基质金属蛋白酶-1在人涎腺腺样囊性癌细胞中的表达

目的:测定基质金属蛋白酶-1(MMP-1)在人涎腺腺样囊性癌不同转移力细胞系中的表达。方法:以人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞系及其高转移株ACC-M作为研究肿瘤转移分子机制的模型,采用免疫组化法和蛋白印迹(Western blot)法检测MMP-1的蛋白表达水平。结果:MMP-1在ACC-M细胞中的表达水平高于ACC-2细胞。结论:MMP-1在人涎腺腺样囊性癌的侵袭转移过程中可能发挥作用。

miR-455对Omi/HtrA2介导的人涎腺腺样囊性癌细胞株线粒体凋亡的影响

目的探讨过表达微小RNA-455(miR-455)对线粒体促凋亡分子丝氨酸蛋白酶(Omi/HtrA2)介导的人涎腺腺样囊性癌细胞株线粒体凋亡的影响。方法收集70例因原发病手术切除并经病理诊断为人涎腺腺样囊性癌患者的癌组织为人涎腺腺样囊性癌组,选取正常涎腺组织65例为对照组,无菌操作下取得的新鲜组织放入无菌冻存管后迅速投入液氮中快速冷冻,再转至-80℃冰箱长期保存,采用qRT-PCR法检测两组组织miR-455表达情况。体外培养人涎腺腺样囊性癌患者ACC-M细胞,利用miR-455mimics转染ACC-M细胞为miR-455 mimics组,采用国际通用的与所有基因无同源性序列的miR-455-NC转染为阴性对照组,以未经处理的ACC-M细胞为空白对照组,48 h后收集各组细胞。利用qRT-PCR法检测miR-455表达情况;MTT法检测ACC-M细胞增殖能力;利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;免疫荧光检测细胞色素C释放情况;利用Western印迹检测免抗人增殖细胞核抗原(ki67)、Omi/HtrA2、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3、caspase6蛋白表达情况。结果与对照组相比,人涎腺腺样囊性癌组miR-455表达显著降低(P<0.05);与空白对照组、阴性对照组比较,miR-455 mimics组ACC-M细胞中miR-455表达水平、细胞凋亡显著升高(P<0.05);miR-455 mimics组转染后48 h、72 h后OD值显著降低(P<0.05);与空白对照组、阴性对照组比较,miR-455 mimics组细胞色素C呈弥散性分布于细胞质中,围绕在细胞核周围且细胞色素C、线粒体平均光密度显著升高(P<0.05);miR-455 mimics组ACC-M细胞中ki67蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),Omi/HtrA2、caspase3、caspase6蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。结论过表达miR-455可促进人涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞凋亡,可能是通过激活Omi/HtrA2介导的线粒体凋亡途径而实现的。

NCAM基因对人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83生长抑制作用的研究

目的探讨NCAM基因对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83体外生长的抑制作用。方法应用电穿孔转染方法将NCAMcDNA转入人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83中,经G418筛选2～3周,用兔抗人NCAM抗体进行免疫组化染色鉴定,然后绘制细胞生长曲线,进行软琼脂培养。结果应用电穿孔方法可成功将NCAM基因转染入人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83中,免疫组化染色鉴定显示转染NCAM的SACC-83细胞有NCAM蛋白的表达。与对照组相比,经NCAM基因转染后的SACC-83细胞增殖明显受到抑制。转染了NCAM基因的SACC-83细胞克隆形成率明显降低。结论NCAM基因对人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83的生长有一定的抑制作用。

survivin反义寡核苷酸对人涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的影响

目的:探讨survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人腺样囊性癌细胞(ACC-M)凋亡及survivin基因表达的影响。方法:设计合成针对survivin基因的反义寡核苷酸片段,脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染SACC-M细胞,通过RT-PCR,Western-blotting检测survivin表达的改变,MTT测定细胞增殖抑制,流式细胞术测定细胞凋亡率。结果:转染ASODN组survivin表达下降,细胞凋亡率明显提高,细胞增殖明显受抑制,且与浓度有一定依赖性;SODN组、空白组与对照组无明显差异。结论:survivin ASODN能下调SACC-M细胞系中survivin的表达,在促进凋亡,抑制增殖中发挥重要作用。

紫杉醇及β-榄香烯对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-LM细胞毒作用的研究

目的 :研究紫杉醇及 β -榄香烯联合应用对体外培养人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC -LM的细胞毒作用。方法 :应用药物敏感性MTT测定法、流式细胞术和透射电子显微镜观察等方法 ,探讨紫杉醇与 β -榄香烯 (浓度比 1∶1)联合应用诱导SACC -LM细胞凋亡及其与G1期阻滞关系。结果 :1)应用MTT比色法 ,紫杉醇与 β -榄香烯联合 (浓度比 1∶1)作用SACC -LM细胞 2 4h后 ,其抑制率呈现出明显协同效应。 2 )流式细胞仪分析 ,2 5 μg/mL紫杉醇与 2 5 μg/mLβ-榄香烯协同用药作用SACC -LM细胞 2 4h后诱导SACC -LM细胞发生凋亡 ,并将细胞周期阻滞在G1期。3)电镜观察 ,协同用药对SACC -LM细胞作用 2 4h后 ,具有典型的凋亡细胞特征。结论 :紫杉醇与 β-榄香烯 (浓度比 1∶1)对SACC -LM细胞的抑制有协同作用 ,并诱导其产生凋亡 ,G1期阻滞能诱导SACC-LM细胞凋亡。

紫杉醇及β-榄香烯对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞毒作用的研究

目的 研究紫杉醇及 β -榄香烯联合应用对体外培养人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC - 83的细胞毒作用。方法 应用药物敏感性MTT测定法、流式细胞术 (FCM )和透射电子显微镜观察等方法 ,初步探讨紫杉醇与β-榄香烯 (浓度比1∶1)联合应用诱导SACC - 83细胞凋亡及其与G1期阻滞关系。结果 ①应用MTT比色法 ,紫杉醇与 β-榄香烯联合 (浓度比1∶1)作用SACC - 83细胞 2 4小时后 ,其抑制率呈现出明显协同效应 ,并具有浓度依赖性。②流式细胞仪分析 ,2 5ug/ml紫杉醇与 2 5ug/mlβ -榄香烯协同作用SACC - 83细胞 2 4小时后诱导SACC -83细胞发生凋亡 ,并将细胞周期阻滞在G1期。③电镜观察 ,协同用药对SACC - 83细胞作用 2 4小时后 ,染色质沿皱缩的核膜下凝聚 ,具有典型的凋亡细胞特征。结论 紫杉醇与 β-榄香烯 (浓度比1∶1)对SACC - 83细胞的抑制有协同作用 ,并诱导其产生凋亡 ,G1期阻滞能诱导SACC - 83细胞凋亡。

沉默法尼基转移酶对人涎腺腺样囊性癌细胞迁移、侵袭及上皮间充质转化的作用

目的通过体外实验探讨法尼基转移酶(FTase)对涎腺腺样囊性癌SACC-LM和SACC-83细胞迁移侵袭及上皮间充质转化(EMT)的作用及其机制。方法针对人FTase基因序列设计构建3条小干扰RNA(si-RNA),采用处于对数生长期的SACC-LM及SACC-83细胞,经脂质体瞬时转染技术抑制细胞FTase表达,分别命名为FTase-siRNA-1组、FTase-siRNA-2组、FTase-siRNA-3组,同时设置阴性对照组(NC-siRNA),空白对照组(仅加入转染试剂)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测FTase、HRAS的mRNA表达,选择沉默效率最高的FTase-siRNA进行后续实验;蛋白质免疫印迹法检测FTase、HRAS、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT、p65、磷酸化p65(Ser563)、上皮钙依赖黏附蛋白、波形蛋白、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白表达以及HRAS膜蛋白表达;Transwell小室及细胞划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力。结果与空白对照组及阴性对照组相比,FTase-siRNA-1组mRNA及蛋白相对表达量均降低(P<0.05),HRASmRNA和总蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05),HRAS膜蛋白相对表达量降低(P<0.05),上皮钙依赖黏附蛋白相对表达量升高(P<0.05),波形蛋白相对表达量降低(P<0.05),MMP-9蛋白相对表达量降低(P<0.05),RAS/PI3K/AKT/核因子-κB信号通路相关蛋白AKT、p65相对表达量的差异无统计学意义(P>0.05),但磷酸化AKT、磷酸化p65蛋白相对表达量降低;与空白及阴性对照组相比,FTase-siRNA-1组细胞侵袭及迁移能力显著下降(P<0.05)。结论体外沉默FTase可有效抑制人涎腺腺样囊性癌细胞SACC-LM和SACC-83的侵袭、迁移能力,其作用可能是通过干扰HRAS膜蛋白的定位,调控RAS/PI3K/AKT/核因子-κB信号通路,介导EMT而实现。

Icotinib hydrochloride对人涎腺腺样囊性癌细胞增殖的影响

分别应用0(对照组)、5、10、20、40、80μmol·L-1icotinib hydrochloride(盐酸埃克替尼)处理体外培养的人涎腺腺样囊性癌(ACC-M)细胞,形态学观察icotinib hydrochloride作用12、24、48、72、96 h后ACC-M细胞的生长状态变化.用四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度的icotinib hydrochloride作用不同的时间下ACC-M细胞的增殖抑制率.结果显示,icotinib hydrochloride作用后ACC-M细胞体积变小,胞质皱缩,细胞间隙增大,胞内颗粒增多,贴壁细胞变圆、漂浮.Icotinib hydrochloride抑制ACC-M细胞增殖.

莱菔硫烷与5-氟尿嘧啶对人涎腺腺样囊性癌细胞生长的协同作用研究

目的:研究莱菔硫烷(SFN)与5-氟尿嘧啶(5-FU)对人涎腺腺样囊性癌细胞(ACC-2)生长的抑制作用,并初步探讨其与细胞核核因子κB p65(NF-κB p65)表达的关系。方法:应用中位效应原理和联合作用指数法来评价药物的联合作用;应用Western印迹法分析NF-κB p65的表达。结果:SFN和5-FU半数生长抑制率(IC50)分别为56.73±6.59μmol/L和89.88±7.56μmol/L,联合使用时对ACC-2细胞生长具有协同抑制作用,同时可观察到细胞核NF-κB p65表达显著下降。结论:SFN可以增强5-FU的化学治疗效果,二者联合使用的协同抑癌作用对于涎腺腺样囊性癌的临床治疗可能具有实际意义。

TNP-470对人涎腺腺样囊性癌细胞增殖和凋亡的实验研究

目的 研究TNP 470对人涎腺腺样囊性癌细胞 (ACC M)的增殖抑制效应及凋亡诱导作用。方法 采用四氮唑盐还原法 (MTT法 )和台盼蓝拒染法 ,检测药物对ACC M细胞的增殖抑制作用 ;荧光染色观察细胞凋亡变化 ;琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯状条带 ;流式细胞术检测细胞凋亡峰和细胞周期变化。结果 MTT法和台盼蓝拒染法显示 ,TNP 470对ACC M细胞的半数抑制浓度 (IC5 0 )分别为 40 .6 8μg/ml和 46 .38μg/ml;实验用药组荧光染色观察到细胞呈现凋亡特征 ,DNA电泳显示典型的梯状条带 ;流式细胞术检查有明显的凋亡峰出现 ,细胞周期主要阻滞在G2 /M期 ;实验用药组细胞凋亡率明显增高 ,与对照组有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 TNP 470对ACC M细胞体外直接杀伤作用不明显 ,但可诱导ACC M细胞体外凋亡 ,诱导凋亡可能是其抗肿瘤作用机制之一。

不同浓度蒿甲醚对人涎腺腺样囊性癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响及其机制

目的观察不同浓度的蒿甲醚(ART)对人涎腺腺样囊性癌(SACC)细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响,并探讨其机制。方法将SACC细胞系ACC-2分为4组,分别加入125、250、500μg/m L的ART或等量0. 1%DMSO培养液进行培养,记为125μg/m L组、250μg/m L组、500μg/m L组、对照组。采用CCK-8法测算各组细胞增殖率,采用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法测算各组细胞凋亡率,采用Transwell侵袭实验检测各组细胞侵袭能力,采用Transwell迁移实验检测各组细胞迁移能力,采用Western blotting法检测各组细胞HMGB1蛋白。结果培养0、24、48、72、96 h时,125μg/m L组细胞增殖率分别为100. 7%±8. 7%、77. 5%±5. 2%、61. 0%±7. 7%、50. 6%±3. 3%、39. 0%±2. 6%,250μg/m L组细胞增殖率分别为99. 5%±7. 3%、63. 3%±3. 6%、50. 4%±3. 4%、38. 1%±2. 7%、25. 5%±2. 3%,500μg/m L组细胞增殖率分别为101. 5%±2. 4%、56. 0%±2. 9%、38. 2%±3. 7%、28. 9%±2. 3%、11. 0%±2. 4%,对照组细胞增殖率均为100. 0%,各组培养24、48、72、96 h时细胞增殖率相比,P均<0. 01。125μg/m L组、250μg/m L组、500μg/m L组、对照组细胞凋亡率分别为21. 98%±0. 44%、34. 76%±1. 74%、49. 94%±1. 43%、2. 30%±0. 17%,侵袭细胞数目分别为(61±3)、(39±3)、(15±1)、(99±8)个,迁移细胞数分别为(93±13)、(69±3)、(30±3)、(164±16)个,细胞HMGB1蛋白相对表达水平为0. 798±0. 064、0. 667±0. 079、0. 424±0. 019、0. 887±0. 045,上述各指标组间相比,P均<0. 01。结论 125、250、500μg/m L的ART对SACC细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移均可发挥调节作用,ART可能通过下调HMGB1蛋白的表达调控SACC细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移。

METTL3/DUXAP8轴促进涎腺腺样囊性癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究甲基转移酶样3(METTL3)介导的m6A修饰调控双同源盒A假基因8(DUXAP 8)对涎腺腺样囊性癌细胞SACC-LM的增殖、迁移和侵袭能力的影响及其潜在的分子机制。方法:通过肿瘤组织和癌旁组织全转录组测序筛选出差异基因DUXAP 8并进行qRT-PCR验证;采用m6A修饰位点预测网站SRAMP预测DUXAP 8上的m6A修饰位点;qRT-PCR、Western blot检测m6A修饰和上皮-间质转化(EMT)相关基因mRNA及蛋白水平。干扰或过表达METTL3和DUXAP 8,通过CCK-8、划痕、侵袭实验检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力;结合MeRIP-qPCR检测METTL3和DUXAP 8的相关性。结果:DUXAP 8在SACC肿瘤组织的表达显著高于癌旁组织(P<0.05);干扰DUXAP 8可以显著抑制SACC-LM细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及EMT相关基因表达水平(P<0.05);DUXAP 8上存在多个可信度较高的m6A修饰位点;METTL3在肿瘤组织高表达且较其他相关基因差异最为显著(P<0.05);METTL3作为甲基转移酶调控DUXAP 8的表达;下调METTL3可以显著抑制SACC-LM细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并可部分逆转DUXAP 8过表达对这些能力的促进作用(P<0.05)。结论:METTL3介导的m6A修饰上调DUXAP 8的表达,从而促进了SACC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

miR-148a-3p调控EGFR抑制涎腺腺样囊性癌细胞的增殖、侵袭和转移

目的:研究miR-148a-3p对涎腺腺样囊性癌SACC-LM细胞的增殖、侵袭和转移的影响及相关分子机制。方法:将miR-148a-3p模拟物和抑制剂,靶向EGFR的siRNA以及相应对照转染SACC-LM细胞。生物信息学手段分析预测miR-148a-3p的潜在靶基因;qRT-PCR检测miR-148a-3p和EGFR的mRNA表达;Western blot实验检测EGFR的蛋白表达。CCK-8、划痕和Transwell分别用于检测SACC-LM细胞的增殖、迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告基因检测miR-148a-3p与EGFR之间的直接靶向关系;SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。结果:过表达或抑制miR-148a-3p可以显著抑制或促进SACC-LM细胞的增殖、侵袭和转移(P<0.05);生物信息学分析和双荧光素酶实验显示miR-148a-3p可靶向调控EGFR的表达(P<0.001);下调EGFR可以显著抑制SACC-LM细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),并可部分逆转miR-148a-3p抑制剂对这些能力的促进作用(P<0.05)。结论:涎腺腺样囊性癌细胞中miR-148a-3p的下调导致其靶基因EGFR的异常高表达,从而促进了涎腺腺样囊性癌细胞的增殖、侵袭和转移。

miR-24通过调控AKT/β-catenin信号通路及EMT过程对涎腺腺样囊性癌细胞生物学功能的影响及机制

目的:探究微小RNA(microRNA,miR)-24通过调控蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路及上皮间充质转化(epithhelial-mesenchymal transition, EMT)过程对涎腺腺样囊性癌细胞生物学功能的影响及机制。方法:通过收集2021年6月~2024年3月本院收治的60例涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma, SACC)患者。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色检测SACC组织病理类型。培养人SACC细胞系(SACC-83和SACC-LM),通过荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)及实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测SACC组织及细胞中miR-24表达。通过细胞转染将miR-24抑制剂(miR-24 inhibitor)转染至SACC细胞中,通过细胞计数试剂盒-8(cell count kit-8,CCK-8)、克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell实验检测SACC细胞生物学行为,Western blot检测上皮间充质转化(EMT)相关蛋白及AKT/β-catenin信号通路蛋白表达情况。结果:HE染色结果发现,本研究SACC患者癌组织包含3种主要病理类型:实体型、筛状型和管状型。与正常组织相比,miR-24在SACC组织、SACC-83细胞和SACC-LM细胞中高表达,且miR-24在SACC-LM中的表达程度高于SACC-83。miR-24 inhibitor显著抑制SACC-83和SACC-LM的细胞活力、细胞克隆数量、细胞划痕细胞迁移率、迁移、侵袭。miR-24 inhibiotr转染后SACC-83和SACC-LM细胞中上皮细胞钙粘蛋白(epithelial-cadherin, E-cadherin)水平明显升高,而波形蛋白(Vimentin)和神经钙粘蛋白(neural-cadherin, N-cadherin)水平降低。结论:miR-24通过调控AKT/β-catenin信号通路调节SACC细胞增殖、迁移、侵袭及EMT过程。

黄芪注射液对人类小涎腺腺样囊性癌细胞株的抑制作用

目的研究黄芪注射液对人类小涎腺腺样囊性癌(NACC)细胞株的抑制作用。方法以不同浓度的黄芪作用于NACC细胞,应用三磷酸腺苷肿瘤化疗药敏试验(ATPTCA)法测定黄芪注射液对NACC细胞的体外增殖抑制作用;应用PI细胞染色法在流式细胞仪上测定细胞凋亡。结果研究发现作用48h后,黄芪浓度为0.065g·mL-1时已对体外培养的细胞株有抑制作用,NACC抑制率达8%,可高度诱导NACC细胞的凋亡。经黄芪作用的癌细胞在显微镜下表现为细胞稀疏、收缩,胞质拉长。HE染色可见明显的细胞内空泡和细胞出泡等凋亡形态学变化现象。结论黄芪注射液能抑制NACC细胞株增殖并诱导细胞凋亡,有较好的抗癌作用。

吴茱萸碱抑制涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖的实验研究

目的:研究吴茱萸碱对涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖的影响。方法:用终浓度为0.01、0.1、1、10、100μg/ml的吴茱萸碱处理ACC-M 24、48、72 h后,应用MTT比色试验、倒置显微镜、Giemsa染色、Annexin-V-FITC和流式细胞仪检测和观察ACC-M的生长抑制率和凋亡情况。结果:吴茱萸碱(1μg/ml以上)对ACC-M细胞具有时间-浓度依赖性生长抑制作用,最大生长抑制率可达89%。吴茱萸碱可诱导ACC-M细胞凋亡,凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升,各组间有显著差异。吴茱萸碱同时可引起ACC-M细胞坏死。结论:吴茱萸碱可以诱导细胞凋亡和/或坏死,从而抑制涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖。

DNA polβ启动子和CMV启动子调控的p53基因在涎腺腺样囊性癌细胞中表达的比较

目的检测DNA polβ启动子在涎腺腺样囊性癌细胞中的活性,探讨DNA polβ启动子对外源性野生型p53基因表达的影响。方法荧光素酶法测定DNA polβ启动子在涎腺腺样囊性癌细胞中的活性。构建携带人野生型p53基因的真核表达载体,以脂质体法转染涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测p53基因mRNA的表达。博莱霉素、H2O2及紫外线刺激转染细胞,采用RT-PCR及Western blot法比较DNA损伤下DNA polβ启动子和CMV启动子调控的p53基因及P53蛋白的表达。结果荧光素酶活性分析显示,涎腺腺样囊性癌细胞中DNApolβ启动子活性增高。p53基因的导入使其在涎腺腺样囊性癌细胞中表达增强,DNA polβ启动子组较CMV启动子组更为明显。DNA损伤后,DNA polβ启动子组的p53基因和P53蛋白的表达较CMV启动子组增强(P<0.05)。结论在涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞中,DNA polβ启动子的活性增高,DNA polβ启动子能够增强外源性野生型p53基因在涎腺腺样囊性癌细胞中的表达。

涎腺腺样囊性癌细胞转移潜能与细胞外基质的关系

目的 了解不同转移能力的涎腺腺样囊性癌 (salivaryadenoidcysticcarcinoma ,SACC)细胞与细胞外基质粘附、对细胞外基质侵袭及趋化运动的能力。方法 MTT法测定SACC -LM ,SACC - 83,ACC -M ,ACC - 2与纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原的粘附 ,用改良Boydenchamber方法观察了SACC细胞对人工重组基底膜的侵袭以及趋化运动。结果 高转移的SACC -LM与细胞外基质的粘附低于SACC - 83,而ACC -M与细胞外基质的粘附高于ACC - 2。SACC与纤维粘连蛋白的粘附高于和层粘连蛋白、Ⅳ型胶原的粘附。SACC -LM ,ACC -M的侵袭和运动能力强于SACC - 83,ACC - 2。结论 不同转移能力的SACC细胞与细胞外基质的粘附能力不同。高转移潜能的涎腺腺样囊性癌细胞的侵袭能力。

莱菔硫烷对涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖和凋亡的影响

目的:研究莱菔硫烷(SFN)对涎腺腺样囊性ACC-M癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:分别用终浓度为5、10、20、30、40、60、80、100μmol/L的SFN处理ACC-M细胞24、48、72 h。用MTT比色试验和台盼蓝拒染实验检测细胞的增殖和存活情况;倒置显微镜、Giemsa染色、透射电镜观察细胞形态学变化;Annexin-V-FITC和PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:SFN对ACC-M有明显的增殖抑制作用,最高抑制率达89.2%,作用24、48、72 h时的IC50(μmol/L)分别是75.6、21.3、16.5,增殖抑制率与药物浓度和作用时间具有明显的正相关性。SFN可诱导ACC-M细胞凋亡,凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升(P<0.01)。结论:SFN具有抑制涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖和诱导其凋亡的作用,且具有浓度和时间依赖性。

涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的诱导与P53基因的修复

目的 探讨涎腺腺样囊性癌 (salivaryadenoidcysticcarcinoma) p5 3基因的突变以及重组人肿瘤坏死因子α(recombinedhumantumornecrosisfactor-α ,rhTNF -α)诱导凋亡过程中 p5 3基因的修复。 方法 ①在裸鼠移植瘤模型上 ,采用TNF -α 10 0× 10 4IU/kg或 10× 10 4IU/kg瘤体内注射 ,诱导腺样囊性癌移植瘤细胞凋亡 ;②采用DNA核酸序列测定方法 ,对移植瘤及凋亡诱导后的肿瘤分别进行 p5 3基因 6、7、8外显子的测定。 结果 发现腺样囊性癌移植瘤 p5 3基因第 8外显子的第 2 73、2 80号位点有点突变 ,其中 2 73位点为GCA→GCG ;2 80位点为GAG→GAC。第 6、7外显子未见突变。采用TNF -α治疗后 ,第 8外显子的第 2 80号突变位点得以修复正常 ,GAC→GAG ;而 2 73号突变位点未被修复。第 6、7外显子序列无变化。结论 ①涎腺腺样囊性癌发生中 p5 3基因的第2 73、2 80号密码子有点突变 ;②TNF -α可以修复p5 3基因突变中的C :G配对的点突变 ,不能修复A :G碱基的突变 ;③TNF -α对正常基因序列没有影响。