高效液相色谱-同位素稀释-串联质谱法测定人源瘦素的含量

为准确测定人源瘦素的含量,建立了蛋白水解-高效液相色谱-同位素稀释-串联质谱(HPLCIDMS)测定人源瘦素纯品绝对含量的方法,并对人源瘦素蛋白水解时间进行优化。结果表明,人源瘦素中的被测氨基酸在温度为110℃,6mol/L HCl溶液中水解40h可达平衡。水解样品通过高效液相色谱分离后,使用多反应监测模式(MRM)分别检测脯氨酸m/z 116>m/z 70(Pro)和m/z 121>m/z 74(标记Pro)离子对,缬氨酸m/z 118>m/z 72(Val)和m/z 123>m/z 76(标记Val)离子对,亮氨酸m/z132>m/z86(Leu)和m/z142>m/z96(标记Leu)离子对,根据检测结果计算得出人源瘦素纯品的含量为0.582g/g,扩展不确定度为0.014g/g(k=2),这与纯度扣除法测定结果基本一致,标准偏差为4.8%。该方法提高了人源瘦素含量测定的准确度和精密度,使测量结果可溯源至SI单位,为人源瘦素标准物质的研制奠定了基础。