酵母双杂交筛选与蛋白激酶CK2α′相互作用蛋白--泛素-52氨基酸融合蛋白的鉴定

蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶.为研究CK2α′亚基在精子发生中的作用机制,将构建于pACT2质粒的人睾丸cDNA文库和人蛋白激酶CK2α′为诱饵蛋白进行酵母双杂交实验.以初步筛选与人蛋白激酶CK2α′相互作用蛋白的阳性候选克隆,筛选获得8个阳性克隆,其中1个与人泛素-52氨基酸融合蛋白基因(UBA52)的cDNA序列有高度同源性(100%).GST pull-down实验在细胞外进一步证实了CK2α′与UBA52之间存在相互作用.本实验证明,人泛素-52氨基酸(UBA52)融合蛋白是人CK2α′亚基的相互作用蛋白,它们之间的相互作用对精子发生机制的影响尚不清楚,进一步分子机制研究正在进行中.

早期糖尿病肾病泛素-核糖体融合蛋白52和尿微量清蛋白关系研究

目的探讨泛素-核糖体融合蛋白52(UBA52)在早期糖尿病肾病(DN)患者中的表达及其与尿微量清蛋白(MAU)的关系。方法选取2012年2月—2013年3月新疆医科大学第五附属医院收治的糖尿病患者20例(糖尿病组),DN患者59例(DN组)。另选取同期在本院体检健康者22例作为对照组。采用免疫透射比浊法检测3组受试者MAU,采用ELISA法检测血UBA52、尿UBA52。结果 3组性别、年龄、BMI比较,差异均无统计学意义(P>0.05);3组血糖、糖化血红蛋白、总胆固醇比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。3组血UBA52、尿UBA52、尿蛋白定量和MAU比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中DN组血UBA52、尿UBA52、尿蛋白定量和MAU均高于对照组和糖尿病组,糖尿病组尿蛋白定量、MAU均高于对照组(P<0.05)。多元线性回归分析结果显示,MAU和糖化血红蛋白影响DN患者尿UBA52水平(P<0.05)。结论 DN患者血UBA52、尿UBA52水平升高,MAU是尿UBA52水平的影响因素。

泛素-核糖体融合蛋白52——糖尿病肾病的早期生物标志物

目前,泛素-核糖体融合蛋白52(UbA52)是对早期糖尿病肾病(DN)有重要诊断价值的生物标志物。UbA52由一种泛素编码基因UbA52翻译表达,其可能通过参与氧化应激及泛素-蛋白酶体途径(UPP),从而参与早期DN的发病。UbA52水平与体内血糖水平呈正相关,并仅表达于肾小管;而尿中UbA52的水平直接与DN的关系密切。目前已被认为是DN早期诊断的标志物,并且基于尿蛋白组学技术的这一领域正在飞速发展。

高糖对肾小管上皮细胞泛素-核糖体蛋白52与TGF-β/Smad信号通路mRNA表达的影响

目的探讨高糖对肾小管上皮细胞泛素-核糖体蛋白(ubiquitin-ribosomal protein 52,UBA52)与TGF-β/Smad信号通路mRNA表达的影响及其UBA52在肾小管上皮细胞转分化中的作用与可能机制。方法根据培养基葡萄糖浓度不同分成葡萄糖低浓度组(5.6 mmol/L葡萄糖)、葡萄糖+甘露醇组(5.6 mmol/L葡萄糖+24.6 mmol/L甘露醇)、葡萄糖中浓度组(20 mmol/L葡萄糖)、葡萄糖高浓度组(30 mmol/L葡萄糖),分别干预48 h。观察不同糖浓度对鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)形态的影响;实时荧光定量PCR检测并比较不同葡萄糖浓度下UBA52、Smad7、转化生长因子β1(TGF-β1)与α-SMA mRNA水平。结果高糖可致NRK-52E向成纤维细胞转分化;葡萄糖低浓度组、葡萄糖+甘露醇组、葡萄糖中浓度组、葡萄糖高浓度组肾小管上皮细胞UBA52 mRNA的表达分别为(1.002±0.075)、(0.092±0.083)、(1.994±0.146)、(2.160±0.210),差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β1的表达分别为(1.003±0.089)、(1.180±0.060)、(1.214±0.169)、(2.158±0.266),差异有统计学意义(P<0.05);Smad7mRNA表达分别为(1.002±0.078)、(1.106±0.049)、(0.952±0.044)、(0.332±0.110),差异有统计学意义(P<0.05);α-SMA mRNA表达分别为(1.002±0.007)、(1.046±0.091)、(1.720±0.032)、(2.885±0.254),差异有统计学意义(P<0.05);伴随着葡萄糖浓度的升高,UBA52、TGF-β1、α-SMA mRNA表达逐渐增加,而Smad7 mRNA的表达逐渐下降。UBA52与TGF-β1 mRNA表达量呈正相关(r=0.58,P<0.05),与Smad7mRNA表达量呈负相关(r=-0.61,P<0.05)。结论肾小管上皮细胞泛素前体UBA52、TGF-β1、α-SMA mRNA表达呈葡萄糖浓度依赖性增加,而Smad7基因表达呈葡萄糖浓度依赖性下降,UBA52可能参与了高糖环境下肾小管上皮细胞TGF-β/Smad信号通路的调控,实现肾小管上皮细胞转分化。

糖尿病视网膜病变患者检测尿泛素-核糖体融合蛋白52的临床意义

目的探讨糖尿病视网膜病变患者检测尿泛素-核糖体融合蛋白52的临床意义。方法收集该院内分泌科、肾内科、眼科2016年1月—2019年12月住院的2型糖尿病患者共264例,将其分为非DR组(无视网膜病变的糖尿病患者)50例,NPDR(背景型糖尿病视网膜病变)组156例、PDR(增殖型糖尿病视网膜病变)组58例,NPDR组根据病变分期情况细分为3个亚组:NPDR1组(Ⅰ期)52例、NPDR2组(Ⅱ期)52例、NPDR3组(Ⅲ期)52例;并选取对照组(健康体检者)100名。通过检测各组患者的尿UbA52、尿白蛋白与肌酐比值(ACR)、尿微量白蛋白(Alb)、血CysC、血肌酐(Scr)等指标,比较不同组别各肾损害指标的差异情况,再将264例糖尿病患者的尿UbA52根据4分位距分为4个等级,采用Spearman秩相关分析方法探讨尿UbA52与糖尿病视网膜病变程度之间的相关关系。结果尿ACR、尿Alb、血CysC及血Scr均只在NPDR3组和PDR组与对照组相比组间均数差异有统计学意义(P<0.05)。而尿UbA52在NPDR1组、NPDR2组、NPDR3组及PDR组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),同时各组间的均数采用LSD多重比较后差异有统计学意义(P<0.05),从均值上看,随着糖尿病视网膜病变程度的加重,各组尿UbA52的均数逐渐升高。糖尿病患者的尿UbA52与视网膜病变程度的Spearman秩相关分析结果显示Spearman秩相关系数为0.681,呈显著正相关(P<0.001)。结论糖尿病患者尿UbA52随视网膜病变程度的加重而逐渐升高,提示其与糖尿病视网膜病变呈现较好的平行关系,尿UbA52与DR的发生具有显著的相关性,故而尿UbA52是可作为预测DR、DN发生发展的一个临床生物指标。尿标本易于取得,尿UbA52检测方法成熟,易于临床推广。

血清泛素-核糖体融合蛋白52联合α-klotho蛋白对早期糖尿病肾病的诊断价值

目的探讨血清泛素一核糖体融合蛋白52（UbA52）联合α-klotho蛋白测定对早期糖尿病肾病（DN）诊断的意义。方法选取2015年10月～2016年9月于我院住院的2型糖尿病（T2DM）患者77例，根据估算的肾小球滤过率（eGFR）并结合肾脏损害程度的Mogensen分级标准，将其分为单纯2型糖尿病组（T2DM组）35例和2型糖尿病早期肾病组（DN组）42例，另选取同期我院门诊体检的健康人群30例为对照组（NC组），检测各组的血清UbA52、d—klotho蛋白、24h尿微量白蛋白（mAlb）水平，计算eGFR并进行比较分析。结果T2DN组患者血清UbA52和24h尿mAlb水平明显高于NC组和T2DM组，且α-klotho蛋白和eGFR水平明显低于NC组和T2DM组（P〈0．05）。T2DN组患者血清UbA52与24h尿mAlb呈正相关（r=0．478，P〈0．05），与eGFR呈负相关（r=-0．529，P〈0．05）；α-klotho蛋白与24h尿mAlb呈负相关（r=-0．593，P〈0．05），与eGFR呈正相关（r=0．511，P〈0．05）。结论血清UbA52和α-klotho蛋白可能作为DN早期诊断的新标记物，对早期DN的发现和治疗有重要意义。

泛素-核糖体融合蛋白52基因沉默对高糖环境下大鼠肾小管上皮细胞转化生长因子β1/Smad信号通路的影响

目的 探讨RNA干扰（RNAi）介导泛素-核糖体融合蛋白52（UBA52）基因沉默对高糖环境下鼠肾小管上皮细胞NRK-52E转分化信号通路转化生长因子β1（TGF-β1）/Smad的影响.方法 首先根据培养基葡萄糖浓度将NRK-52E细胞分为4组：正常对照组（5.6 mmol/L葡萄糖）、高渗对照组（5.6 mmol/L葡萄糖＋24.4 mmol/L甘露醇）、葡萄糖中浓度组（20 mmol/L葡萄糖）、葡萄糖高浓度组（30 mmol/L葡萄糖）并分别干预48 h,通过实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测并比较各组UBA52、Smad7、TGF-β1水平,观察葡萄糖浓度对上述指标的表达影响.然后采用三个不同基因序列的UBA52小干扰RNA（UBA52 siRNA）分别转染NRK-52E细胞,通过荧光定量PCR筛选出最佳转染效果的UBA52 siRNA基因序列,并确定最佳转染时间及转染剂量.然后将NRK-52E细胞分为3组：空白对照组（30 mmol/L葡萄糖）、阴性对照组（30 mmol/L葡萄糖＋无关RNA转染组）及转染组（30 mmol/L葡萄糖＋UBA52 siRNA转染）.48 h后实时荧光定量PCR法分别检测各组UBA52、TGF-β1、Smad7的mRNA表达变化,Western blotting法检测TGF-β1、Smad2/3、Smad7的蛋白表达.通过随机区组方差分析对上述指标进行统计学分析.结果 葡萄糖干预实验中正常对照组、高渗对照组、葡萄糖中浓度组、葡萄糖高浓度组肾小管上皮细胞UBA52、TGF-β1、Smad7 mRNA的表达量差异均有统计学意义（F=60.914、65.112、29.390,均P〈0.05）;葡萄糖中浓度组及高浓度组的UBA52、TGF-β1表达均明显高于正常对照组及高渗对照组,而Smad7的表达则明显低于正常对照组及高渗对照组.转染实验中空白对照组、阴性对照组及转染组TGF-β1 mRNA表达量分别为1.00±0.04、0.98±0.04、0.49±0.14,差异有统计学意义（F=26.364,P〈0.001）,转染组明显低于其他2组;3组Smad7 mRNA表达量分别为1.00±0.12、1.05±0.17、2.24±0.31,差异有统计学意义（F=22.816,P〈0.001）,转染组明显高于其他2组.3组TGF-β1蛋白表达量分别为0.676±0.357、0.613±0.011、0.184±0.073,差异有统计学意义（F=96.433,P〈0.01）,转染组表达量最低;Smad2/3的蛋白表达量分别为0.68±0.10、0.63±0.05、0.27±0.15,差异有统计学意义（F=12.194,P〈0.05）,转染组明显低于其他2组;Smad7的蛋白表达量分别为0.52±0.05、0.55±0.12、0.83±0.06,3组差异有统计学意义（F=12.154,P〈0.05）,转染组表达量最高.结论 干预高糖环境下鼠肾小管上皮细胞转分化信号通路TGF-β/Smad可能成为糖尿病肾病肾间质纤维化新的干预靶点.

苦碟子注射液静滴辅助替米沙坦口服治疗早期糖尿病肾病效果观察

目的观察苦碟子注射液静滴辅助替米沙坦口服治疗早期糖尿病肾病的疗效。方法将148例早期糖尿病肾病患者随机分为观察组和对照组各74例。两组均接受糖尿病的常规治疗并口服替米沙坦;观察组加用苦碟子注射液30 m L,加入250 m L生理盐水静滴,1次/d。观察两组临床疗效,检测两组患者治疗前后血肌酐、24 h尿微量白蛋白泛素-核糖体融合蛋白52(Ub A52)、a-Klotho蛋白。结果观察组显效59例、有效14例、无效1例,总有效率98.6%。对照组分别为40、25、9例,总有效率87.8%。观察组总有效率高于对照组(P<0.05)。两组患者治疗后血清肌酐和24 h尿微量白蛋白均较治疗前下降(P均<0.05)。观察组患者治疗后血清肌酐和24h尿微量白蛋白均低于对照组治疗后(P均<0.05)。与治疗前相比,两组患者治疗后血清Ub A52水平下降,a-Klotho蛋白水平升高(P均<0.05)。与对照组治疗后相比,观察组患者治疗后血清Ub A52水平更低,a-Klotho蛋白水平更高(P<0.05)。结论苦碟子注射液静滴辅助替米沙坦治疗早期糖尿病肾病效果好于单用替米沙坦。