内皮素拮抗剂抑制人源性喉癌Hep-2细胞VEGF-C体外表达的定量分析

通过影响人源性喉癌Hep-2细胞中血管内皮生长因子C（VEGF—C）表达，探讨内皮素拮抗剂（BQ-123）与喉癌淋巴转移的机制，为临床及基础研究提供相应的实验依据．体外培养人源性喉癌Hep-2细胞，运用酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞培养液中VEGF—C的含量；利用M1-r比色法，测定不同浓度的内皮素拮抗剂对人源性喉癌Hep-2细胞增殖的影响．实验中发现当浓度分别为20．0～150．0μg／mLBQ-123作用48h，对人源性喉癌Hep-2细胞增殖有显著抑制作用（P〈0．05）；浓度分别为50．O～150．0μg／mLBQ-123对人源性喉癌Hep-2细胞VEGF—c蛋白分泌量有明显抑制活性作用（P〈0．05）．BQ-123可以有效抑制人源性喉癌Hep-2细胞中VEGF—C体内的表达．

甘草甜素对喉癌Hep-2细胞侵袭和迁移的影响及机制研究

目的:探究甘草甜素(Gly)对喉癌Hep-2细胞侵袭和迁移的影响及作用机制。方法:体外培养正常人喉黏膜上皮细胞和喉癌Hep-2细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和蛋白印迹实验检测微小RNA-205-5p(miR-205-5p)、沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)mRNA和蛋白表达水平。将喉癌Hep-2细胞分为对照组、Gly低浓度组、Gly中浓度组、Gly高浓度组、Gly高浓度+空载质粒组、Gly高浓度+miR-205-5p抑制剂组。各组给予相应浓度的Gly干预或转染对应质粒培养48 h。Transwell实验和划痕实验分别检测各组Hep-2细胞侵袭和迁移能力。RT-qPCR法和蛋白印迹实验检测各组Hep-2细胞miR-205-5p、SIRT3 mRNA和蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验分析miR-205-5p与SIRT3的靶向关系。结果:与人喉黏膜上皮细胞比较,喉癌Hep-2细胞miR-205-5p水平降低,SIRT3 mRNA和蛋白水平升高(均P<0.05)。与对照组比较,Gly低、中、高浓度组穿膜细胞数和划痕愈合率、SIRT3 mRNA和蛋白水平依次降低,miR-205-5p水平依次升高(均P<0.05)。与Gly高浓度组和Gly高浓度+空载质粒组比较,Gly高浓度+miR-205-5p抑制剂组穿膜细胞数和划痕愈合率、SIRT3 mRNA和蛋白水平升高,miR-205-5p水平降低(均P<0.05)。miR-205-5p可靶向调控SIRT3表达。结论:Gly能够抑制Hep-2细胞侵袭和迁移,其机制可能与上调miR-205-5p表达,进而靶向下调SIRT3表达有关。

血清成纤维细胞生长因子2、脑源性神经营养因子水平变化与产后抑郁症的关系

目的探究产后抑郁症(PPD)患者血清成纤维细胞生长因子2(FGF2)和脑源性神经营养因子(BDNF)水平的变化,并分析其与病情严重程度的关系。方法选取2020年10月至2022年10月丽水市第二人民医院收治的96例PPD患者作为研究对象,设为PPD组。另随机选取同期96例正常产妇设为对照组。记录两组的基线资料。采用酶联免疫吸附试验法检测血清FGF2和BDNF水平,采用爱丁堡产后抑郁量表(EPDS)评价PPD病情严重程度。采用Pearson法分析PPD患者血清FGF2、BDNF水平与EPDS评分的相关性;采用多因素Logistic回归分析影响PPD发生的可能因素。结果PPD组产前抑郁比例、妊娠期抑郁比例、EPDS评分、焦虑自评量表(SAS)评分及抑郁自评量表(SDS)评分均高于对照组(P<0.05);PPD组血清FGF2和BDNF水平均低于对照组(P<0.05)。PPD患者血清FGF2水平与EPDS评分呈负相关(r=-0.564,P<0.05),血清BDNF水平与EPDS评分呈负相关(r=-0.493,P<0.05);FGF2、BDNF是产妇发生PPD的保护因素(P<0.05),产前抑郁及妊娠期抑郁是产妇发生PPD的危险因素(P<0.05)。结论FGF2、BDNF在PPD患者血清中低表达,二者均与EPDS评分呈负相关,在PPD的病情缓解方面可能具有一定临床应用价值。

牙源性间充质干细胞来源的外泌体在牙周免疫调节的研究进展

外泌体(exosomes,EXOs)是细胞间通讯的重要介质,其内含有多种物质,包括miRNA、mRNA、DNA和蛋白质等,可通过多种方式作用于靶细胞。外泌体作为“无细胞治疗”手段,具有广阔的医学应用前景。EXOs的内含物随供体细胞及其状态的变化而变化,因此来自不同类型细胞的EXOs可能表现出不同的生物学效应。牙源性间充质干细胞来源的EXOs因其在组织再生医学和免疫调节领域表现出的生物学特性而受到越来越多的关注。在牙周免疫调节过程中促炎型(M1型)/抗炎型(M2型)巨噬细胞以及辅助性T细胞(Th17)/调节性T细胞(Treg)之间的平衡转化是研究热点。现有研究表明,牙源性间充质干细胞来源的EXOs能够促进巨噬细胞和T细胞的转化并且这种功能可能取决于周围微环境以及干细胞的组织来源等因素,如牙髓间充质干细胞来源的EXOs中的miR-1246通过抑制NF-κB P65从而促进M2型巨噬细胞的极化;根尖牙乳头间充质干细胞来源的EXOs通过促进DNA去甲基化酶Tet2(Tet methylcytosine dioxygenase 2,Tet2)介导的FoxP3的去甲基化,维持FoxP3的稳定表达,促进Treg转化,从而缓解牙周炎局部炎症。此外炎症相关因子可以影响牙源性间充质干细胞来源的EXOs的免疫调节活性,如脂多糖预处理的牙囊间充质干细胞来源的EXOs可通过ROS/JNK信号通路降低RANKL/OPG比例,并通过ROS/ERK信号通路促进巨噬细胞向M2型极化;肿瘤坏死因子-α和干扰素-α两种促炎细胞因子预处理的牙龈间充质干细胞来源的EXOs通过高表达CD73和CD5L从而促进M2型巨噬细胞的极化;牙周炎患者牙周膜间充质干细胞来源的EXOs促进巨噬细胞向M1表型极化。本文综述牙源性间充质干细胞来源的EXOs在牙周免疫调节过程中对两种细胞平衡转化影响的研究进展,为EXOs治疗牙周炎提供参考。

靶向髓源性抑制细胞的叶酸循环增强肿瘤免疫治疗效果研究

目的·探究叶酸循环代谢对髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)免疫抑制作用的调控机制。方法·在C57BL/6小鼠骨髓细胞的培养体系中加入细胞因子粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),体外诱导MDSCs。利用流式细胞仪检测诱导MDSCs的程序性死亡受体配体1 (programmed deathligand 1,PD-L1)表达水平和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生水平。采用磁珠分选出小鼠脾脏CD8^(+)T细胞并用Celltrace violet或CFSE标记,再与MDSCs共培养,72 h后用流式细胞术检测CD8^(+)T细胞增殖情况。通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)检测MDSCs中叶酸循环相关代谢酶的表达水平。采用叶酸循环代谢酶亚甲基四氢叶酸脱氢酶2 (methylenetetrahydrofolate dehydrogenase 2,MTHFD2)抑制剂DS18561882(DS18)和叶酸拮抗剂培美曲塞(Pemetrexed)处理MDSCs,并用流式分析检测MDSCs产生ROS和线粒体ROS的水平。将DS18或培美曲塞处理后的MDSCs与磁珠分选出来并用Celltrace violet或CFSE标记的CD8^(+)T细胞共培养,72 h后用流式细胞术检测CD8^(+)T细胞增殖情况。利用RNA测序(RNA-seq)检测DS18和培美曲塞处理后MDSCs在转录组水平的变化。建立小鼠结肠癌(mouse colon cancer cells,MC38)和Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)皮下瘤模型。造模后第10天开始,采用Isotype抗体、抗CD8单抗(1 mg/kg,清除CD8^(+)T细胞)、培美曲塞以及抗CD8单抗联合培美曲塞处理MC38荷瘤小鼠;利用Isotype抗体、抗Gr1单抗(1.25 mg/kg,清除MDSCs)、培美曲塞以及抗Gr1单抗联合培美曲塞处理MC38荷瘤小鼠;分别给予MC38和LLC荷瘤小鼠培美曲塞(50 mg/kg)、抗PD-1单克隆抗体(250μg/kg)以及培美曲塞联用抗PD-1单克隆抗体治疗;第14天收集小鼠肿瘤组织,记录肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线。结果·流式结果显示诱导后的骨髓细胞PD-L1的表达升高,ROS的产生也增加,且明显抑制CD8^(+)T细胞的增殖。qPCR结果显示MDSCs中叶酸循环相关代谢酶MTHFD2等表达升高。给予DS18和培美曲塞处理MDSCs会影响MDSCs的累积,抑制MDSCs的ROS产生,并解除对CD8 T细胞的免疫抑制。RNA-seq结果表明2种叶酸循环抑制剂处理后,与MDSCs分化相关基因S100钙结合蛋白a8 (S100 calcium binding protein a8,S100a8)等下调,与MDSCs抑制功能相关基因如与ROS产生有关的基因细胞色素b-245β链(cytochrome b-245beta chain,Cybb)等也有所下调。与对照组相比,培美曲塞处理组的小鼠肿瘤生长明显受到抑制。与培美曲塞处理组相比,抗CD8单抗联合培美曲塞处理组肿瘤进展加剧;与抗CD8单抗处理组相比,抗CD8单抗联合培美曲塞处理组肿瘤进展受到限制。清除MDSCs能显著抑制肿瘤生长,然而在清除MDSCs的荷瘤小鼠中,培美曲塞的抗肿瘤作用显著低于培美曲塞单独处理的小鼠。与抗PD-1抗体单独治疗相比,培美曲塞联用抗PD-1抗体治疗组的肿瘤生长限制更为显著。结论·培美曲塞依赖CD8^(+)T细胞发挥抗肿瘤作用,并通过重编程MDSCs为抗肿瘤表型,进一步阻碍肿瘤生长。通过调控MDSCs叶酸循环阻断其免疫抑制能力,可增强免疫检查点阻断剂治疗肿瘤效果。

中医不同治法调控ERK2、JNK促进肌源性干细胞向成骨分化的研究

目的通过观察中医不同治法促进大鼠肌源性干细胞(muscle-derived stem cells,MDSCs)成骨分化及细胞外调节蛋白激酶2(extracellular regulated protein kinase 2,ERK2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)蛋白表达情况,探究基于“脾肾相关”理论下,中医防治骨质疏松症(osteoporosis,OP)的作用机制。方法在随机数字表法下,将大鼠分为正常组、诱导组、补肾组、健脾组及补肾健脾组,制备含药血清,选取第4代大鼠MDSCs进行实验,CCK8法检测细胞增殖,p-NPP法检测细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,ELISA法检测细胞ERK2、JNK蛋白表达。结果①各组均可促进MDSCs增殖。②与正常组相比,各组ALP活性显著升高(P<0.01),其中补肾健脾组最高。③诱导组、补肾组、补肾健脾组ERK2蛋白表达显著高于正常组(P<0.01),健脾组高于正常组,差异无统计学意义;各组JNK蛋白表达显著低于正常组(P<0.01)。结论①补肾健脾法促进大鼠MDSCs成骨分化的效果最佳,表明在“脾肾相关”理论指导下,加强了肌肉骨骼之间的相互作用,可以对OP起到防治效果。②ERK2、JNK蛋白表达变化,提示中医治疗OP的作用机制可能与调控ERK2、JNK蛋白表达有关,这为中医临床诊疗OP提供了新的方向。

血清降钙素原变化率联合sIL-2R水平诊断尿源性脓毒症的临床价值

目的:探讨血清降钙素原变化率、可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)在尿源性脓毒症中的诊断价值。方法:将78例尿源性脓毒症病人作为观察组,同期住院的81例一般泌尿系感染病人作为对照组。采用酶联荧光分析法检测入院时及入院72 h血清降钙素原水平并计算降钙素原变化率,采用酶联免疫吸附法检测入院时血清sIL-2R、C反应蛋白(CRP)水平,采用全自动血液体液分析仪检测白细胞计数(WBC)、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数;尿源性脓毒症病人血清sIL-2R、降钙素原变化率与尿路感染常规检测项目的相关性采用Pearson相关分析;采用ROC曲线分析血清sIL-2R、降钙素原变化率对尿源性脓毒症的诊断效能;采用多因素logistic回归分析影响尿源性脓毒症的因素。结果:观察组血清sIL-2R、WBC、CRP、中性粒细胞计数水平显著高于对照组,降钙素原变化率、淋巴细胞计数显著低于对照组(P<0.01)。尿源性脓毒症病人血清sIL-2R与降钙素原变化率呈负相关关系(P<0.01);sIL-2R与淋巴细胞计数呈负相关关系(P<0.01),与WBC、CRP、中性粒细胞计数呈正相关关系(P<0.01);降钙素原变化率与淋巴细胞计数呈正相关关系(P<0.01),与WBC、CRP、中性粒细胞计数呈负相关关系(P<0.01)。sIL-2R、降钙素原变化率单独及联合诊断尿源性脓毒症的曲线下面积分别为0.849、0.851、0.908,sIL-2R、降钙素原变化率截断值分别为43.51 pg/mL、35.59%。sIL-2R是发生尿源性脓毒症的独立危险因素,降钙素原变化率是发生尿源性脓毒症的保护因素。结论:血清sIL-2R水平联合降钙素原变化率可作为诊断尿源性脓毒症的重要指标。

miR-135a通过下调SOX2抑制喉癌Hep-2细胞的恶性生物学行为和增强对奥沙利铂的敏感性

目的:探讨敲降miR-135a对人喉癌上皮Hep-2细胞的恶性生物学行为和奥沙利铂敏感性的影响。方法:收集2018年1月至2018年6月郑州大学附属南阳医院南阳市中心医院行喉癌切除术10例患者的喉癌组织和癌旁组织标本。采用qPCR检测喉癌组织和Hep-2细胞中miR-135a的表达水平。miR-135 inhibitor转染喉癌Hep-2细胞后,采用CCK-8检测Hep-2细胞活性,集落形成实验检测Hep-2细胞集落形成能力,Transwell实验检测Hep-2细胞的侵袭及迁移能力,WB实验检测Hep-2细胞中SOX2蛋白的表达水平。0.5、1.0、1.5、2.0μmol/L的奥沙利铂处理已转染miR-135 inhibitor的Hep-2细胞,CCK-8实验检测Hep-2细胞的增殖活性,Annexin-V-FITC/PI染色流式细胞术检测Hep-2细胞的凋亡率。采用miR-135a inhibitor质粒、对照pcDNA空载体(SOX2-Con)质粒、pcDNA-SOX2(SOX2-OE)质粒共转染Hep-2细胞,构建miR-135a inhibitor+SOX2-Con组和miR-135a inhibitor+SOX2-OE组,检测此2组细胞的增殖活性、集落形成能力、侵袭及迁移能力。结果:与癌旁组织比较,喉癌组织中miR-135a表达水平显著升高(P<0.01);与正常NHP细胞比较,miR-135a在Hep-2细胞中表达水平明显上调(P<0.01);转染miR-135a inhibitor导致Hep-2细胞中miR-135a表达水平明显降低(P<0.01)。敲降miR-135a明显降低Hep-2细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移、侵袭和SOX2表达(均P<0.01);明显增强细胞对奥沙利铂敏感性(P<0.01);与miR-135a inhibitor+SOX2-Con组比较,miR-135a inhibitor+SOX2-OE组的Hep-2细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移与侵袭能力均明显增加(均P<0.01);同时,用不同浓度的奥沙利铂处理此2组细胞,相对于miR-135a inhibitor+SOX2-Con组,miR-135a inhibitor+SOX2-OE组的Hep-2细胞存活率显著升高(P<0.01)。结论:敲降miR-135a可能通过下调转录因子SOX2的表达抑制Hep-2细胞的恶性生物学行为,并增强其对奥沙利铂的敏感性。

下调FoxM1表达对人喉癌Hep-2细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨下调Fox M1表达对人喉癌Hep-2细胞顺铂敏感性的影响及其可能机制。方法分别选用Fox M1 siRNA以及Fox M1特异性抑制剂(硫链丝菌肽)下调Hep-2细胞Fox M1表达。实时定量PCR、Western blot检测siRNA或硫链丝菌肽处理细胞后Fox M1 mRNA、蛋白表达量;MTT法检测下调Fox M1表达后Hep-2细胞的顺铂敏感性;流式细胞术检测下调Fox M1表达后顺铂诱导的凋亡率变化;实时定量PCR、Western blot检测顺铂作用于Fox M1下调组及对照组细胞,其Fox M1 mRNA、蛋白及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达变化。结果 siRNA及硫链丝菌肽均能下调Fox M1表达(P<0.05);两种方式均能降低顺铂作用下细胞存活率以及IC50[NC组顺铂IC50=(2.609±0.102)μg/m L,干扰组IC50=(0.771±0.058)μg/m L,P<0.05;对照组顺铂IC50=(2.142±0.198)μg/m L,抑制剂组IC50=(0.773±0.063)μg/m L,P<0.05],siRNA法处理后NC组、干扰组、NC+顺铂组、干扰+顺铂组凋亡率依次为(4.197±0.273)%、(12.553±0.183)%、(37.465±4.305)%、(82.373±7.214)%,干扰+顺铂组凋亡率显著升高(P<0.05);抑制剂处理后对照组、抑制剂组、顺铂组、抑制剂+顺铂组凋亡率依次为(2.343±0.194)%、(10.127±0.479)%、(35.075±1.995)%、(62.843±1.824)%,抑制剂+顺铂组凋亡率显著升高(P<0.05);下调Fox M1表达,凋亡抑制蛋白Bcl-2下调,促凋亡蛋白Bax表达上调(P<0.05)。结论下调Fox M1表达可提高Hep-2细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与凋亡相关蛋白Bcl-2下调、Bax上调相关。

叶酸磁性纳米颗粒载顺铂抑制人喉癌Hep-2细胞生长且无细胞毒性作用

背景:化疗药物对癌细胞和对正常组织细胞均有杀伤作用,分子靶向治疗可以减少或者避免化疗药物对正常细胞的毒副反应。目的:观察叶酸磁性纳米颗粒载顺铂对喉癌的治疗作用。方法:制备叶酸修饰的载顺铂醛基化海藻酸钠改性磁性纳米颗粒,将叶酸修饰的载顺铂醛基化海藻酸钠改性磁性纳米颗粒、顺铂以及不含顺铂叶酸磁性纳米颗粒与人喉癌Hep-2细胞共培养,用MTT、流式细胞仪以及透射电镜观察的方法检测体外叶酸修饰的载顺铂醛基化海藻酸钠改性磁性纳米颗粒、顺铂以及叶酸修饰的醛基化海藻酸钠改性磁性纳米颗粒对人喉癌Hep-2细胞的影响。结果与结论:1叶酸修饰的载顺铂醛基化海藻酸钠改性磁性纳米颗粒和顺铂均对人喉癌Hep-2细胞有抑制作用,且两组抑制率比较差异无显著性意义(P>0.05)。2叶酸修饰的载顺铂醛基化海藻酸钠改性磁性纳米颗粒和顺铂两种药物随着顺铂药物浓度的增加,对人喉癌Hep-2细胞的抑制率逐渐升高。3顺铂在24,48 h对Hep-2作用的半抑制浓度值比较差异有显著性意义(P<0.05)。4叶酸修饰的载顺铂醛基化海藻酸钠改性磁性纳米颗粒和顺铂与Hep-2培养均引起细胞凋亡,凋亡细胞数量随着药物浓度的增加而增加(P<0.05),但两种药物之间比较差异无显著性意义(P>0.05)。5叶酸修饰的载顺铂醛基化海藻酸钠改性磁性纳米颗粒和顺铂均在低浓度时G0/G1期细胞比例增加,S,G2/M其细胞比例降低(P<0.05)。6透射电镜检测结果显示,摄取叶酸修饰的载顺铂醛基化海藻酸钠改性磁性纳米颗粒的细胞出现了显著的凋亡崩解改变。7结果说明,叶酸磁性纳米颗粒载顺铂可抑制人喉癌Hep-2细胞的生长,且不影响顺铂的药效,对细胞无毒性作用。

恩格列净对2型糖尿病小鼠脾脏髓源性抑制细胞增殖的影响

目的探讨恩格列净对2型糖尿病小鼠脾脏髓源性抑制细胞(MDSC)增殖的影响。方法选择C57BL/6J小鼠5只作为对照组。KKay自发2型糖尿病小鼠10只,采用高脂KK鼠料诱导2周,2型糖尿病模型建立后随机分入模型组4只和治疗组6只;对照组和模型组小鼠给予普通饮水,治疗组给予恩格列净3.75 mg/(kg·d)灌胃。各组小鼠继续饲养12周,监测随机血糖和体质量。12周后麻醉下留取血液用于后续血清炎性因子白细胞介素(IL)-6、IL-10和TNF-α检测,测量脾脏长度,称重后计算脾脏指数。采用苏木精-伊红染色,流式细胞术检测各组小鼠脾脏MDSC水平。结果与对照组比较,模型组小鼠血清IL-6、TNF-α水平明显升高,IL-10水平明显降低,治疗组小鼠血清IL-6水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,治疗组小鼠血清IL-6、TNF-α水平明显降低,IL-10水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。模型组和治疗组脾脏MDSC水平明显高于对照组[(2.90±0.92)%、(4.47±1.00)%vs(1.19±0.41)%,P<0.01],且治疗组MDSC水平较模型组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论恩格列净能够改善血清炎性因子水平和脾脏免疫环境,促进脾脏MDSC增殖,从而改善全身炎症状态。

血管内皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子在喉癌细胞Hep-2中的表达

目的研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblast growth factor,bFGF)在喉癌细胞Hep-2中的表达,及其与喉癌细胞生长、浸润及转移的关系。方法培养Hep-2和正常永生化表皮细胞HaCaT,提取总细胞RNA,应用逆转录聚合酶链反应检测VEGF mRNA和bFGF mRNA在Hep-2和HaCaT细胞中的表达。结果VEGF mRNA在Hep-2细胞中高表达,平均相对积分吸光度值为(0.839±0.063);VEGF mRNA在HaCaT细胞中低表达,平均相对积分吸光度值为(0.305±0.066),差异有极显著性意义(t=14.94,P<0.01)。bFGF mRNA在Hep-2细胞中高表达,平均相对积分吸光度值为(0.792±0.058);bFGF mRNA在HaCaT细胞中低表达,平均相对积分吸光度值为(0.296±0.049),差异有极显著性意义(t=17.54,P<0.01)。结论VEGF及bFGF与喉癌细胞的生长、浸润及转移有密切关系。

骨形态发生蛋白2对人尿源性干细胞骨向分化的影响

目的探讨骨形态发生蛋白2(BMP2)对人尿源性干细胞(hUSCs)骨向分化的影响,并研究其相关机制。方法体外提取hUSCs,利用流式细胞仪检测表型CD29、CD90、CD73、CD44、CD34及CD45;利用10-7~10-5mol/L浓度的BMP2干预hUSCs,Western blot检测骨性标志物碱性磷酸酶(ALP)和Runt相关转录因子2(Runx2);利用基因沉默干扰腺苷酸活化蛋白激酶(si-AMPK),并检测骨性标志物表达。建立大鼠颅骨缺损模型,通过将细胞附着在骨织工程修复支架β-磷酸三钙(β-TCP)植入颅骨缺损模型,1个月后micro CT检测新骨体积和新骨厚度并利用病理学观察新骨结构。结果流式细胞仪检测结果显示,hUSCs高表达CD29、CD90、CD73、CD44,低表达CD34、CD45;并且BMP2在10-6mol/L对hUSCs具有最佳促进成骨效果。Western blot显示,si-AMPK能有效抑制BMP2诱导的骨性标志物ALP和Runx2表达。体内实验结果显示,BMP2能有效促进新骨形成,而si-AMPK能有效抑制新骨形成。结论BMP2在体内外均能有效促进hUSCs骨向分化,可能是通过激活AMPK途径发挥作用。

藻蓝蛋白诱导喉癌HEP-2细胞凋亡的实验研究

目的:探讨藻蓝蛋白对人喉癌HEP-2细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法:不同浓度藻蓝蛋白处理HEP-2细胞,分别以MTT、倒置显微镜、扫描电镜、透射电镜、流式细胞术检测藻蓝蛋白对HEP-2细胞活力及凋亡的影响;DCFH-DA标记的流式细胞术检测细胞内的活性氧水平;分光光度法检测细胞内caspase-3、-8、-9的活性;RT-PCR、Western blot检测细胞凋亡相关基因的表达。结果:MTT结果显示藻蓝蛋白能够抑制喉癌HEP-2的细胞活力,且呈时间和剂量依赖性;倒置显微镜、电镜、流式细胞术的一系列定性化和定量化实验证实藻蓝蛋白可显著诱导HEP-2细胞的凋亡;藻蓝蛋白处理后细胞内ROS水平升高,caspase-3、-8、-9被激活;RT-PCR结果表明,藻蓝蛋白作用后Bax、Fas、P53、caspase-3和caspase-9表达显著上调(P<0.05),Bcl-2表达显著下调(P<0.05);Western blot结果和RT-PCR结果一致。结论:藻蓝蛋白能够诱导HEP-2细胞的凋亡,其机制可能与细胞内ROS水平升高,上调Bax、Fas和P53 mRNA,下调Bcl-2 mRNA的表达,从而促进凋亡信号的转导最终导致细胞凋亡有关。

槲皮素对喉癌细胞Hep-2的抑制增殖和诱导凋亡作用

目的研究槲皮素在体外对喉癌Hep-2细胞株的生长和凋亡的影响。方法应用MTT法、电镜和流式细胞术等方法对在体外经不同浓度槲皮素处理过的Hep-2细胞进行检测,观察细胞增殖和凋亡的改变。结果①槲皮素在一定浓度范围内能明显抑制Hep-2细胞的生长,作用72 h的半数抑制浓度(IC50)是52.48μmol/L,呈剂量依赖性关系。②PB能诱导Hep-2细胞凋亡,发生G1→S期阻滞。结论槲皮素可使喉癌Hep-2细胞增殖抑制和凋亡,为槲皮素用于喉癌临床治疗提供了部分依据。

松乳菇多糖对人喉癌Hep-2细胞肿瘤相关基因转录的影响

运用基因芯片技术分析松乳菇多糖对人喉癌Hep-2细胞肿瘤相关基因表达的影响及分子机制。结果表明,经松乳菇多糖600μg/m L处理48 h后,在人喉癌Hep-2细胞中发现相关肿瘤差异基因共68个,其中人喉癌Hep-2细胞肿瘤相关基因下调倍数大于100倍的基因共8个,下调50~100倍的基因共14个,同时按基因转录水平将这些基因进行了分类。运用KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析技术分析相关基因通路,结果显示松乳菇多糖主要抑制人喉癌Hep-2细胞中的MAPK信号转导通路和PI3K-AKT信号转导通路。在松乳菇多糖的刺激作用下,人喉癌Hep-2细胞的凋亡是多种基因共同作用的综合结果。用筛选出的基因进一步研究肿瘤凋亡的分子机制,对寻找潜在的抗肿瘤作用靶点具有重要生物学意义。

抗肿瘤药物与TRAIL联用对喉癌HEP-2细胞株增殖、凋亡的影响

目的探讨化疗药物顺铂(DDP)、5氟尿嘧啶(5-Fu)单独及与TRAIL联合对HEP-2细胞株增殖、凋亡的影响。方法MTT法检测其增殖抑制作用,FCM法检测细胞凋亡率。结果TRAIL与5-Fu、DDP联合作用于HEP-2细胞株时,其抑制率、凋亡率高于单独作用时的抑制率和凋亡率。结论TRAIL与5-Fu、DDP联合作用有协同抑制HEP-2细胞株增殖、诱导HEP-2细胞株凋亡的作用。

粉防己碱对喉癌耐药细胞株Hep-2／ADM多药耐药逆转作用研究

目的探讨天然有效成分粉防己碱(tetrandrine,TET)对喉癌耐药细胞株Hep-2/ADM的多药耐药逆转作用及其可能机制。方法采用MTT法检测不同浓度粉防己碱对Hep-2/ADM细胞的增殖抑制效应,选取其无毒剂量;MTT法检测长春新碱(vincristine,VCR)对HEP-2和Hep-2/ADM细胞增殖的抑制作用及加用粉防己碱后的变化;采用流式细胞仪检测细胞内药物蓄积和外排程度以及细胞凋亡。结果1.5μg/ml及更低浓度的粉防己碱对Hep-2/ADM细胞无明显细胞毒性作用。加入1.0μg/ml和1.5μg/ml粉防己碱后,Hep-2/ADM对VCR的耐药逆转倍数分别为1.72和2倍。1.5μg/ml浓度的粉防己碱可提高VCR在Hep-2/ADM细胞内药物的蓄积,增强VCR诱导的Hep-2/ADM细胞凋亡。结论粉防己碱可以部分逆转Hep-2/ADM细胞的多药耐药,随药物浓度增加,逆转效果有可能增强,其逆转机制可能与抑制P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)外排功能和增强化疗药物诱导的细胞凋亡有关。

金纳米花介导的近红外热疗对人喉癌Hep-2细胞增殖的抑制作用

各向异性的金纳米粒子由于其表面等离子共振吸收峰可红移至近红外光区而具有特殊的近红外光热转换性能[1].研究结果表明,纳米棒等各向异性金纳米粒子可将入射的近红外光能转换成热能,从而有效杀伤肿瘤细胞[2].与手术、放化疗等常规治疗相比,金纳米粒子介导的近红外（NIR）热疗具有非侵入及无耐药性等优点,在肿瘤热疗和载药等领域具有广泛应用前景[3,4].传统的各向异性金纳米粒子的制备过程中需引入对生物体有毒的表面活性剂作配体[5,6],限制了其在生物医学领域的应用.

TNF-α和IFN-γ对Hep-2喉癌细胞MMPs表达的调节作用

目的 :研究喉癌 Hep- 2细胞系中 MMP- 2、MMP- 9、TIMP- 1、TIMP- 2和 MT1 - MMP的表达及 TNF- α和 IFN- γ对 MMPs表达的调节作用。方法 :分别在细胞生长的不同时期收集细胞 ,采用半定量 RT- PCR方法 ,分析 Hep- 2细胞 MMP- 2、MMP- 9、MT1 - MMP和 TIMP- 1、TIMP- 2 m R-NA的表达水平。结果 :细胞接种后 2 4 h MMP- 2和 MMP- 9的 m RNA水平最高。Hep- 2细胞在第2、3天 MT1 - MMP m RNA的表达水平最高 ,细胞表达相对恒定的 TIMP- 1而细胞内 TIMP- 2 m R-NA的表达水平比 TIMP- 1高 2倍。 TNF-α可增强 Hep- 2细胞的 MMP- 2 m RNA的表达 ,IFN-γ可抑制 MMP- 2的表达。两种因子联合应用时其作用可相互抵消。 MT- MMP和 TIMP- 1对 TNF-α和 IFN- γ的调节不敏感。 TIMP- 2 m RNA的水平可被 TNF- α抑制 1倍 ,而 IFN- γ能够增强TIMP- 2 m RNA的水平。结论 :细胞因子对 MMPs的转录有调节作用 ,IFN- γ能够降低 MMP- 2、MMP- 9的表达 ,可成为一种很有价值的喉癌辅助治疗药物。