2(MK2)mRNA表达,蛋白免疫印迹(Western bloting)法检测细胞p38、MK2蛋白表达。结果 与空白对照组比较,模型组人GES-1细胞存活率降低(P<0.05);与模型组比较,葛根芩连汤各剂量组与阳性药对照组人GES-1细胞存活率均升高(P<0.05),且葛根芩连汤各剂量组效应呈剂量依赖性(P<0.05);阳性药对照组与葛根芩连汤高剂量组人GES-1细胞存活率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较,模型组TNF-α、IL-1β和IL-6均升高(P<0.05);与模型组比较,葛根芩连汤各剂量组与阳性药对照组TNF-α、IL-1β和IL-6均降低(P<0.05),且葛根芩连汤各剂量组效应呈剂量依赖性(P<0.05);阳性药对照组与葛根芩连汤高剂量组TNF-α、IL-1β和IL-6比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较,模型组人GES-1细胞凋亡率升高(P<0.05);与模型组比较,葛根芩连汤各剂量组和阳性药对照组人GES-1细胞凋亡率降低(P<0.05),且葛根芩连汤各剂量组效应呈剂量依赖性(P<0.05);阳性药对照组和葛根芩连汤高剂量组人GES-1细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较,模型组人GES-1细胞p38、MK2 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,葛根芩连汤各剂量组和阳性药对照组人GES-1细胞p38、MK2 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05),且葛根芩连汤各剂量组效应呈剂量依赖性(P<0.05);阳性药对照组和葛根芩连汤高剂量组人GES-1细胞p38、MK2 mRNA和蛋白表达比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 葛根芩连汤可有效提高Hp感染后人GES-1细胞增殖率,同时降低细胞凋亡水平,其机制可能与抑制p38/MK2信号通路、降低细胞炎性反应有关。

一种简便的人正常胃黏膜上皮细胞原代培养方法

背景:原代培养的人正常胃黏膜上皮细胞与体内姊妹细胞相似,是进行胃生理和病理研究的理想工具,但我国尚未见简便、可靠的人正常胃黏膜上皮细胞原代培养方法的报道。目的:探讨简便的人正常胃黏膜上皮细胞原代培养方法。方法:以胶原酶Ⅱ和分散酶磁性搅拌分离人正常胃黏膜上皮细胞。以甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测细胞活力,以观察细胞大体生长过程;以溴脱氧尿苷(BrdU)标记法检测S期细胞数量,以观察细胞微观增殖能力。以PAS染色鉴定胃黏膜上皮细胞黏原颗粒;以细胞角蛋白(CK)-18免疫荧光染色鉴定上皮细胞。以光学显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态结构。初步观察传代细胞的贴壁生长情况。结果:培养第2～3d,胃黏膜上皮细胞活力增幅最大,第4d达最高点,之后逐渐下降;BrdU孵育18h后,33.3%的细胞处于和曾经处于S期。接种密度高时,细胞PAS染色均呈紫红色,可见细胞核旁黏原颗粒;接种密度低时,仅成团细胞PAS染色呈阳性;培养第3d,绝大部分细胞CK-18阳性。接种第2d,胃黏膜上皮细胞成团簇状生长,增殖迅速,第4d后逐渐停止生长,第5d开始出现漂浮死亡细胞,最终完全被成纤维细胞取代;透射电子显微镜可见微绒毛、分泌颗粒、连接复合体等上皮细胞特征。传代胃黏膜上皮细胞增殖、铺展能力较原代细胞降低。结论:磁性搅拌酶分离培养可得到数量多、纯度高的人正常胃黏膜上皮细胞。

安胃汤含药血清对胃黏膜肠上皮化生模型细胞自噬及凋亡的影响

目的探讨安胃汤(半夏、黄连、干姜、乌药、百合等)含药血清对胃黏膜肠上皮化生(Gastric intestinalmetaplasia,GIM)模型细胞自噬及凋亡的影响。方法采用鹅去氧胆酸(CDCA)诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1,制备GIM细胞模型。实验分为正常组(正常胃黏膜上皮细胞GES-1常规培养)、模型组(经CDCA复制成GIM模型后常规培养)、空白对照组(GIM模型细胞以等量空白血清培养)、安胃汤组(GIM模型细胞+7%安胃汤含药血清),各组细胞干预24 h后检测。采用流式细胞术(Annexin V-PE/7-AAD双染法)检测细胞凋亡;免疫荧光双标法检测肠上皮化生相关蛋白SOX2、CDX2的表达情况;透射电镜观察细胞超微结构及自噬情况;qRT-PCR法检测细胞LC3、Bax mRNA表达情况;Western Blot法检测细胞MUC2、KLF4、LC3、Bax蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组细胞的MUC2、KLF4蛋白表达显著上调(P<0.01),细胞的凋亡率明显降低(P<0.05);SOX2荧光强度明显降低(P<0.05),CDX2荧光强度显著增高(P<0.01);细胞结构紊乱,细胞核萎缩畸形,内质网和线粒体等细胞器肿胀破裂及空泡化严重,自噬小体及自噬溶酶体明显增多;Bax mRNA及蛋白表达明显下调(P<0.05),LC3 mRNA表达显著上调(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达比值显著升高(P<0.01)。与空白对照组比较,安胃汤组细胞的凋亡率显著增高(P<0.01);SOX2荧光强度显著增高(P<0.01),CDX2荧光强度明显降低(P<0.05);细胞结构较完整,镜下可见自噬小体和自噬溶酶体略有减少;Bax mRNA及蛋白表达显著上调(P<0.01),LC3 mRNA表达显著下调(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达比值显著降低(P<0.01)。结论安胃汤可能通过调节GIM模型细胞自噬,并促进其凋亡,从而改善胃黏膜上皮细胞的肠上皮化生情况。

加味七方胃痛颗粒含药血清对胃黏膜上皮细胞铁死亡的影响及机制研究

目的:探究加味七方胃痛颗粒含药血清对胃黏膜上皮细胞铁死亡的影响及机制。方法:GES-1细胞分为空白对照组、模型组、加味七方胃痛颗粒含药血清低浓度组、加味七方胃痛颗粒含药血清中浓度组、加味七方胃痛颗粒含药血清高浓度组、si-E-cad-NC+加味七方胃痛颗粒含药血清组、si-E-cad+加味七方胃痛颗粒含药血清组。CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡、ROS水平、线粒体膜电位和Fe~(2+)水平;qPCR检测E-cadherin、NF2、YAP、TEAD、TfR1 mRNA表达;Western Blot检测E-cadherin、Merlin、p-YAP、YAP、TEAD、TfR1蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型组GES-1细胞活力及E-cadherin、NF2(Merlin)、TEAD表达显著降低,细胞凋亡率、ROS水平、线粒体膜电位、Fe~(2+)水平、TfR1 mRNA及蛋白表达和p-YAP/YAP水平显著升高。与模型组比较,加味七方胃痛颗粒含药血清可逆转上述除TEAD外各指标的变化。给予加味七方胃痛颗粒的同时抑制E-cadherin表达则可抑制加味七方胃痛颗粒含药血清的作用。结论:加味七方胃痛颗粒可通过上调E-cadherin表达,活化NF2而拮抗Hippo通路,抑制胃黏膜上皮细胞铁死亡。

黑果枸杞多糖结构表征及对乙醇诱导胃黏膜上皮细胞损伤的影响

采用热水浸提法提取黑果枸杞多糖(Lycium ruthenicum Murr. polysaccharide,LRMP),解析其单糖组成、糖苷键连接方式、链构象等结构参数,并评价其对乙醇诱导胃黏膜上皮细胞(gastric mucosal epithelial cells,GES-1)损伤的保护效果。结果表明,LRMP由阿拉伯糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、岩藻糖和半乳糖醛酸组成,结构末端主要由阿拉伯糖、木糖、葡萄糖和半乳糖残基组成,在溶液中呈典型的无规卷曲构象,均方半径为(80.4±1.0)nm。LRMP对GES-1细胞无毒性作用,质量浓度600μg/mL LRMP可以显著抑制乙醇对GES-1细胞造成的损伤,同时恢复细胞内超氧化物歧化酶的活性,降低GES-1细胞凋亡率。综上所述,LRMP作为功能性多糖在健康食品开发中具有潜力。

槟榔碱对人胃黏膜上皮细胞的毒性作用研究

本文旨在探讨槟榔碱对人胃黏膜上皮细胞GES-1的毒性作用。用不同浓度(60、90、120、150μg/mL)的槟榔碱处理GES-1细胞,并检测GES-1细胞活力、活性氧水平(Reactive Oxygen Species,ROS)和线粒体膜电位(Mitochondrial Membrane Potential,MMP),测定GES-1细胞还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)水平、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活力、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)活力、三磷酸腺苷(ATP)酶活力。测定肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白介素-6(Interleukin 6,IL-6)、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)、转化生长因子-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)水平。结果表明,与空白对照组相比,槟榔碱刺激后GES-1细胞形态发生改变,细胞活力最低降低至24%,活性氧水平最高升至12.5倍,线粒体膜电位最低下降至10.4%。在150μg/mL槟榔碱刺激下,总ATP酶以及Na^(+)K^(+)-ATP酶活力分别下降至42.31%和39.84%,GSH和SOD分别下降了40.23%和34.1%,LDH上升了30.46%,TNF-α、IL-6、VEGF、TGF-β水平分别上升了4.67%、10.2%、23.14%和22.83%。结果表明槟榔碱能够产生氧化应激并诱发炎症因子,对GES-1细胞造成毒性损伤。

安胃汤含药血清对胃黏膜肠上皮化生细胞内质网应激-自噬通路的影响

目的观察安胃汤(黄连、制半夏、白芍等)含药血清对胃黏膜肠上皮化生(GIM)细胞的影响,并基于内质网应激(ERS)-自噬通路探讨其作用机制。方法将SD大鼠随机分为空白组及安胃汤低、中、高剂量组(5.4、10.7、21.4 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组5只;每日1次,连续灌胃给药7 d,制备空白血清及安胃汤含药血清。采用150μmol·L^(-1)鹅去氧胆酸(CDCA)干预24 h,诱导人胃黏膜上皮细胞(GES-1),复制GIM细胞模型。将细胞分为正常对照组(未经CDCA干预的GES-1细胞)、模型组及安胃汤低、中、高剂量组,以10%空白血清及安胃汤低、中、高剂量含药血清干预24 h。采用Western Blot法检测肠上皮细胞的特异因子MUC2、VILLIN、CDX2蛋白表达情况;MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡;免疫荧光法检测细胞中ATF6蛋白表达水平;RT-qPCR法检测细胞中GRP78、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA表达水平;Western Blot法检测细胞中GRP78、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ及Beclin1蛋白表达水平。结果与正常对照组(0μmol·L^(-1))比较,CDCA 50、100、150、200μmol·L^(-1)浓度组GES-1细胞的MUC2、VILLIN、CDX2蛋白表达均显著上调(P<0.01);模型组细胞的增殖水平显著升高(P<0.01);细胞在G2/M期的细胞比例显著升高(P<0.01),在G0/G1期和S期的细胞比例明显降低(P<0.05,P<0.01);细胞的凋亡率显著降低(P<0.01);ATF6蛋白表达显著下调(P<0.01);GRP78、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA表达显著下调(P<0.01);GRP78、Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达显著下调(P<0.01)。与模型组比较,安胃汤含药血清低、中、高剂量组GIM细胞的增殖水平均显著降低(P<0.01);细胞在G2/M期的细胞比例显著降低(P<0.01),在G0/G1期和S期的细胞比例显著升高(P<0.01);细胞的凋亡率显著升高(P<0.01);ATF6蛋白表达显著上调(P<0.01);GRP78、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA表达均明显上调(P<0.05,P<0.01);GRP78、Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论安胃汤含药血清可将CDCA诱导的GIM细胞周期阻滞在S期,并抑制其增殖,诱导其凋亡,可能与其调控ERS途径,诱导细胞自噬相关。

miR-146a-5p对无水乙醇刺激的胃黏膜上皮细胞的保护作用

目的 研究miR-146a-5p对无水乙醇刺激的胃黏膜上皮细胞的保护作用。方法 选取胃黏膜上皮细胞(GES-1),将细胞分为空白组和模型组,通过无水乙醇刺激建立胃溃疡模型。采用MTT法检测两组细胞增殖率,RT-qPCR检测miR-146a-5p、白细胞介素1受体关联激酶1(IRAK1)、核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)和白细胞介素6(IL-6)的表达水平,Western blot检测IRAK1、NF-κB p65和IL-6蛋白的表达,ELISA法检测两组细胞中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6和白细胞介素10(IL-10)的含量。采用Targetscan数据库预测miR-146a-5p的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因实验验证靶基因。进一步通过过表达和敲减miR-146a-5p后观察靶点蛋白的变化,以确定miR-146a-5p和靶点蛋白的调控关系。过表达miR-146a-5p和敲减IRAK1后,Western blot检测IRAK1、NF-κB p65和IL-6蛋白的表达,ELISA法检测细胞中炎症因子TNF-α、IL-6和IL-10的含量。结果 MTT结果表明,与空白组相比,模型组细胞活性显著下降(P<0.01)。与空白组相比,模型组miR-146a-5p表达显著降低,IRAK、NF-κB p65和IL-6 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01)。Targetscan数据库预测miR-146a-5p的靶基因为IRAK1,双荧光素酶结果表明miR-146a-5p可与IRAK1靶向结合,且miR-146-5p可负向调控IRAK1蛋白表达。过表达miR-146a-5p和敲减IRAK1均可显著降低TNF-α和IL-6表达,升高IL-10表达(P<0.05)。结论 miR-146a-5p能够通过抑制IRAK1抑制无水乙醇诱导的GES-1细胞释放炎症因子,保护胃黏膜。

不同基因型幽门螺杆菌对人胃黏膜上皮细胞引起免疫损伤的作用

幽门螺杆菌（Hp）是一种革兰氏阴性微需氧螺旋状细菌,其与慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡和胃癌等疾病密切相关。国际癌症机构已将Hp列为Ⅰ级致癌因子。Hp感染在全世界非常普遍,然而只有少部分最终在其他诱因的共同作用下导致胃癌的发生,提示不同基因型的Hp在胃癌的发生发展中起了重要的作用。

小麦肽通过抑制炎症和PI3K/mTOR通路改善乙醇诱导胃黏膜损伤

该研究的目的是探究小麦肽对乙醇造成的胃黏膜损伤的保护作用及其机制。使用小麦肽进行处理后,乙醇诱导小鼠胃黏膜损伤模型和人胃黏膜上皮细胞(human gastric mucosal epithelial cell,GES-1)细胞损伤模型,观察小鼠体重变化和胃组织损伤状况,评估氧化应激、炎症和自噬相关蛋白表达水平。小麦肽预处理显著改善了乙醇诱导的小鼠体重降低,提高了胃组织和GES-1细胞内抗氧化酶活力和一氧化氮(NO)含量,减少脂质过氧化发生。病理组织切片显示,小麦肽预处理后,胃组织损伤显著减少。此外,小麦肽降低了组织内促炎因子表达,并通过抑制GES-1细胞中PI3K/AKT/mTOR通路激活,提高了LC3-Ⅱ蛋白表达。小麦肽可以通过调节抗氧化能力和促炎因子表达,抑制PI3K/mTOR通路激活等方式,改善乙醇诱导的胃黏膜损伤。

阿司匹林对人胃黏膜上皮细胞生长和occludin蛋白表达的影响及其机制研究

背景:研究显示ERK信号通路激活可促进细胞生长,上调紧密连接蛋白occludin表达,而阿司匹林可抑制ERK的磷酸化激活。目的:探讨阿司匹林对人胃黏膜上皮细胞生长和occludin蛋白表达的影响及其可能机制。方法:建立人胃黏膜上皮细胞株GES-1单层细胞模型,MTT法检测阿司匹林(5～20 mmol/L)和MEK抑制剂U0126(10～40μmol/L)对GES-1细胞的生长抑制作用。将GES-1细胞分为阿司匹林(8.78 mmol/L)组、U0126(14.91μmol/L)组、联合组(U0126+阿司匹林)和阴性对照组,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测p-ERK1/2、occludin蛋白表达。结果:阿司匹林和U0126均能剂量依赖性地抑制GES-1细胞生长,联合组细胞凋亡较两药单用更为显著,贴壁细胞数量减少更为明显,细胞变圆、悬浮。阿司匹林组、U0126组和联合组p-ERK1/2、occludin蛋白表达量均显著低于阴性对照组,U0126组和联合组降低更为明显。结论:阿司匹林可抑制人胃黏膜上皮细胞生长,下调occludin蛋白表达,其机制至少部分与抑制ERK信号通路激活有关。

胃癌及癌前病变中胃黏膜上皮细胞增生及凋亡相关基因蛋白表达

目的:探讨胃癌演变过程中胃上皮细胞动力学变化.方法:应用免疫组化SP法对各种病变胃上皮细胞增生相关蛋白(PCNA、P53)和凋亡相关蛋白(Fas、Bcl-2、Bax)的表达进行检测.结果:PCNA、P53表达随病变进展逐渐增加,慢性浅表性胃炎(CSG)组明显低于肠化生(IM)、不典型增生(Dys)、胃癌(GC)组(PCNA53.3%vs75.6%、93.3%、86.4%,P533.3%vs24,.4%、36.7%、81.8%).Fas、Bax表达随病变进展逐渐减少,Dys、GC组明显低于CSG组(Fas30%、27.3%vs60%,Bax43.3%、40.9%vs70%,P<0.05).Bcl-2表达随病变进展而逐渐增加,Dys(63.3%)、GC(72.7%)组明显高于CSG(20%)、IM(32.2%)组(P<0.01).结论:对不同胃黏膜上皮细胞增生相关蛋白(PCNA、P53)及凋亡相关蛋白(Fas、Bcl-2、Bax)检测表明,在胃癌演变过程中存在着胃上皮细胞增生和凋亡的失衡,即增生过快凋亡受抑.PCNA、P53、Fas、Bcl-2、Bax通过在不同病变阶段被激活或抑制而在胃癌及癌前病变形成过程中起作用.

MNNG、CDCA构建胃黏膜上皮细胞GES-1肠化生模型的可行性

目的探讨N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)、鹅脱氧胆酸(CDCA)构建胃黏膜上皮细胞GES-1肠化生模型的可行性。方法体外培养GES-1细胞,分别给予不同浓度CDCA、MNNG处理24 h,采用CCK-8法检测450 nm波长处各孔光密度(OD)值,确定CDCA、MNNG对GES-1细胞具有生长抑制作用,二者的10%抑制浓度(IC10)分别为0.14、51.89μmol/L。另取GES-1细胞随机分为CDCA组、MNNG组,分别加入IC10的CDCA、MNNG,同时设未加药物处理的细胞为对照组,培养24 h时采用实时荧光定量PCR法检测黏蛋白1(MUC1)mRNA、黏蛋白2(MUC2)mRNA及尾型同源框转录因子2(CDX2)mRNA相对表达量。结果与对照组比较,CDCA组、MNNG组MUC1 mRNA相对表达量均降低,MNNG组MUC2 mRNA相对表达量降低,组间比较P均<0.05。三组间CDX2mRNA相对表达量比较P>0.05。结论 CDCA、MNNG可抑制胃黏膜上皮细胞生长,可用于构建胃黏膜上皮细胞的肠化生模型;下调胃特异性基因MUC1表达、上调肠特异性基因CDX2表达可能是二者的作用机制。

检测胃黏膜上皮细胞微量元素、DNA、P_(53)、Ki-67、C-erbB_2、P21^(ras)研究中医脾虚证和胃癌前病变的关系

目的:探索中医脾虚证的病理生理学变化与胃黏膜癌前病变的关系。方法:对160例脾虚证胃黏膜均伴有肠上皮化生(intestinal metaplasia,IM)和/或低级别上皮内瘤变(low grade intraepithe1ial neoplasia,L-IN)患者,脾虚证分为脾气虚证(spleen Qi deficiency,SQD)、脾阴虚证(spleen Yin deficiency,SyinD)和脾虚气滞证(spleen deficiency with Qi stagnation,SDQS)三型和22例健康对照者为研究对象,采用现代科学仪器和技术检测胃黏膜上皮细胞核和线粒体的微量元素、DNA与胃黏膜P_(53),Ki-67,C-erbB_2,P21^(ras)。结果:SDQS组与L-IN间在分子生物学上也无显著性的差异。结论:要定期随访检测以上指标。有利于早期发现慢性胃炎的癌变。

中药益胃冲剂对大鼠胃黏膜PGE2及上皮细胞内粘蛋白的影响

目的:观察益气养阴、活血化瘀、清热解毒中药复方“益胃冲剂”对大鼠胃黏膜内源性PGE2及上皮细胞内粘蛋白的影响.方法:实验采用Indomethacin为胃黏膜损伤剂,米索前列醇(PGE1)为对照药物,实验动物为Ⅱ级♂SD大鼠;实验动物共分为两批,两批实验条件一致;每批完全随机化分为四组(n=32):控制组(S):0.9NaCl%+0.9NaCl%、损伤组(M):0.9NaCl%+吲哚美辛、益胃冲剂治疗组(YM):益胃冲剂+吲哚美辛、米索前列醇治疗组(PM):米索前列醇+吲哚美辛;所有大鼠24h禁食不禁水后,每组先后相隔30min两次经口灌胃给药;最后一次给药4h后,腹腔麻醉下手术摘除胃.第一批大鼠用于刮取胃黏膜,放射免疫检测胃黏膜内源性PGE2含量(ng/kg);第二批大鼠用于制作病理切片,在PAS—AB染色和PAS—AB—苏木精染色病理切片上,放大400倍,进行计算机图像定量分析胃黏膜表面上皮细胞内粘蛋白和黏膜内黏液指数(%).结果:胃黏膜内源性PGE2含量:益胃冲剂和米索前列醇均可保持PGE2含量明显高于Indomethacin损伤组(200.0±61.1pg/g&302.9±77.2pg/gvs35.6±16.5pg/g,P<0.01),但也明显低于控制组(vs636.9±104.9pg/g,P<0.01)的水平,胃窦部的结果与胃体部相似.在胃体部两治疗组组间比较有明显的差别(P<0.01),而在胃窦部却无差别;胃黏膜上皮细胞内粘蛋白指数:益胃冲剂可使粘蛋白保持在控制组和损伤组水平以上(41.1±3.3vs35.1±4.9&17.9±3.8,P<0.01),米索前列醇与益胃冲剂及控制组比较无差别(38.2±4.0vs41.1±3.3&35.1±4.9,P>0.05);胃黏膜内黏液指数:益胃冲剂可使黏液指数保持在与控制组及米索前列醇治疗组相当的水平(10.2±3.3vs11.7±3.0&7.8±2.1,P>0.05),上述三组与损伤组比较均有明显差异(vs3.8±1.3,P<0.01).结论:益胃冲剂对胃窦部较胃体部黏膜细胞有更好的促进PGE2合成作用,其效力相当于外源性给予米索前列醇的黏膜保护效力,而对胃体部黏膜细胞PGE2合成的促进作用却低于外源性给予米索前列醇的黏膜保护效力;但益胃冲剂能明显增加胃体部黏膜表面上皮细胞内粘蛋白含量和黏膜内黏液量,与米索前列醇作用相当,而这种促进黏液合成的作用与促进胃黏膜内源性前列腺素素E2的合成有关,同时也明显提示与其他胃黏膜保护机制有关.

芪黄煎剂对胃切除大鼠小肠黏膜上皮内和固有层T淋巴细胞亚群的影响

目的探讨芪黄煎剂对大鼠胃切除后小肠黏膜上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocytes,IELs)和固有层淋巴细胞(lamina propria lymphocytes,LPLs)的影响。方法将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、芪黄煎剂组,每组20只。假手术组大鼠仅给予腹部正中切开后缝合,不行胃切除,不给予肠内营养和芪黄煎剂;模型组大鼠行胃切除手术后给予肠内营养制剂能全素;芪黄煎剂组大鼠行胃切除手术后给予肠内营养制剂能全素和芪黄煎剂,疗程1周。疗程结束后,分离出大鼠小肠黏膜IELs和LPLs,采用流式细胞仪分别检测IELs和LPLs的αβT细胞抗原受体-白细胞分化抗原3阳性(αβT cell antigen receptor-cluster ofdifferentiation 3positive,αβTCR-CD3+)T细胞、白细胞分化抗原4阳性(cluster of differentiation 4positive,CD4+)、白细胞分化抗原8阳性(cluster of differentiation 8positive,CD8+)T淋巴细胞。结果①与假手术组比较,模型组IELs中αβTCR-CD3+、CD8+T细胞比例显著降低(P<0.05,或P<0.01);与模型组比较,芪黄煎剂组IEL CD3+、CD8+T细胞比例显著上升(P<0.05,或P<0.01)。②与假手术组比较,模型组LPLs中αβTCR-CD3+、CD4+、CD8+T细胞比例显著降低(P<0.01);与模型组比较,芪黄煎剂组αβTCR-CD3+、CD4+T细胞比例显著上升(P<0.05)。结论芪黄煎剂能促进大鼠胃切除术后上皮内和固有层中T淋巴细胞的分化、成熟和增殖,有利于胃切除手术应激后肠道免疫屏障功能的调节和恢复。

小檗碱减轻幽门螺杆菌诱导的人胃黏膜上皮细胞损伤

目的:探讨小檗碱(Ber)对幽门螺杆菌(Hp)诱导的人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的保护作用及机制。方法:采用Hp感染GES-1细胞,加入小檗碱(5,10和20μmol/L)和细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)抑制剂PD98059(20μmol/L)共培养。MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA法检测细胞白细胞介素(IL)-1β及IL-8的水平,比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性并以Western blot法检测细胞Bax、Bcl-2、p-ERK1/2的蛋白水平。结果:与对照组比较,Hp可抑制GES-1细胞活力、促进GES-1细胞凋亡、诱导GES-1细胞分泌IL-1β和IL-8、增加LDH活性、增加GES-1细胞内p-ERK1/2及Bax蛋白水平并降低Bcl-2蛋白水平,差异均有统计学显著性(P<0.05);与Hp感染组比较,中、高剂量小檗碱均可逆转Hp对GES-1细胞活力、细胞凋亡、细胞IL-1β及IL-8分泌、LDH活性和GES-1细胞内p-ERK1/2、Bax及Bcl-2蛋白水平的影响,差异均有统计学显著性(P<0.05);与高剂量小檗碱组比较,PD98059联合小檗碱可进一步逆转Hp对GES-1细胞上述指标的影响,差异均有统计学显著性(P<0.05)。结论:小檗碱可通过抗炎、增加细胞活力和抗凋亡来减轻Hp诱导的GES-1细胞损伤,其机制可能与抑制ERK1/2通路有关。

艾灸血浆对乙醇损伤的人胃黏膜上皮细胞的影响

目的:探讨艾灸血浆对乙醇损伤的离体人胃黏膜上皮细胞(GES-1)的保护作用.方法:将离体胃黏膜上皮细胞(GES-1)分为4组,即空白组、乙醇损伤模型组、艾灸穴位血浆组和艾灸非穴位血浆组.艾灸人体足三里、中脘、关元穴及非穴对照点前后提取并制备艾灸前后的血浆.以含8%乙醇培养液作用于后3组胃黏膜上皮细胞,建立胃黏膜上皮细胞损伤模型.各组分别加入预先提取的灸前血浆、艾灸穴位血浆和艾灸非穴位血浆.采用MTT法检测细胞抑制率,比色法检测细胞培养上清液中液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量,流式细胞技术检测细胞周期及细胞凋亡率.结果:模型组与空白组比较,细胞A490降低(P<0.01),抑制率明显上升;与模型组比较,艾灸穴位血浆组A490升高(P<0.01),细胞抑制率降低;艾灸非穴位血浆组A490低于艾灸穴位血浆组A490(P<0.01),而细胞抑制率高于艾灸穴位血浆组(26.52%vs22.06%).与空白组比较,模型组培养液中LDH、MDA、SOD含量均有所提高(P<0.01或0.05);艾灸穴位血浆组与模型组比较,SOD水平升高(P<0.01),LDH、MDA含量降低(均P<0.01);艾灸非穴位血浆组与艾灸穴位血浆组比较,SOD水平下降(34.11kU/L±4.14kU/Lvs38.73kU/L±4.34kU/L,P<0.05),LDH和MDA水平升高(9.26U/L±1.62U/Lvs7.38U/L±1.28U/L;3.91μmoL/L±0.11μmoL/Lvs3.75μmoL/L±0.11μmoL/L,均P<0.05).艾灸非穴血浆组与艾灸穴位血浆组比较,细胞周期中各期无明显差异(均P>0.05),凋亡率升高(1.56%±0.19%vs1.24%±0.08%,P<0.01).结论:艾灸足三里、中脘、关元穴后提取的人体血浆对受损人胃黏膜细胞具有一定的保护作用.