人源化CD25单克隆抗体对外周血T淋巴细胞活化和增殖的影响

本研究探讨人源化重组CD25单克隆抗体(rhCD25MAb)对外周血T淋巴细胞活化、增殖的影响。应用植物血凝素(PHA)刺激外周血单个核细胞,不加或同时加rhCD25MAb或环孢菌素A(CsA)进行体外培养,或先用PHA刺激T细胞活化后再加入rhCD25MAb继续进行培养。用MTT法检测淋巴细胞增殖率;流式细胞术检测T淋巴细胞表面抗原CD3、CD25的表达;ELISA方法检测细胞培养上清液中可溶性IL-2R(sIL-2R)水平。结果显示:rh-CD25MAb和CsA均能有效抑制PHA活化的T细胞的增殖,且随浓度的升高而增强,总体比较,CsA对T细胞的增殖抑制作用更强。虽然CsA和rhCD25MAb均能降低细胞培养上清中的sIL-2R的水平及CD25+/CD3+的比例,但rhCD25MAb的作用明显强于CsA。rhCD25MAb无论是在T细胞活化前还是活化后均能抑制T细胞表达CD25抗原和分泌sIL-2R。结论:rhCD25MAb具有很强的免疫抑制作用,它能抑制T细胞活化及抑制活化的T细胞增殖,临床上它不仅可用于治疗急性移植物抗宿主病(aGVHD),还可用于预防aGVHD。

抗人表皮生长因子受体2人源化单克隆抗体在中国仓鼠卵巢细胞中的表达、纯化及活性测定

目的筛选得到稳定表达重组人源化抗HER2单克隆抗体(rhHER2-mAb)的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)最优表达株,采用旋转振荡式培养及小规模放大,测定纯化后抗体蛋白的活性和亲和力。方法使用一次性旋转振荡生物反应器——Tube-spin对细胞株进行高通量筛选,然后使用摇瓶进行规模放大培养,利用Protein A亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、HPLC检测产物的纯度,夹心ELISA检测产物的表达量,MTT检测产物的活性。结果通过比较,确定产量最高的#38细胞克隆株,经过规模放大培养得到足量细胞上清液,摇瓶表达量达到(152±20)mg.L-1。纯化后经检测目的蛋白的相对分子质量约为150×103,纯度在96%以上,与商品化的赫赛汀一致;活性检测和亲和力检测也显示其活性和亲和力与赫赛汀相当。结论通过细胞株筛选得到高表达细胞株,经旋转振荡式放大培养,成功纯化获得抗体蛋白,与商品化药物性质一致,为大规模旋转振荡培养发酵奠定基础。

抗HER2单抗关键质量属性研究

目的:对国产抗人类表皮生长因子受体2(HER2)单抗部分关键质量属性进行质量研究,并建立质量控制方法。方法:根据曲妥珠的产品特性和作用机制,对质量属性进行评估分级,以7批原研曲妥珠为对照,检测7批国产抗HER2单抗部分关键质量属性。利用离子交换色谱检测电荷异质性;通过BT474细胞增殖抑制法检测生物学活性;利用生物膜干涉技术检测抗原抗体亲和力、单抗与FcRn亲和力以及利用表面等离子共振技术检测单抗与FcγRⅢa亲和力;利用差示扫描量热检测热稳定性。结果:7批原研曲妥珠的离子交换色谱主峰面积百分比、生物学活性EC50值的Mean±3SD分别为(73.87±2.21)%、(0.20±0.06)μg·mL^(-1),7批国产抗HER2单抗相应检测结果分别为(73.54±3.24)%,(0.20±0.05)μg·mL^(-1)。原研曲妥珠抗原抗体亲和力、单抗与FcγRⅢa亲和力及单抗与FcRn亲和力的平衡常数值(K_(D))分别为1×10^(-10)、1×10^(-6)、1×10^(-7),7批国产抗HER2单抗相应检测结果分别为1×10^(-10)、1×10^(-6)、1×10^(-7)。国产抗HER2单抗与原研曲妥珠热稳定性图谱一致。结论:本研究建立了抗HER2单抗关键质量属性研究方法,为该类国产单抗质量控制提供参考依据。

^(125)I标记重组全人源抗表皮生长因子受体单克隆抗体的制备及其在荷瘤裸鼠体内的分布

目的研究;^(125)I标记重组全人源抗表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内的生物分布。方法以Iodogen法进行重组全人源抗EGFR单克隆抗体的;^(125)I标记,分离纯化。组织分布实验:荷瘤裸鼠静脉注射^(125)I-重组全人源抗EGFR单克隆抗体24 mg·kg^(-1),分别在药后4,24,72,168 h(每个时间点各5只鼠)于股动脉放血活杀,取主要脏器及体液称重并测量其放射性计数。粪尿排泄实验:6只荷瘤裸鼠静脉注射^(125)I-重组全人源抗EGFR单克隆抗体24 mg·kg^(-1),在给药后0~24,24~48……264~312 h时间段分别收集尿和粪,并测量其放射性计数。胆汁排泄实验:6只SD大鼠给予^(125)I-重组全人源抗EGFR单克隆抗体12 mg·kg^(-1),给药后于1,3,5,8,12 h收集一次胆汁测量其放射性计数。放射免疫显像实验:2只荷瘤裸鼠静脉注射^(125)I-重组全人源抗EGFR单克隆抗体0.5 mci,分别在4,24,72,168 h用单光子发射计算机断层成像术(SPECT)进行放射免疫显像。结果血中暴露水平为3681μg·h·mL^(-1)(最高),血流灌注丰富的组织器官的放射性较高,并且药物在肿瘤部位有明显蓄积,达到了2168μg·h·g^(-1)。312 h尿、粪分别排出注入放射性量的(70.08±6.15)%和(6.03±0.54)%,药物主要经尿排泄。注射后12 h的累积排泄率为(0.34±0.07)%。胆汁中未发现药物原形和放射性小分子代谢产物。各组织放射性浓度逐渐下降,而肿瘤部位的放射性浓度则逐渐增加。结论^(125)I-重组全人源抗EGFR单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内具有肿瘤靶向定位能力,主要通过肾代谢。

重组抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体酸性异构体去除工艺的优化

目的优化重组抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单克隆抗体纯化工艺中去除酸性异构体的条件。方法考察重组抗HER2单克隆抗体在阳离子交换层析工艺过程中的洗脱方式、预洗缓冲液pH、预洗缓冲液盐浓度、预洗体积、填料负载抗体量等条件对酸性异构体去除效果的影响,筛选最适工艺条件。采用最适条件对中试放大工艺的4批重组抗HER2单克隆抗体进行检测,验证其适用性。结果最适工艺条件为:纯化上样填料负载抗体量应≥60 g/L;在上样/淋洗后添加pH 8.0的20 mmol/L Tris-HCl及15 mmol/L NaCl(电导率为3.0 mS/cm),3倍柱体积预洗;预洗后用平衡缓冲液再平衡5倍柱体积,之后一步洗脱。该工艺条件能将目的组分含量从工艺优化前的53%提高至65%,酸性异构体含量从工艺优化前的35%降至25%以下,电荷分布与原研对照药一致;4批中试样品中抗体负载量≥60 g/L的3批放大验证结果达到原研对照药相关质量指标要求。结论优化的阳离子交换层析去除酸性异构体工艺简单有效、易操作,适用于中试放大工艺。

抗表皮生长因子受体全人单克隆抗体Ranti-HER的抗肿瘤药理作用研究

目的考察抗表皮生长因子受体全人单克隆抗体Ranti-HER单用及联合用药对裸鼠人癌移植瘤的抑制作用,探讨其抑制作用是否与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达有关。方法采用流式细胞术定性人源肿瘤细胞EGFR的表达程度,建立人源肿瘤细胞裸鼠皮下移植瘤模型,然后分组给药,以相对肿瘤增值率评估其抗肿瘤有效性。结果人鳞状细胞癌A431细胞为EGFR高表达细胞,人结肠癌HT29和SW948细胞对EGFR低表达,人结肠癌SW620细胞对EGFR为阴性表达。给予不同剂量Ranti-HER(0.25、0.5、1 mg·只-1,biw×3)能显著抑制A431移植瘤的生长,并表现出一定的剂量相关性;与多柔比星(125μg·只-1,qd×2)合用后呈现联合抗肿瘤作用。Ranti-HER 1.0 mg(biw×3)能明显延缓SW948移植瘤的生长,与伊立替康联合应用,抑制肿瘤生长作用表现出相加的趋势。对于HT29和SW620移植瘤,Ranti-HER1.0 mg(biw×3)未见明显抑瘤作用。结论 Ranti-HER单独应用能抑制裸鼠人癌移植瘤的生长,其抑制作用与EGFR的表达水平有一定相关性,Ranti-HER与其他化疗药物联合应用,具有协同抗肿瘤作用。

曲妥珠单抗联合吡咯替尼治疗HER-2阳性晚期乳腺癌的疗效

【目的】探讨曲妥珠单抗和吡咯替尼治疗人类表皮生长因子受体-2(HER-2)阳性晚期乳腺癌患者的疗效。【方法】62例HER-2阳性的局部原发晚期乳腺癌患者,随机分为两组,每组31例。对照组予以曲妥珠单抗治疗,观察组在此基础上联合吡咯替尼治疗。比较两组患者治疗4个月后的疗效、血清肿瘤标志物水平及药物不良反应。【结果】观察组客观缓解率高于对照组(P<0.05);两组疾病控制率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前,两组患者的血清多肽特异抗原(TPS)、糖类抗原15-3(CA15-3)、癌胚抗原(CEA)水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组血清TPS、CEA及CA15-3水平较治疗前均降低(P<0.05),且观察组均低于对照组(P<0.05)。观察组胃肠道反应发生率高于对照组(P<0.05)。随访24个月内,对照组中位无进展生存时间(PDF)为14个月;观察组中位PDF为17个月,两组PDF生存曲线比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】曲妥珠单抗和吡咯替尼联合治疗HER-2阳性晚期乳腺癌患者,有助于提高客观缓解率,降低血清肿瘤标志物表达水平,但对24个月的PDF影响较小。

抗HER3单克隆抗体的人源化及成药性初步评价

目的构建人源化抗人表皮生长因子受体3(human epidermal growth factor receptor 3,HER3)单克隆抗体(单抗)并对其成药性进行初步评估。方法通过互补决定区(complementarity-determining region,CDR)移植对鼠抗HER3单抗进行人源化,然后对骨架区一些位点氨基酸进行回复突变以恢复人源化抗体的亲和力。对重组表达的人源化抗体用聚乙二醇沉淀法检测其在不同缓冲液中的溶解度,并通过测定内源荧光评估其高级结构。结果经CDR移植及回复突变的抗HER3人源化抗体具有与嵌合抗体相当的亲和力,且人源化抗体具有较好的溶解度及典型的抗体内源荧光特性。结论成功人源化了鼠抗HER3单抗,人源化后的抗体具有开发成临床药物的潜力。

重组抗HER2人源化单克隆抗体联合长春瑞滨治疗HER2阳性转移性乳腺癌随机对照Ⅲ期临床研究

目的评价注射用重组抗人表皮生长因子受体2(HER2)人源化单克隆抗体(赛普汀)联合长春瑞滨用于HER2阳性转移性乳腺癌的临床疗效和安全性。方法受试者按2∶1比例随机至试验组和对照组,试验组接受赛普汀(首剂4 mg/kg,维持剂量每周2 mg/kg,静脉滴注)联合长春瑞滨(25 mg/m^2,第1,8,15天/28天,静脉滴注)治疗;对照组接受长春瑞滨(25 mg/m^2,第1,8,15天/28天,静脉滴注)化疗。主要研究终点为无进展生存期(PFS)。结果 2009年1月至2013年1月期间共纳入受试者315例(试验组212例,对照组103例)。试验组较对照组中位PFS显著延长,为39.1周比14.0周(HR=0.24;95%CI,0.16-0.36;P<0.000 1)。试验组客观缓解率(ORR)和疾病控制率(DCR)较对照组均显著提高,ORR为46.7%比18.45%(P<0.000 1),DCR为79.72%比45.63%(P<0.000 1)。中性粒细胞减少、白细胞减少和红细胞减少在两组发生率均较高,但组间差异无统计学意义。与赛普汀相关的不良反应最常见的为输注反应。共5例受试者治疗中心脏左室射血分数降低至低于50%,均可恢复,未出现严重心脏毒性。结论赛普汀联合长春瑞滨具有显著疗效和良好安全性,是用于紫杉类治疗后的HER2阳性晚期乳腺癌的优选方案,为中国HER2阳性乳腺癌患者提供了更多靶向治疗机会。

抗HER2人源化单克隆抗体药物关键质量属性评价

目的对一种用于治疗人类表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌的抗人类表皮生长因子受体2人源化单克隆抗体靶向生物制剂的关键质量属性进行多维度评价研究。方法采用高效液相色谱、毛细管电泳、动态光散射、圆二色谱、差示扫描量热技术、液质联用技术、体外活性实验以及表面等离子共振(SPR)技术分别对抗人类表皮生长因子受体2抗体的纯度、杂质、结构、活性等关键质量属性进行多维度分析。结果该抗体的单体纯度>98%,聚体杂质<2%;免疫球蛋白轻重链电泳纯度>97%,非糖重链杂质<1%;与参比生物制剂可比的圆二扫描图谱、二级结构预测结果和去折叠温度,N-糖修饰位点、种类和各糖分布比例与参比生物制剂高度相似;BT474增殖抑制活性、抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用活性、抗原抗体亲和力、Fc受体亲和力等活性相关质量属性与参比生物制剂均无显著差异。结论该抗体高纯度、低杂质特性暗示其产品均一性和较低的安全风险,与参比生物制剂高度相似的高级结构、糖基化修饰和生物功能也从多个角度得到证实,这些正向质量评价是开展临床实验研究的前提,同时从某种程度上可以与临床安全和疗效指针建立关联。

HER-2阳性乳腺癌患者应用赫赛汀联合化疗的护理体会

乳腺癌患者中约有20%～30%可见人类表皮生长因子受体2（HER-2）基因的扩增及其编码蛋白的过度表达,提示乳腺癌的恶性程度高且预后不良。赫赛汀通用名为注射用曲妥珠单抗,是一种重组DNA衍生的人源化单克隆抗体,可选择性地作用于肿瘤细胞膜表面的HER-2[1]。多项临床试验证明,赫赛汀对于HER-2过度表达的乳腺癌患者有着确，

基于报告基因的抗HER2单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立及应用

目的:利用转基因细胞法建立抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单抗的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)生物学活性检测方法。方法:利用Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT转基因细胞系作为效应细胞,SKBR3细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BioGloTM Luciferase Assay system)进行抗HER2单抗的ADCC生物学活性检测,同时对试验条件进行优化及方法学验证,并将该检测方法用于不同类型的抗HER2单抗ADCC效应的评价。结果:抗HER2单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(x/C)~B]+D,方法经优化后确定靶细胞为SKBR3细胞,抗体稀释起始工作质量浓度为4 000 ng·mL^(-1),1∶4倍的稀释倍数,效靶比为15∶1,诱导时间为20 h。该方法具有良好的专属性;3次独立检测的板间、日间最大诱导倍数(fold of induction,FI)及半数有效浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC50)的RSD均小于10%; 4个不同稀释组回收率样本经3次测定,相对效价分别为(46.27±2.01)%、(71.18±1.55)%、(133.17±9.91)%以及(166.55±15.73)%;对应的回收率分别为(92.53±4.01)%、(94.91±2.07)%、(106.54±7.93)%、(111.04±10.48),RSD均小于10%,且该方法也适用于不同变性程度及各类抗HER2单抗的ADCC效应评价。结论:本研究利用转基因细胞法成功建立抗HER2单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗HER2单抗ADCC生物学活性的常规检测方法。

Her-2阳性乳腺癌临床诊疗专家共识

肿瘤分子靶向治疗,是将肿瘤细胞表达而正常细胞较少表达或不表达的特定基因或基因的表达产物作为治疗靶点,以最大程度杀死肿瘤细胞而对正常细胞伤害较小的治疗模式.人表皮生长因子受体2（human epidemal receptor 2,Her-2）是乳腺癌明确的预后指标和药物治疗效果的预测指标[1].作为第一个靶向Her-2的人源化单克隆抗体,曲妥珠单抗的问世改善了Her-2阳性乳腺癌患者的预后,影响了乳腺癌的诊治模式,是乳腺癌药物治疗的重要突破[2].2007年,拉帕替尼作为晚期乳腺癌二线治疗药物也在欧美批准上市.为了更好地推广规范的Her-2检测,准确评估乳腺癌患者预后,最大程度地发挥Her-2靶向药物治疗的疗效,减少治疗盲目性,使更多患者获益,

曲妥珠单抗治疗乳腺癌致精神症状1例报告

曲妥珠单抗是一种重组DNA人源化单克隆抗体，可选择性的与人表皮生长因子受体-2（HER2）基因调控的细胞表面p185糖蛋白结合，从而阻止胞内酪氨酸激酶的激活，抑制HER2依赖性肿瘤细胞的增殖与存活。其常见不良反应有过敏反应、心脏毒性、皮疹、腹泻等。我们在临床工作中遇到1例曲妥珠单抗治疗乳腺癌导致严重精神症状的患者。现报告如下。

曲妥珠单抗治疗转移性胃癌研究进展

随着人们生活方式的改变、饮食结构的变化及其他因素的影响,胃癌已成为临床中的常见病。目前,我国胃癌的发病率和死亡率已经上升为癌症第二位,有调查显示2008年我国胃癌的发病率为16.5%,死亡率为18.0%[1]。虽然手术治疗、放疗和化疗的综合治疗方式能够提高临床疗效,但多数胃癌患者在确诊时已经是中晚期,经过治疗后,仅能够将生存期延长为3~9个月[2]。在相关研究中发现人类表皮生长因子受体2(HER-2)与胃癌的预后差有一定的关系。曲妥珠单抗是人源化单克隆抗体,与HER-2所具备的特异性相结合可抑制肿瘤的产生[3]。我国卫生部于2012年批准曲妥珠单抗在HER-2阳性的转移性胃癌中应用。本研究就曲妥珠单抗治疗转移性胃癌的临床疗效进展进行阐述,旨在为临床治疗提供参考。

IL-15与IL-21细胞因子组合优化临床级人NK细胞培养体系

目的探讨IL-15、IL-21细胞因子组合建立的临床级人NK细胞培养体系对NK细胞增殖、免疫细胞表型和细胞毒作用的影响。方法分离9例健康志愿者外周血单个核细胞(PBMCs),根据以下3组进行扩增培养:(1)对照组(我科临床级人NK细胞培养体系),(2)IL-15组(对照组+IL-15),(3)IL-15/IL-21组(对照组+IL-15+IL-21)。台盼蓝拒染法计数细胞总数和活力;流式细胞术分析免疫细胞表型和NK细胞活化受体表达;乳酸脱氢酶释放法检测细胞毒活性。结果培养至14 d,IL-15/L-21组细胞总数明显升高,NK细胞增殖倍数达到(761.68±449.30)倍,明显高于IL-15组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-15/IL-21组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。3组培养物中CD3^-/CD56^+细胞百分率比较,IL-15/IL-21组和IL-15组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但IL-15/IL-21组和IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组中CD3^+/CD4^+细胞百分率均呈下降趋势,且IL-15/IL-21组和IL-15组明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但IL-15/IL-21组和IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组中总CD3^+细胞百分率比较,IL-15组明显低于对照组(P<0.05),但IL-15/IL-21组和IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。IL-15/IL-21组NKG2D活化受体表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但与IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组中CD3^+/CD56^+细胞百分率、CD3^+/CD8^+细胞百分率以及NKp46活化受体的表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。相同的效靶比,3组细胞的细胞毒作用比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论采用IL-15/IL-21组合优化人NK细胞培养体系,可以选择性地扩增NK细胞,提高培养物中NK细胞数量和细胞总数,以及活化受体NKG2D的表达水平,这将为优化临床级人NK细胞制备体系提供科学依据。