猪ZP4B细胞表位人源化定点突变

目的 :对编码猪ZP4的cDNA序列进行人源化定点突变 ,使原来编码LDPENLTL八肽表位的序列突变成编码相应人卵透明带上LDPEKLTL序列 ,同时保持其他序列不变。方法 :采用PCR重叠延伸法 ,连续进行 3次PCR ,对PZP4B细胞LD PENLTL八肽表位进行定点突变。第 3次PCR以前两次PCR的产物为模板 ,最终得到所需的突变体hpZP4和dpZP4。结果 :突变后的cDNA序列通过重组DNA技术 ,在突变体片段 5′及 3′末端分别引入SalI和NcoI内切酶位点 ,使其克隆入pBV2 2 1表达质粒中 ,制成hpZP4 pBV2 2 1,pZP4 pBV2 2 1和dpZP4 pBV2 2 1重组质粒。经测序 ,证明均为目的序列。结论 :通过定点突变产生人源化猪ZP4B细胞表位是可行的。研究将为人类克隆并制备新的人卵透明带避孕疫苗奠定基础。