声带癌前病变组织中基质金属蛋白酶抑制剂-1、果蝇母亲DDP同源物4表达水平与术后复发和恶变的相关性研究

目的探讨声带癌前病变组织中基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1,TIMP-1)、果蝇母亲DDP同源物4(drosophila mothers against DDP homolog 4,Smad4)表达水平与术后复发和恶变的相关性。方法回顾性分析2018年8月~2021年8月郑州大学第一附属医院收治的162例声带癌前病变患者的临床和病理资料,收集手术切除癌前病变组织(癌前病变组)及病变旁正常黏膜组织(对照组),采用免疫组织化学法检测组织中TIMP-1、Smad4表达情况。分析TIMP-1、Smad4阳性率与临床病理特征的关系,并采用Kaplan-Meier法和Cox回归分析法分析其对术后复发和恶变的影响。结果与对照组正常黏膜组织比较,癌前病变组的TIMP-1阳性率较高,Smad4阳性率较低(P<0.05)。不同病变范围、是否累及前连合、不同程度上皮异常增生患者的TIMP-1、Smad4阳性率存在差异(P<0.05)。术后随访时间24~60个月,中位随访时间36个月,随访期间失访患者6例,随访率96.30%(156/162),随访期间术后复发35例(21.60%),术后恶变16例(9.88%);Kaplan-Meier生存分析显示,TIMP-1阳性患者术后复发率和恶变率高于TIMP-1阴性患者(P<0.05);Smad4阴性患者术后复发率和恶变率高于Smad4阳性患者(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,喉咽反流、病变范围>1/2、中/重度异型增生、TIMP-1阳性、Smad4阴性是复发的独立危险因素(P<0.05),年龄>60岁、累及前连合、TIMP-1阳性、Smad4阴性是恶变的独立危险因素(P<0.05)。结论声带癌前病变组织中TIMP-1高表达、Smad4低表达,且TIMP-1阳性、Smad4阴性表达者术后复发和恶变风险较高。

ZFHX4突变与肿瘤免疫治疗疗效相关性的生物信息学研究

目的探究锌指同源框蛋白4(ZFHX4)突变与肿瘤免疫检查点抑制剂(ICIs)治疗反应及肿瘤免疫微环境的关系。方法登陆cBioPortal数据库获取8组公开的ICIs治疗患者全外显子组测序队列,包含膀胱癌、头颈癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌4种癌症共769例患者,评估ZFHX4突变与免疫治疗疗效及预后的关系。从Pan-Cancer图谱联盟获取癌症基因组图谱33种癌症的泛癌队列,分析ZFHX4突变与免疫微环境的关系。选择3组ICIs治疗患者(肝癌41例,膀胱癌348例,黑色素瘤110例)转录组测序队列,探究ZFHX4基因表达与ICIs治疗反应及预后的关系。结果769例ICIs治疗患者中,190例(32.8%)患者存在ZFHX4突变。与ZFHX4野生型患者相比,ZFHX4突变型患者无进展生存率(P=0.014)、总生存率(P=0.002)、客观反应率(P=0.030)和持久临床收益(P=0.007)均较高。肿瘤微环境综合分析发现,ZFHX4突变型患者免疫原性增强(P<0.001),抗肿瘤免疫细胞浸润增加(P<0.001),肿瘤突变负荷水平较高(P<0.001)。结论ZFHX4突变预示着较好的ICIs治疗疗效,可作为ICIs治疗疗效潜在的预测因子。

沉默微小RNA-378靶向调节骨形态发生蛋白2/母亲DPP同源物4信号通路对大鼠胫骨骨折愈合的影响实验研究

目的:探究沉默微小RNA-378(miR-378)靶向调节骨形态发生蛋白(BMP)2/母亲DPP同源物(Smad)4信号通路对大鼠胫骨骨折愈合的影响。方法:对38只大鼠建立胫骨骨折模型,另取18只正常大鼠作为假手术组。选取胫骨骨折模型造模成功大鼠中的8只作为造模组,假手术组中的8只作为对照组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测造模组胫骨骨折部位骨组织及对照组相同部位正常骨组织miR-378与BMP2、Smad4 mRNA表达。将30只胫骨骨折模型大鼠随机分为模型组、空载质粒组和miR-378沉默组,每组10只。空载质粒组、miR-378沉默组分别经尾静脉注射1μg空载质粒或miR-378小干扰RNA(siRNA)质粒;模型组和剩余10只假手术组大鼠经尾静脉注射0.9%氯化钠溶液1μg;每2天注射1次,连续干预30 d。利用X线观察各组大鼠胫骨骨折愈合情况并进行骨折愈合评分(Lane-Sandhu评分)。采用酶联免疫吸附法检测各组血清炎症因子和骨钙素(OC)、碱性磷酸酶(ALP)水平。采用HE染色观察各组骨组织形态学变化。采用RT-qPCR检测各组骨组织miR-378与BMP2、Smad4 mRNA表达。采用蛋白印迹检测各组骨组织BMP2、Smad4蛋白表达。结果:造模组骨组织miR-378表达水平高于对照组,BMP2、Smad4 mRNA表达水平低于对照组(均P<0.05)。假手术组大鼠骨组织结构清晰;模型组和空载质粒组骨折线清晰,无骨痂出现,骨组织结构严重破坏,仅有少量成骨细胞生成;miR-378沉默组骨折线模糊,出现骨痂,骨组织破坏程度得到缓解并有大量成骨细胞生成。与假手术组比较,模型组血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、OC、ALP及骨组织miR-378表达水平升高,BMP2、Smad4 mRNA和蛋白表达水平降低(均P<0.05)。与模型组和空载质粒组比较,miR-378沉默组Lane-Sandhu评分、OC、ALP水平,以及BMP2、Smad4 mRNA和蛋白表达水平升高,血清TNF-α、IL-1β及骨组织miR-378表达水平降低(均P<0.05)。结论:沉默miR-378可能通过靶向激活BMP2/Smad4信号通路减轻胫骨骨折大鼠炎症反应,促进成骨细胞生成,加快大鼠骨折部位的愈合。

老年COPD并发PI患者血清lncRNA SNHG16和SMAD4表达及其临床意义

目的探讨老年慢性阻塞性肺病(COPD)并发肺部感染(PI)患者血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因16(lncRNA SNHG16)和母亲抗生物皮肤生长因子同源物4(SMAD4)表达及其临床意义。方法选取2021年1月至2023年1月该院收治的237例老年COPD患者为研究对象,将其中并发PI的117例患者归为并发组,120例未并发PI患者归为COPD组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测患者血清lncRNA SNHG16相对表达水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者血清SMAD4水平。采用简化临床肺部感染评分(sCPIS)评价并发组患者PI程度。采用多因素Logistic回归分析模型分析老年COPD患者并发PI的影响因素;采用Spearman相关性分析老年COPD并发PI患者的血清lncRNA SNHG16相对表达水平、SMAD4水平与sCPIS之间的相关性;并通过受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA SNHG16相对表达水平、SMAD4水平对老年COPD患者并发PI的诊断价值。结果并发组血清lncRNA SNHG16相对表达水平高于COPD组,但血清SMAD4水平低于COPD组(P<0.05)。并发组年龄≥70岁、有吸烟史、并发糖尿病、COPD病程≥5年者占比及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(INF-γ)水平均高于COPD组(P<0.05),1秒用力呼气量/用力肺活量(FEV 1/FVC)、白细胞介素-10(IL-10)水平均低于COPD组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析模型结果表明,年龄≥70岁、并发糖尿病、COPD病程≥5年、高TNF-α水平、高INF-γ水平、高lncRNA SNHG16相对表达水平均是导致老年COPD患者并发PI的危险因素(P<0.05),高FEV 1/FVC、高血清SMAD4水平、高IL-10水平是保护因素(P<0.05)。Spearman相关性分析表示,血清lncRNA SNHG16相对表达水平与COPD并发PI患者的sCPIS呈正相关(r=0.505,P<0.001),SMAD4水平与sCPIS呈负相关(r=-0.550,P<0.001)。血清lncRNA SNHG16相对表达水平、SMAD4水平联合诊断老年COPD患者并发PI的曲线下面积(AUC)均大于各项单独诊断(Z=2.416,P=0.016;Z=2.375,P=0.018)。结论老年COPD并发PI患者血清lncRNA SNHG16相对表达水平上升,SMAD4水平下降,二者均为老年COPD患者并发PI的影响因素,均与患者PI程度相关,均对老年COPD患者并发PI具有诊断价值,且二者联合诊断效能更好。

急性冠状动脉综合征患者血清糖原合成酶激酶-3β和母亲DPP同源物4的表达及临床意义

目的探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者血清糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和母亲DPP同源物4(SMAD4)表达水平与冠状动脉病变程度和预后的关系。方法回顾性选取2020年6月至2022年5月山东第一医科大学附属青岛医院收治的192例ACS患者为ACS组,同期收治的192例非ACS患者为非ACS组。通过酶联免疫吸附法测定两组患者血清GSK-3β、SMAD4表达水平。采用Gensini积分系统评价患者冠状动脉病变程度,并采用Spearman法分析ACS患者血清GSK-3β、SMAD4表达水平与Gensini总积分的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清GSK-3β、SMAD4水平对ACS患者预后的预测效能。结果ACS组患者血清GSK-3β、SMAD4水平均高于非ACS组[(2.70±0.40)μg/L比(2.24±0.41)μg/L、(12.19±2.10)μg/L比(9.79±2.82)μg/L],差异有统计学意义(P<0.05)。轻度、中度、重度冠状动脉病变ACS患者血清GSK-3β、SMAD4水平均依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman分析结果显示,ACS患者血清GSK-3β、SMAD4水平均与Gensini总积分呈正相关(r=0.569、0.587,P<0.01)。ACS患者预后不良48例,预后不良发生率为25.00%(48/192);预后良好144例。预后不良ACS患者血清GSK-3β、SMAD4水平均高于预后良好ACS患者[(3.15±0.53)μg/L比(2.55±0.36)μg/L、(14.03±2.08)μg/L比(11.58±2.11)μg/L],差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清GSK-3β、SMAD4水平单独与联合预测ACS患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.799、0.784、0.858,二者联合预测的AUC显著高于单独预测的AUC(Z=2.04和2.75,P=0.041和0.006)。结论ACS患者血清GSK-3β、SMAD4表达异常升高,二者与ACS患者冠状动脉病变程度正相关,均对ACS患者不良预后有良好预测效能,且二者联合运用的预测效能更好。

声带白斑组织SMAD4、IL-35的表达及其与喉癌的关系研究

目的分析声带白斑组织果蝇母亲DPP同源物4(SMAD4)、IL-35表达情况,并探讨其与喉癌的关系。方法选取2019年1月至2021年1月嘉兴市第一医院耳鼻咽喉科收治的行手术治疗的声带白斑患者30例为声带白斑组,声带息肉患者30例为声带息肉组,喉癌患者30例为喉癌组,采用RT-PCR法、免疫荧光染色法检测声带息肉组织、白斑组织及喉癌组织SMAD4、IL-35(包括2个亚型:IL-12p35、Ebi3)mRNA和蛋白的表达情况;分析声带组织SMAD4 mRNA表达水平、蛋白阳性表达率与上皮异常增生程度的相关性;分析声带白斑患者术后发展为喉癌的危险因素;分析影响喉癌患者预后的危险因素。结果声带息肉组织SMAD4 mRNA表达水平、蛋白阳性表达率>声带白斑组织>喉癌组织(均P<0.05),声带息肉组织IL-12p35与Ebi3 mRNA表达水平、蛋白阳性表达率<声带白斑组织<喉癌组织(均P<0.05)。声带组织SMAD4 mRNA表达水平、蛋白阳性表达率与声带组织上皮异常增生程度均呈负相关(r_(s)=-0.637、-0.817,均P<0.05);IL-12p35 mRNA表达水平、蛋白阳性表达率与声带组织上皮异常增生程度均呈正相关(r_(s)=0.712、0.673,均P<0.05);Ebi3 mRNA表达水平、蛋白阳性表达率与声带组织上皮异常增生程度均呈正相关(r_(s)=0.681、0.776,均P<0.05)。Cox多因素分析显示,声带白斑形态分型差、上皮异常增生程度高、SMAD4低表达及Ebi3高表达是声带白斑患者术后发展为喉癌的独立危险因素(均P<0.05);淋巴结转移及IL-35高表达是影响喉癌患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论SMAD4与IL-35的表达变化可能是喉癌发生、发展的早期事件,SMAD4低表达及IL-35高表达可能通过影响信号通路或免疫抑制影响声带白斑的转归,两者或可作为评估声带白斑患者转归及喉癌患者预后的指标。

SMAD4突变型结直肠癌患者基因突变及肿瘤免疫微环境特征分析

为探讨贵州地区结直肠癌患者人母亲DDP同源物4(mothers against decapentaplegic homolog 4,SMAD4)突变及肿瘤免疫微环境特征,采用二代测序(next generation sequencing,NGS)、多重免疫荧光及免疫组化等技术,回顾性分析了150例贵州地区结直肠癌患者的SMAD4突变数据及其中8例患者的肿瘤免疫微环境数据。结果显示,在患者群中,有22.00%的患者出现SMAD4突变,最主要的突变形式为非同义突变(66.67%),与SMAD4共突变最主要的基因为Kirsten大鼠肉毒病毒原癌基因同源基因(Kirsten rat sarcoma viral oncogene homologue,KRAS,51.52%)。肿瘤突变负荷(tumor mutational burden,TMB)和PD-L1表达水平在SMAD4突变与否的患者中差异无统计学意义(P>0.05)。微卫星高度不稳定性(microsatellite instability-high,MSI-H)的比例在SMAD4突变与否的患者中差异有统计学意义(P=0.014),但MSI-H仅占6.06%(4/66)。相比SMAD4野生型患者,SMAD4突变型患者肿瘤组织中具有更多的M2型巨噬细胞(P=0.038)。该研究提示,SMAD4突变患者M2型巨噬细胞在肿瘤中的浸润,可能导致了这类患者更差的预后以及对化疗药物的耐药。