基因工程技术制备的人源性抗Mr48×10^3角蛋白抗体Fab片段的纯化与活性鉴定

目的 用基因工程技术制备人源性抗角蛋白抗体Fab片段 ,并对其纯度、抗原结合活性及特异性等进行鉴定 .方法 将从半合成噬菌体抗体库中成功地筛选到的特异表达抗角蛋白 Fab片段的阳性克隆转化大肠杆菌 ,IPTG诱导表达 ,产物经金属鏊合层析纯化 ,并用 EL ISA鉴定抗原结合活性和特异性、SDS- PAGE鉴定纯度和蛋白印迹检测抗角蛋白抗体 Fab片段识别的抗原组分 .结果 可溶性表达的抗角蛋白抗体 Fab片段经金属鏊合层析可有效地纯化 ,蛋白印迹明确纯化产物为人 Fab片段 .所纯化的 Fab片段在非还原 SDS-PAGE中形成 Mr5 0× 10 3单一条带 ,在还原 SDS- PAGE中可见 Mr 2 3× 10 3,Mr 2 5× 10 3两条带 .EL ISA和 Western blot证实该片段具备良好的抗原结合活性和抗原特异性 .结论 成功表达并鉴定了人源性抗 Mr 4 8× 10 3角蛋白的 Fab可溶性片段 ,为人源性抗角蛋白抗体工程化、进一步研究该抗体的生物活性并提高其临床应用价值奠定了良好的基础 .

抗氨基末端脂多糖结合蛋白基因工程抗体库的构建及体外表达筛选

目的构建人源化的单链可变区抗体库,运用体外表达技术翻译并筛选特异性的抗NHLBP抗体。方法分离健康人外周血单核细胞,抽提总RNA设计引物,扩增抗体轻重链的可变区,通过一段柔性片段将其连接成单链抗体库;应用体外表达技术翻译抗体库,并筛选出与NHLBP高度结合的单链抗体片段。结果扩增的单链抗体可变区片段分别为340bp和325bp,经连接后约为750bp。经过体外表达得到了约27000的抗体片段,经过5轮筛选进化,得到了可与NHLBP高度结合的抗体。结论已成功构建了人源化的单链抗体库;通过体外表达技术筛选到可与NHLBP高度结合的抗体。

基因工程抗体研究进展

王琰，男，５４岁，教授，解放军海军总医院中心实验科主任，北京医科大学临床肿瘤学院及基础医学院免疫学系兼职教授，第三军医大学兼职教授，主要从事抗体工程研究。抗体是机体内最复杂的分子，以其特有的基因结构和重组形成了巨大的多样性，可结合任何一种抗原，不仅为...

基因工程抗体研究进展

抗体分子是生物及医学领域中用途最为广泛的蛋白质分子.抗体制备技术经历了源自一百年前的多克隆抗血清、七十年代的杂交瘤单克隆抗体发展到目前的基因工程抗体阶段.使抗体的制备、性能和生产等均有了根本的改观.基因工程抗体指通过基因工程方法改造和制备抗体,它兴起于80年代对鼠单抗的人源化改造,接着出现了各种形式的小分子抗体和抗体融合蛋白,至九十年代初产生的抗体库技术将基因工程抗体的发展推向了高潮.本文仅就基因工程对抗体的改造(鼠单抗人源化、小分子抗体、抗体融合蛋白)和基因工程方法克隆新的抗体(抗体库技术)的进展情况作一简要介绍.

基因工程人抗角蛋白抗体在角质形成细胞内的反应定位

目的:探索一株基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体在培养的角质形成细胞内的反应定位。方法:利用从噬菌体抗体库中筛选到的特异表达抗角蛋白Fab片段的质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达出Fab抗体,纯化鉴定后将该抗体作用于培养的人角质形成细胞,在不同浓度和不同的作用时间应用免疫荧光细胞染色法及共聚焦显微镜观察该抗体在角质形成细胞内的反应定位,同时以基因工程抗HBsAg人Fab和1%BSA为对照。结果:基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体作用于角质形成细胞的胞浆,呈明显的绿色荧光,着色均匀,细胞核未见着色,两种对照均未见着色。结论:基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体,可与培养状态下的角质形成细胞胞浆中其特异性的抗原相结合,这为其临床应用奠定了基础。

抗体库技术

基因工程抗体可称为第三代抗体 ,其较前两代抗体有免疫原性低 ,用途多样等优点。其中抗体库技术又较另两种基因工程抗体 (嵌合抗体 ,改型抗体 )优越 ,可不经免疫制备抗体 ,又可实现完全人源化 ,理论上若构建出有足够库容量及多样性的抗体库 ,便可从中筛选任何抗原的单克隆抗体。该技术有可能取代杂交瘤技术。本文综述了抗体库技术的产生 ,发展 。

抗体技术研究进展(1):人源抗体技术

100年来,抗体的发现为人类疾病诊断、治疗和有害物质的分析检测发挥了巨大的作用.特别是1975年发明了单克隆抗体技术以及1986年发明基因工程抗体技术,为研制特异性高、大量均一并大量生产抗体成为了现实,也使嵌合抗体、全人源抗体造福人类并产生巨大的经济效益.为了克服鼠源性单抗可诱发人抗鼠抗体(HA-MA),通过嵌合抗体、改构抗体、小分子抗体等技术和改良抗体与抗原结合的特异性,已成为抗体技术研究的主要发展方向,本文主要就抗体人源化及抗体分子小型化,抗体功能复合化两个部分的进展进行综述.

抗-D抗体及其应用

Rh血型是仅次于ABO血型系统的人类红细胞抗原系统,至今已发现40多种抗原,但与临床密切相关的是D、C、c、E、e等5种抗原,其中最主要的是D抗原。相应的抗-D抗体无论是在临床输血检测,还是在Rh(D)新生儿溶血病、溶血性输血反应等的防治方面均具有非常重要的意义。传统的抗-D抗体的制备需用人的血清,来源受限。各种抗-D人源性单克隆抗体和基因工程抗体已经成为发展方向。

抑制血小板聚集功能的抗血小板膜糖蛋白GPⅡbⅢa自身抗体的筛选

目的:筛选出血浆中含有抑制血小板聚集的血小板膜糖蛋白GPⅡbⅢa自身抗体的血小板减少性紫癜(ITP)患者,为人源化抗GPⅡbⅢa基因工程抗体的研制做准备。方法:用改良MAIPA法检测24例慢性ITP患者血浆有无血小板膜糖蛋白GPⅡbⅢa自身抗体,用血小板聚集试验研究抗GPⅡbⅢa自身抗体对血小板聚集的影响。结果:24例慢性ITP患者中10例(41.7％)血浆中抗GPⅡbⅢa自身抗体阳性,2例明显抑制血小板聚集功能。结论:少数抗CPⅡbⅢa自身抗体可抑制血小板聚集功能。

人源性抗角蛋白单链抗体的构建及表达

目的用基因工程技术制备人源性抗角蛋白抗体单链抗体(singlechainFv,ScFv),并对其抗原结合特性等进行鉴定。方法利用基因重组技术对从半合成噬菌体抗体库中克隆的人源性抗角蛋白抗体Fab片段进行改造,获得了人源性抗角蛋白ScFv片段,并进行DNA序列分析。同时用ELISA法鉴定ScFv的抗原结合活性和特异性。结果DNA序列分析结果表明,单链抗体表达载体(pScFv)的Vκ和VH基因序列同Fab片段的Vκ和VH基因序列完全相同,表明在Fab片段改建成ScFv过程中未发生基因突变。可溶性表达的ScFv抗体能特异性地与角蛋白结合,而与其它抗原,如铁蛋白、胃蛋白酶、HBsAg等无关抗原不结合,说明人源性抗角蛋白Fab抗体改建为ScFv后具有较好的特异性,但可溶性表达的ScFv与角蛋白的结合活性低于可溶性Fab片段。结论成功表达并鉴定了人源性抗角蛋白的ScFv可溶性片段,为人源性抗角蛋白抗体工程化、进一步研究该抗体的生物活性并提高其临床应用价值奠定了基础。

治疗性抗体的改造

市场上已有18个被FDA批准的单克隆抗体,它们用于治疗如肿瘤、移植排斥、自身免疫病、病毒感染等人类疾病。治疗性抗体代表了生物制药业发展最快的领域之一。随着技术的发展,各种形式的工程抗体被构建来改善它们的特性和效能,包括:鼠抗体人源化,提高生物学活性,如亲和力成熟,改进效应功能,改善药代动力学。文章评述了这一领域的最新进展,同时也讨论了工程抗体的免疫原性和亲和力。

全人源单克隆抗体现状及发展趋势（续）

4技术平台 全人源单抗是抗体工程技术发展的重要趋势。目前全人源单抗的研发技术主要有：B细胞永生化技术、噬菌体抗体库技术、转基因小鼠技术以及人源杂交瘤技术等。其中以噬菌体展示技术和转基因小鼠技术实际应用最广泛、最成功。

科学家提出未来10年生物医药开发4大热点

基因工程药物(蛋白类药物)、人源化治疗性单克隆抗体药物、现代中药以及基因治疗技术，将成为未来10年国际生物医药研究开发领域的热点。这是25日在上海举行的21世纪医药国际学术大会暨2004上海国际生物技术与医药研讨会上透露的信息。

未来十年生物医药开发的四大热点

基因工程药物(蛋白类药物)、人源化治疗性单克隆抗体药物、现代中药以及基因治疗技术,将成为未来10年国际生物医药研究开发领域的热点.这是7月25日在上海举行的21世纪医药国际学术大会暨2004上海国际生物技术与医药研讨会上透露的信息.

中国遗传改变小鼠研发与市场在近20年的发展与变化

遗传改变小鼠是基因组经过"修饰"或"改造"的实验用小鼠,作为实验动物的重要组成在中国近20年里得到了飞速发展,被先后应用于生命科学与医学的基础研究、抗体药物评价与抗体药物研发等转化应用项目中。介绍了近20年中国遗传改变小鼠领域的国家投入、机构建设、市场发展、学术交流、工作重点及成果积累等方面的发展与变化。