NCAM基因对人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83生长抑制作用的研究

目的探讨NCAM基因对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83体外生长的抑制作用。方法应用电穿孔转染方法将NCAMcDNA转入人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83中,经G418筛选2～3周,用兔抗人NCAM抗体进行免疫组化染色鉴定,然后绘制细胞生长曲线,进行软琼脂培养。结果应用电穿孔方法可成功将NCAM基因转染入人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83中,免疫组化染色鉴定显示转染NCAM的SACC-83细胞有NCAM蛋白的表达。与对照组相比,经NCAM基因转染后的SACC-83细胞增殖明显受到抑制。转染了NCAM基因的SACC-83细胞克隆形成率明显降低。结论NCAM基因对人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83的生长有一定的抑制作用。

维生素D调控GPXs对涎腺腺样囊性癌耐药性的影响

目的:研究维生素D调控谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GPXs)对涎腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma, ACC)耐药性的影响。方法:从佳木斯大学附属口腔医院选取人涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma, SACC)细胞株,将SACC细胞平均分为两份,均放入等量的GPXs,分为对照组和观察组。对照组不做任何其他处理,观察组则给予维生素D溶液。比较两组SACC/DDP细胞中GPXs的含量水平;采用MTT比较两组SACC/DDP细胞的相对抑制率;采用FCM(流式细胞仪)比较两组细胞G0/G1期细胞比例。结果:观察组SACC/DDP细胞中GPXs的含量水平显著低于对照组(P<0.05)。观察组SACC/DDP细胞的Emax、IC50均显著低于对照组(P<0.05)。观察组细胞G0/G1期细胞比例显著低于对照组(P<0.05)。结论:维生素D可达到调控GPXs的含量,进而达到对SACC的耐药性。

吴茱萸碱抑制涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖的实验研究

目的:研究吴茱萸碱对涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖的影响。方法:用终浓度为0.01、0.1、1、10、100μg/ml的吴茱萸碱处理ACC-M 24、48、72 h后,应用MTT比色试验、倒置显微镜、Giemsa染色、Annexin-V-FITC和流式细胞仪检测和观察ACC-M的生长抑制率和凋亡情况。结果:吴茱萸碱(1μg/ml以上)对ACC-M细胞具有时间-浓度依赖性生长抑制作用,最大生长抑制率可达89%。吴茱萸碱可诱导ACC-M细胞凋亡,凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升,各组间有显著差异。吴茱萸碱同时可引起ACC-M细胞坏死。结论:吴茱萸碱可以诱导细胞凋亡和/或坏死,从而抑制涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖。

涎腺腺样囊性癌细胞转移潜能与细胞外基质的关系

目的 了解不同转移能力的涎腺腺样囊性癌 (salivaryadenoidcysticcarcinoma ,SACC)细胞与细胞外基质粘附、对细胞外基质侵袭及趋化运动的能力。方法 MTT法测定SACC -LM ,SACC - 83,ACC -M ,ACC - 2与纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原的粘附 ,用改良Boydenchamber方法观察了SACC细胞对人工重组基底膜的侵袭以及趋化运动。结果 高转移的SACC -LM与细胞外基质的粘附低于SACC - 83,而ACC -M与细胞外基质的粘附高于ACC - 2。SACC与纤维粘连蛋白的粘附高于和层粘连蛋白、Ⅳ型胶原的粘附。SACC -LM ,ACC -M的侵袭和运动能力强于SACC - 83,ACC - 2。结论 不同转移能力的SACC细胞与细胞外基质的粘附能力不同。高转移潜能的涎腺腺样囊性癌细胞的侵袭能力。

莱菔硫烷对涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖和凋亡的影响

目的:研究莱菔硫烷(SFN)对涎腺腺样囊性ACC-M癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:分别用终浓度为5、10、20、30、40、60、80、100μmol/L的SFN处理ACC-M细胞24、48、72 h。用MTT比色试验和台盼蓝拒染实验检测细胞的增殖和存活情况;倒置显微镜、Giemsa染色、透射电镜观察细胞形态学变化;Annexin-V-FITC和PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:SFN对ACC-M有明显的增殖抑制作用,最高抑制率达89.2%,作用24、48、72 h时的IC50(μmol/L)分别是75.6、21.3、16.5,增殖抑制率与药物浓度和作用时间具有明显的正相关性。SFN可诱导ACC-M细胞凋亡,凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升(P<0.01)。结论:SFN具有抑制涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖和诱导其凋亡的作用,且具有浓度和时间依赖性。

METTL3/DUXAP8轴促进涎腺腺样囊性癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究甲基转移酶样3(METTL3)介导的m6A修饰调控双同源盒A假基因8(DUXAP 8)对涎腺腺样囊性癌细胞SACC-LM的增殖、迁移和侵袭能力的影响及其潜在的分子机制。方法:通过肿瘤组织和癌旁组织全转录组测序筛选出差异基因DUXAP 8并进行qRT-PCR验证;采用m6A修饰位点预测网站SRAMP预测DUXAP 8上的m6A修饰位点;qRT-PCR、Western blot检测m6A修饰和上皮-间质转化(EMT)相关基因mRNA及蛋白水平。干扰或过表达METTL3和DUXAP 8,通过CCK-8、划痕、侵袭实验检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力;结合MeRIP-qPCR检测METTL3和DUXAP 8的相关性。结果:DUXAP 8在SACC肿瘤组织的表达显著高于癌旁组织(P<0.05);干扰DUXAP 8可以显著抑制SACC-LM细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及EMT相关基因表达水平(P<0.05);DUXAP 8上存在多个可信度较高的m6A修饰位点;METTL3在肿瘤组织高表达且较其他相关基因差异最为显著(P<0.05);METTL3作为甲基转移酶调控DUXAP 8的表达;下调METTL3可以显著抑制SACC-LM细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并可部分逆转DUXAP 8过表达对这些能力的促进作用(P<0.05)。结论:METTL3介导的m6A修饰上调DUXAP 8的表达,从而促进了SACC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

miR-148a-3p调控EGFR抑制涎腺腺样囊性癌细胞的增殖、侵袭和转移

目的:研究miR-148a-3p对涎腺腺样囊性癌SACC-LM细胞的增殖、侵袭和转移的影响及相关分子机制。方法:将miR-148a-3p模拟物和抑制剂,靶向EGFR的siRNA以及相应对照转染SACC-LM细胞。生物信息学手段分析预测miR-148a-3p的潜在靶基因;qRT-PCR检测miR-148a-3p和EGFR的mRNA表达;Western blot实验检测EGFR的蛋白表达。CCK-8、划痕和Transwell分别用于检测SACC-LM细胞的增殖、迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告基因检测miR-148a-3p与EGFR之间的直接靶向关系;SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。结果:过表达或抑制miR-148a-3p可以显著抑制或促进SACC-LM细胞的增殖、侵袭和转移(P<0.05);生物信息学分析和双荧光素酶实验显示miR-148a-3p可靶向调控EGFR的表达(P<0.001);下调EGFR可以显著抑制SACC-LM细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),并可部分逆转miR-148a-3p抑制剂对这些能力的促进作用(P<0.05)。结论:涎腺腺样囊性癌细胞中miR-148a-3p的下调导致其靶基因EGFR的异常高表达,从而促进了涎腺腺样囊性癌细胞的增殖、侵袭和转移。

基质金属蛋白酶-1在人涎腺腺样囊性癌细胞中的表达

目的:测定基质金属蛋白酶-1(MMP-1)在人涎腺腺样囊性癌不同转移力细胞系中的表达。方法:以人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞系及其高转移株ACC-M作为研究肿瘤转移分子机制的模型,采用免疫组化法和蛋白印迹(Western blot)法检测MMP-1的蛋白表达水平。结果:MMP-1在ACC-M细胞中的表达水平高于ACC-2细胞。结论:MMP-1在人涎腺腺样囊性癌的侵袭转移过程中可能发挥作用。

miR-24通过调控AKT/β-catenin信号通路及EMT过程对涎腺腺样囊性癌细胞生物学功能的影响及机制

目的:探究微小RNA(microRNA,miR)-24通过调控蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路及上皮间充质转化(epithhelial-mesenchymal transition, EMT)过程对涎腺腺样囊性癌细胞生物学功能的影响及机制。方法:通过收集2021年6月~2024年3月本院收治的60例涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma, SACC)患者。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色检测SACC组织病理类型。培养人SACC细胞系(SACC-83和SACC-LM),通过荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)及实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测SACC组织及细胞中miR-24表达。通过细胞转染将miR-24抑制剂(miR-24 inhibitor)转染至SACC细胞中,通过细胞计数试剂盒-8(cell count kit-8,CCK-8)、克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell实验检测SACC细胞生物学行为,Western blot检测上皮间充质转化(EMT)相关蛋白及AKT/β-catenin信号通路蛋白表达情况。结果:HE染色结果发现,本研究SACC患者癌组织包含3种主要病理类型:实体型、筛状型和管状型。与正常组织相比,miR-24在SACC组织、SACC-83细胞和SACC-LM细胞中高表达,且miR-24在SACC-LM中的表达程度高于SACC-83。miR-24 inhibitor显著抑制SACC-83和SACC-LM的细胞活力、细胞克隆数量、细胞划痕细胞迁移率、迁移、侵袭。miR-24 inhibiotr转染后SACC-83和SACC-LM细胞中上皮细胞钙粘蛋白(epithelial-cadherin, E-cadherin)水平明显升高,而波形蛋白(Vimentin)和神经钙粘蛋白(neural-cadherin, N-cadherin)水平降低。结论:miR-24通过调控AKT/β-catenin信号通路调节SACC细胞增殖、迁移、侵袭及EMT过程。

线粒体在埃克替尼诱导涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M细胞凋亡中的作用

目的利用涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M细胞为模型,研究不同浓度埃克替尼(icotinib)对涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M细胞凋亡的影响以及线粒体在icotinib诱导ACC-M细胞凋亡中的作用。方法 icotinib和P53抑制剂(PFT)分别处理ACC-M细胞,应用噻唑蓝比色法检测细胞活性,利用Western blot法检测P53和胞质内细胞色素C(Cyt C)蛋白的表达变化,用Caspase-3凋亡相关蛋白活力检测ACC-M细胞的凋亡情况。结果 icotinib可抑制ACC-M细胞的活性,增加胞质Cyt C蛋白的表达和P53在线粒体的转位并诱导ACC-M细胞凋亡。用PFT预处理后,icotinib诱导ACC-M细胞的凋亡明显下降,线粒体蛋白P53的表达降低,胞质内Cyt C表达减少,Caspase-3凋亡相关蛋白活力下降。结论 icotinib可能通过诱导P53转位到线粒体进而促进ACC-M细胞凋亡。

白藜芦醇与涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖及凋亡的相关性研究

目的探讨白藜芦醇与涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖及凋亡的相关性。方法使用终浓度各为12.5、25、50、100和200μmol/L的白藜芦醇处理ACC-M24、48、72 h,并用MTT比色、倒置显微镜观察、光镜观察、流式细胞仪检测并观察ACC-M细胞增殖及凋亡状况。结果白藜芦醇对ACC-M生长成时间-浓度依赖性抑制,最大抑制率可达92.6%。白藜芦醇对ACC-M凋亡有诱导作用,凋亡率与经白藜芦醇作用时间及作用浓度呈正相关(P<0.05)。白藜芦醇可造成ACC-M坏死。结论白藜芦醇通过诱导涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M凋亡及坏死,抑制ACC-M增殖。

PPARγ蛋白在人肺高、低转移涎腺腺样囊性癌细胞系中的作用

目的探讨过氧化物增殖体激活物受体γ(PPARγ)在涎腺腺样囊性癌(SACC)肺转移细胞中的表达及其与转移的关系。方法利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时定量PCR(Quantitative Real-time PCR)方法检测肺高转移性涎腺腺样囊性癌(SACC-LM)及肺低转移性涎腺腺样囊性癌(SACC-83)细胞系中PPARγmRNA的表达水平。结果 SACC-LM细胞系中PPARγmRNA表达水平是SACC-83细胞中表达水平的4.346939倍(P<0.01)。结论PPARγ在SACC肺高低转移细胞系中的差异表达,初步证实PPARγ在SACC远处转移方面有重要作用。

白血病抑制因子受体在人涎腺腺样囊性癌细胞系中的表达

目的 :探讨白血病抑制因子受体 (LIFR)与人涎腺腺样囊性癌转移的相关性。方法 :以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC 2及其肺高转移株ACC M作为研究肿瘤转移分子机制的模型 ,应用RT PCR技术和免疫组化方法检测LIFR的表达。结果 :RT PCR检测表明LIFRmRNA在肺高转移细胞株ACC M细胞中的表达低于在ACC 2细胞中的表达 ,免疫组化检测表明LIFR蛋白在ACC M细胞中表达降低。结论 :LIFR在涎腺腺样囊性癌转移过程中可能发挥抑制作用。

腺病毒介导的P^(53)基因对涎腺腺样囊性癌细胞系生长的影响

目的研究P53基因对涎腺腺样囊性癌细胞系生长的影响。方法以人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83、SACC-LM、ACC-2、ACC-M和NACC为实验对象,将载有人野生型P53cDNA的重组腺病毒(Ad5CMV-P53)感染涎腺腺样囊性癌细胞系,观察Ad5CMV-P53对涎腺腺样囊性癌细胞生长的影响。结果5种涎腺腺样囊性癌细胞系转染Ad5CMV-P53病毒后,均可以诱导其发生凋亡,使细胞系生长受到明显的抑制。结论Ad5CMV-P53介导的野生型P53基因,可能是一种有效的治疗涎腺腺样囊性癌的辅助手段。

TROP2蛋白在涎腺腺样囊性癌中的表达及与患者预后的关系

目的 探讨滋养层细胞表面抗原2(trophoblast cell-surface antigens 2,TROP2)在涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)中的表达,并分析其与临床病理特征之间的关系,明确TROP2的表达与SACC患者预后的相关性。方法 本研究获得单位伦理委员会的批准,采用免疫组织化学方法检测TROP2在85例SACC组织及各自癌旁组织中的表达情况,分析其表达情况与临床病理特征的关系;利用Kaplan-Meier法对40例SACC患者进行TROP2蛋白表达与患者术后五年无病生存期(disease-free survival,DFS)的关系分析;同时,采用Logistic回归模型分析影响SACC患者预后的因素。结果 TROP2在SACC组织中的低表达或不表达率显著高于癌旁组织(P<0.001);TROP2低表达或不表达与SACC患者肿瘤的生长以及临床分期呈显著正相关性(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示:TROP2蛋白低表达或不表达的SACC患者的DFS显著低于高表达患者(P<0.05),预后不良。Logistic回归模型预后分析显示:TROP2蛋白低表达或不表达(OR=5.37;95%CI:1.03~28.08;P=0.046)与Ⅲ-Ⅳ临床分期(OR=6.89;95%CI:1.37~34.77;P=0.019)均为影响SACC患者预后的危险因素。结论 TROP2蛋白在SACC组织中低表达或不表达,患者预后不良,与肿瘤的生长、临床分期呈正相关,且TROP2低表达或不表达可作为SACC患者预后不良的独立危险因素,TROP2为SACC患者预后不良的标志物。

黄芪注射液对人类小涎腺腺样囊性癌细胞株的抑制作用

目的研究黄芪注射液对人类小涎腺腺样囊性癌(NACC)细胞株的抑制作用。方法以不同浓度的黄芪作用于NACC细胞,应用三磷酸腺苷肿瘤化疗药敏试验(ATPTCA)法测定黄芪注射液对NACC细胞的体外增殖抑制作用;应用PI细胞染色法在流式细胞仪上测定细胞凋亡。结果研究发现作用48h后,黄芪浓度为0.065g·mL-1时已对体外培养的细胞株有抑制作用,NACC抑制率达8%,可高度诱导NACC细胞的凋亡。经黄芪作用的癌细胞在显微镜下表现为细胞稀疏、收缩,胞质拉长。HE染色可见明显的细胞内空泡和细胞出泡等凋亡形态学变化现象。结论黄芪注射液能抑制NACC细胞株增殖并诱导细胞凋亡,有较好的抗癌作用。

DNA polβ启动子和CMV启动子调控的p53基因在涎腺腺样囊性癌细胞中表达的比较

目的检测DNA polβ启动子在涎腺腺样囊性癌细胞中的活性,探讨DNA polβ启动子对外源性野生型p53基因表达的影响。方法荧光素酶法测定DNA polβ启动子在涎腺腺样囊性癌细胞中的活性。构建携带人野生型p53基因的真核表达载体,以脂质体法转染涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测p53基因mRNA的表达。博莱霉素、H2O2及紫外线刺激转染细胞,采用RT-PCR及Western blot法比较DNA损伤下DNA polβ启动子和CMV启动子调控的p53基因及P53蛋白的表达。结果荧光素酶活性分析显示,涎腺腺样囊性癌细胞中DNApolβ启动子活性增高。p53基因的导入使其在涎腺腺样囊性癌细胞中表达增强,DNA polβ启动子组较CMV启动子组更为明显。DNA损伤后,DNA polβ启动子组的p53基因和P53蛋白的表达较CMV启动子组增强(P<0.05)。结论在涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞中,DNA polβ启动子的活性增高,DNA polβ启动子能够增强外源性野生型p53基因在涎腺腺样囊性癌细胞中的表达。

涎腺腺样囊性癌高低转移细胞系mRNA及蛋白质表达谱差异研究

转移性和侵袭性是恶性肿瘤的重要特征 ,与基因和蛋白质水平上一系列改变密切相关 .应用mRNA抑制性消减杂交技术和双向电泳结合肽质量指纹分析技术 ,对涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞系的mRNA和蛋白质表达谱的差异性进行比较研究 .实验结果显示 ,在抑制性消减杂交中 ,分别以两个细胞系为测试子 ,共获得差异片段 34个 ,其中高转移株细胞中高表达的基因序列有 6个 ,低转移细胞系中有 2 8个 ,其中包括两个新的表达序列标签 (EST) .对这些基因序列 ,进一步以RNA斑点杂交对这些基因的表达状况进行验证并排除假阳性结果 ,结果发现 ,32个基因在mRNA水平上有不同程度的表达量改变 ,改变趋势与消减杂交结果一致 .以蛋白质等电聚焦结合SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳的双向电泳技术获得的总蛋白质分离 ,经PDQuest2DE软件分析结果表明 ,高转移细胞系表达谱的平均蛋白质点数为 (978± 38) ,低转移细胞系的平均蛋白质点数为 (996± 2 7) .其中高转移细胞与低转移细胞相比 ,其蛋白质点有 35 5个未被匹配 ,低转移细胞相比高转移细胞有 2 2 2个未被匹配 .对其中 10个差异较明显的蛋白质点 ,进一步进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)测定肽质量指纹图谱 ,用Peptident软件对SWISSPROT数据库比较分析 ,结果显示 。

人类小涎腺腺样囊性癌NACC细胞系的建立及腺样囊性癌生物学特性的研究

目的:建立一个人类腭部涎腺腺样囊性癌细胞系并对其生物学特性作进一步探讨。方法:取人腭部小涎腺腺样囊性癌组织经原代培养并传代成系,命名为NACC细胞系。采用免疫组化法对NACC细胞系及另一涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83行多种细胞中间丝染色。结果:NACC细胞为亚三倍体核型、单层贴壁生长的上皮癌细胞系,异种接种可致瘤。NACC及SACC-83细胞均有抗keratin,GFAP,EMA,smoothmuscleactin,vimentin,S-100蛋白不同程度阳性。结论:NACC细胞系生长稳定,为源自干细胞的不同分化程度和发育周期的癌细胞所组成的细胞群体,可能含有肿瘤性闰管细胞、肌上皮细胞及未分化的多潜能干细胞等细胞成分,保持了腺样囊性癌的大部分特性。行体内、外试验时能较好地反映该类肿瘤的生物学特性。

涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的诱导与P53基因的修复

目的 探讨涎腺腺样囊性癌 (salivaryadenoidcysticcarcinoma) p5 3基因的突变以及重组人肿瘤坏死因子α(recombinedhumantumornecrosisfactor-α ,rhTNF -α)诱导凋亡过程中 p5 3基因的修复。 方法 ①在裸鼠移植瘤模型上 ,采用TNF -α 10 0× 10 4IU/kg或 10× 10 4IU/kg瘤体内注射 ,诱导腺样囊性癌移植瘤细胞凋亡 ;②采用DNA核酸序列测定方法 ,对移植瘤及凋亡诱导后的肿瘤分别进行 p5 3基因 6、7、8外显子的测定。 结果 发现腺样囊性癌移植瘤 p5 3基因第 8外显子的第 2 73、2 80号位点有点突变 ,其中 2 73位点为GCA→GCG ;2 80位点为GAG→GAC。第 6、7外显子未见突变。采用TNF -α治疗后 ,第 8外显子的第 2 80号突变位点得以修复正常 ,GAC→GAG ;而 2 73号突变位点未被修复。第 6、7外显子序列无变化。结论 ①涎腺腺样囊性癌发生中 p5 3基因的第2 73、2 80号密码子有点突变 ;②TNF -α可以修复p5 3基因突变中的C :G配对的点突变 ,不能修复A :G碱基的突变 ;③TNF -α对正常基因序列没有影响。