人水通道蛋白1的B细胞表位初步预测分析

目的分析人水通道蛋白1的B细胞优势表位,为后续研究获得其单克隆抗体做好铺垫。方法分别对人水通道蛋白1进行亲水性、二级结构、柔韧性、极性、可及性、电荷分布等多参数进行分析,然后用抗原性指数的方法综合分析。结果人水通道蛋白1的肽段21～39、39～45、42～49、79～93、110～125、122～128、130～138、153～164、229～237预测结果具有较高的免疫原性。结论多参数预测分析获得多个人水通道蛋白1表位多肽,为后续制备抗人水通道蛋白1单克隆抗体奠定了基础。

人AQP1-shRNA表达质粒载体的构建与筛选

目的构建针对人水通道蛋白1(AQP1)基因的shRNA表达质粒载体,并验证其干扰效果,为进一步探讨AQP1基因对人乳腺癌细胞的作用及机制建立基础。方法设计合成4对针对人AQP1基因不同位点的shRNA片段,通过DNA重组技术将其插入载体GV115中,构建AQP1-shRNA重组质粒,转染人乳腺癌MCF-7细胞,并通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot法检测干扰效率。结果 RT-PCR法证实AQP1在乳腺癌MCF-7细胞中有表达。测序验证表明4对靶向AQP1-shRNA表达载体均构建成功。4组干扰载体能够从基因和蛋白表达水平不同程度抑制AQP1表达,其中以AQP1-shRNA 4对AQP1的干扰效率最强。结论成功有效地构建了针对人AQP1基因的shRNA重组质粒,能够有效抑制人乳腺癌细胞MCF-7中AQP1的表达。