肺癌恶性胸腔积液来源肿瘤细胞的小鼠PDX模型构建及实验验证

目的·构建肺癌患者恶性胸腔积液(malignant pleural effusion,MPE)肿瘤细胞来源的肿瘤异种移植(patientderived tumor xenograft,PDX)模型,并进行实验验证。方法·从基因表达综合数据集(Gene Expression Omnibus,GEO)下载人肺癌伴MPE单细胞转录组测序公共数据GSE131907和人肺癌实体瘤单细胞转录组测序公共数据GSE203360,对数据进行聚类、差异基因本体功能富集分析,明确应用MPE建模的可行性。同时收集肺癌患者的MPE样本,经离心、裂解红细胞等富集细胞操作后,将其植入非肥胖型糖尿病重症联合免疫缺陷(non-obese diabetic/severe combined immunodeficient,NOD/SCID)小鼠皮下,待移植瘤生长至1000 mm³时进行瘤体传代及保存。对稳定传代移植瘤进行组织病理学检测,通过苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H-E染色)观察细胞组织形态,免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测肺癌标志物表达情况。结果·经单细胞数据分析发现MPE中肿瘤细胞的增殖功能更强,提示MPE中肿瘤细胞PDX建模或具备更佳成瘤效果;共收集35例肺癌MPE样本,成功构建13例PDX模型,成功率达37.14%;在组织病理学检测中,H-E染色可见移植瘤组织细胞异型性明显,IHC检测显示细胞角蛋白7(cytokeratin 7,CK7)、甲状腺转录因子1(thyroid transcription factor-1,TTF1)和天冬氨酸蛋白酶A(Napsin A)等肺癌标志物均呈阳性表达。结论·通过富集肺癌患者MPE中的肿瘤细胞,成功构建了更为简便高效、可实时动态建模的PDX模型。该模型保留了肺癌患者肿瘤细胞的恶性特征及蛋白表达特性,为肺癌伴MPE患者的基础研究和临床用药指导提供了重要的实验模型工具。

原代肿瘤细胞化疗药物敏感性检测指导下治疗对晚期癌症患者生存预后及肿瘤标志物的影响

目的探讨原代肿瘤细胞化疗药物敏感性检测指导下治疗对晚期癌症患者生存预后及肿瘤标志物的影响。方法以2022年1月至2023年4月在华南大学第一附属医院就诊的107例晚期癌症患者为研究对象,按不同化疗方案分为观察组(n=41例)和对照组(n=66例)。观察组:原代肿瘤细胞化疗药物敏感性检测指导下进行化疗;对照组:接受FOLFOX4(奥沙利铂+5⁃氟尿嘧啶+亚叶酸钙)方案化疗,随访12个月。比较两组完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定性疾病(SD)、病情进展(PD),计算有效缓解率(ORR)和疾病控制率(DCR);比较两组肿瘤标志物[鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、细胞角蛋白片段19(CYFRA21⁃1)];采用Kaplan⁃Meier生命曲线进行生存分析。结果观察组ORR率与DCR率均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。经治疗,两组血清SCC、CEA、CA125与CYFRA21⁃1水平均相应下降(P<0.05),且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan⁃Meier生命曲线分析结果显示,观察组PFS、OS与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论原代肿瘤细胞化疗药物敏感性检测指导下治疗晚期癌症,改善患者预后,对癌症晚期个体化治疗方案具有一定的指导价值。

肿瘤来源外泌体通过激活肺上皮细胞TLR3促进肺转移前微环境形成

肿瘤转移是肿瘤患者死亡的主要原因。肿瘤转移前微环境是指原发灶肿瘤能通过肿瘤来源物质动员和募集骨髓来源细胞到转移靶器官，与靶器官中基质细胞的协同作用，创造利于肿瘤细胞定居的“土壤”。多种骨髓来源细胞（如中性粒细胞等）被证实参与了转移前微环境的形成。

细胞角蛋白7与细胞角蛋白20联合检测在鉴别卵巢及胃肠道来源性肿瘤中的诊断价值

目的检测细胞角蛋白7(CK7)与细胞角蛋白20(CK20)在卵巢上皮性肿瘤中的表达,探讨其于卵巢胃肠道来源性肿瘤的诊断意义。方法采用免疫组织化学方法检测CK7与CK20的表达。结果CK7-/CK20+表达所占比例最高,且在卵巢原发性肿瘤与胃肠道来源肿瘤中差异显著,具有统计学意义。结论CK7与CK20联合检测能有效鉴别卵巢原发性肿瘤与胃肠道来源的卵巢转移肿瘤。

髓系来源抑制细胞在胃癌患者外周血和肿瘤组织中的数量及其临床意义

目的观察髓系来源抑制细胞(MDSC)在胃癌患者外周血的数量和肿瘤组织、癌旁组织的表达,探讨MDSC的数量与胃癌患者临床病理特征间的关系。方法收集62例胃癌患者外周血和其中12例患者的新鲜肿瘤组织和癌旁组织以及20份健康志愿者外周血,流式细胞仪分析HLA-DR-CD33+CD11b+MDSC的数量,采用One-way ANOVA和Mann-Whitney U检验以及t检验分析胃癌患者外周血MDSC的数量与肿瘤的浸润深度、分化程度、患者TNM分期和淋巴结转移的关系。结果和健康志愿者相比,初诊胃癌患者外周血MDSC数量增加(P<0.01);MDSC在胃癌患者外周血的数量与肿瘤的浸润深度、分化程度、患者TNM分期和淋巴结转移显著相关(P<0.05);MDSC在同一病人胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织;复发/转移组患者外周血MDSC的数量明显高于无复发/转移患者(P<0.05);胃癌患者外周血HLA-DR-CD33+CD11b+MDSC高表达负性协同刺激分子T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)。结论 MDSC在胃癌患者外周血的数量与肿瘤恶性程度及复发转移密切相关。

肿瘤来源的抑制性细胞因子影响树突状细胞的微观流变特性并导致免疫应答恶化

现已证明,在肿瘤发生过程中,司职抗原呈递的树突状细胞的功能存在缺陷和紊乱,从而导致了免疫系统的显著受抑和肿瘤的免疫逃逸.为了探索肿瘤的免疫逃逸机制,利用生物物理学和微观流变学的方法研究了肿瘤来源因素对树突状细胞(dendriticcells,DCs)分化过程的影响.发现来源于肿瘤微环境的细胞因子等成分,导致DCs的渗透脆性增加、细胞膜脂流动性显著下降,而且细胞的转录水平和能量状态也明显改变,导致DCs的抗原摄取能力和活化幼稚T细胞的能力显著下降.所以,DCs的微观流变特性的改变也许是肿瘤免疫逃逸机制的一个方面.

肿瘤细胞减灭术联合腹腔热灌注化疗术治疗晚期妇科恶性肿瘤来源腹膜癌患者的效果及安全性

目的分析肿瘤细胞减灭术（CRS）联合腹腔热灌注化疗（HIPEC）治疗妇科恶性肿瘤来源腹膜转移癌的围手术期安全性、疗效及预后相关因素。方法筛选出接受CRS联合HIPEC治疗妇科恶性肿瘤来源腹膜癌患者24例。术中评估所有患者腹膜癌转移指数及肿瘤细胞减灭程度。术后第1、7天对所有患者进行血常规、肝肾功能及电解质生化检查，记录其实验室检查结果及所有患者胃肠道功能恢复情况、切口愈合情况等。分析并讨论影响患者生存期的独立因素及其相关性。结果24例患者共接受25次CRS联合HIPEC治疗，术中评估腹膜癌指数为4-32分（中位数18分）。细胞减灭程度评分0分2例（8．33％），1分13例（54．17％），2分5例（20．83％），3分4例（16．67％）。死亡16例（66．67％），带瘤生存5例（20．83％），无瘤生存患者3例（12．50％）。患者总体生存期为31．47个月。第6、12、18、24、48个月生存率分别为83％、64％、48％、16％、13％。无术后30d内死亡病例，6例（25．2％）患者发生1—2级术后并发症，4例微小瘘，1例腹壁切口开大，1例腹部脓肿：4例（16．7％）发生3级术后并发症，3例大瘘，1例引流口感染；4例（16．7％）发生4级术后并发症，2例出血，2例大瘘。年龄〈55岁和〉t55岁患者的中位生存期分别为40．99个月和21．84个月。PCI≤20和PCI〉20患者的中位生存期分别为39．29个月和18．27个月。CCR0-1、CCR2-3患者的中位生存期分别为37．57个月和14．78个月。多因素分析结果示CCR及PCI与预后有关；患者年龄、腹膜癌阶段、淋巴结状态、灌注化疗药物及腹腔积液量均与预后无相关性（P〉0．05）。结论CRS联合HIPEC治疗可使部分妇科恶性肿瘤来源腹膜癌患者受益，围手术期严重不良事件发生有待进一步改善。

肿瘤微环境中髓系来源抑制细胞对T细胞免疫活性抑制的分子机制

髓系来源抑制细胞(MDSC)根据其起源和功能而命名,由巨噬细胞、树突状细胞(DC)及粒细胞等细胞的前体细胞组成。肿瘤免疫逃逸与肿瘤微环境中MDSC介导的抗肿瘤免疫抑制相关,肿瘤微环境中的MDSC主要通过抑制T细胞的免疫活性来发挥免疫抑制作用。根据MDSC与T细胞之间的接触方式,肿瘤微环境中的MDSC抑制T细胞免疫功能的分子机制可分为直接抑制和间接抑制两类,其中MDSC通过产生细胞因子影响T细胞功能和细胞之间膜受体配体相互作用发挥抑制T细胞功能的方式为直接抑制,而MDSC通过影响T细胞代谢从而影响T细胞功能及通过其他细胞发挥抑制T细胞功能的方式为间接抑制。制定针对MDSC的治疗策略时,需综合考虑上述多种分子机制共存的可能性。

肿瘤来源外泌体通过激活肺上皮细胞TLR3促进肺转移前微环境形成

肿瘤转移是肿瘤患者死亡的主要原因。肿瘤转移前微环境是指原发灶肿瘤能通过肿瘤来源物质动员和募集骨髓来源细胞到转移靶器官，与靶器官中基质细胞的协同作用，创造利于肿瘤细胞定居的“土壤”。多种骨髓来源细胞（如中性粒细胞等）被证实参与了转移前微环境的形成。

树突状细胞来源Exosomes治疗肿瘤的研究进展

肿瘤免疫治疗可针对特定的抗原激发体内的免疫应答来提高免疫能力,破坏肿瘤细胞的免疫逃逸功能,杀伤或杀灭肿瘤细胞而不损伤正常细胞、组织,提高肿瘤患者的生存率以及提高生活质量。如何打破肿瘤的免疫耐受、激活机体免疫来杀伤肿瘤,是当前肿瘤免疫治疗研究的主要方向。

长链非编码RNA参与调控肿瘤中髓源性抑制细胞的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)作为一组长度超过200 nt的非编码RNA,其在人类转录组中占据重要地位,且在多种癌症类型中发挥着重要作用,尤其是在调节肿瘤免疫微环境和肿瘤细胞免疫逃逸方面具有关键作用,但目前尚缺乏较为系统的文献总结。髓源性抑制细胞(myeloidderived suppressor cells,MDSCs)作为一类具有免疫抑制作用的髓系细胞,在肿瘤中扮演着重要角色,通过直接和间接抑制T细胞的活性、促进调节性T细胞的扩增、调节肿瘤微环境、促进肿瘤转移等方式,影响着肿瘤的生长、免疫抑制和转移。该文强调了对MDSCs调控机制的深入研究对于发现有效的肿瘤治疗靶点和开发新的治疗策略具有重要意义。随着对lncRNA与MDSCs关系的进一步认识和研究,有望为肿瘤治疗提供更多的靶点和新的治疗方法,以改善患者的临床结局。

肿瘤组织骨髓来源新生血管内皮和炎症细胞浸润动物模型的观察

背景与目的:肿瘤组织新生血管主要是靠宿主血管以出芽的方式形成,一些研究认为骨髓来源的内皮前体细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)参与肿瘤组织血管的生成,而且肿瘤组织中骨髓来源的炎症细胞可能促进肿瘤的侵袭、血管生成和转移等。本实验旨在建立动物模型以观察骨髓来源的肿瘤组织新生血管内皮细胞,以及骨髓来源的炎症细胞在瘤组织中的浸润情况。方法:以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因C57BL/6小鼠为供体提供骨髓,普通清洁级C57BL/6小鼠经60Co 8 Gy全身照射,24h后为受体进行骨髓移植,于移植2周后接种Lewis肺肿瘤细胞于受体小鼠腋下,待肿瘤直径达到1～2cm时,取肿瘤组织切片在荧光显微镜下直接观察肿瘤血管及炎症细胞,并结合免疫组化方法明确其种类和分布。结果:在荧光显微镜下可观察到散发不连续性绿色荧光的肿瘤血管内皮细胞和浸润的炎症细胞,经免疫组化测定染色大部分呈阳性。肿瘤细胞周边和内部坏死区可见大量巨噬细胞浸润;肿瘤间质和肿瘤细胞区散在分布着少量淋巴细胞。结论:肿瘤组织新生血管的部分内皮细胞来源于骨髓;这种动物模型可以作为观察肿瘤组织中骨髓来源细胞特异而直接的方法。

肿瘤干细胞的来源、标志物以及在毒理学研究中的应用

肿瘤干细胞(CSCs)是一类具有自我更新能力并且可以产生异质性肿瘤的细胞,是目前肿瘤研究的热点,在肿瘤的发生、发展和转移的机制探讨,肿瘤的评估、早期诊断和预后以及抗肿瘤药物的筛选方面展现了良好的应用前景。本文综述了CSCs来源的几种形式,归纳了常见恶性肿瘤中的标志物,概括了CSCs在毒理学研究中的应用,最后展望了CSCs研究的发展方向。

Th2细胞因子与肿瘤髓系来源抑制细胞相关性的研究进展

髓系来源抑制细胞(MDSC)是骨髓细胞的一种异质性群体,对肿瘤发挥着免疫抑制作用。白细胞介素4(IL-4)、IL-6、IL-10、IL-13、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、血管内皮生长因子(VEGF)、环氧合酶2(COX2)等相关因子可以调控MDSC的生成、增殖、迁移和活性,并通过多种途径介导MDSC发挥免疫抑制作用。而IL-4、IL-6、IL-10、IL-13等Th2类细胞因子主要参与调控MDSC的产生和活性,促进MDSC的增殖,提高MDSC的抑制功能。如通过诱导MDSC生成精氨酸酶1(Arg1)、转化生长因子β(TGF-β),促进T细胞的凋亡,以及MDSC通过产生Th2细胞因子与巨噬细胞之间相互联系,引起促进肿瘤进展的Th2型免疫反应的发生。

肿瘤细胞来源的胞外体诱导机体免疫耐受及其临床应用

胞外体（Exosomes,EXO）是真核细胞释放的纳米级膜性小囊泡,是由细胞的多泡体（Multivesicular bodies,MVBs）出胞时与细胞膜融合后,向细胞外释放的囊性结构.多种类型真核细胞可以释放EXO.EXO生物学功能与其所来源的细胞直接相关,其诱导的免疫激活作用早已备受关注,并应用至肿瘤免疫的实验研究.然而,越来越多的研究表明,EXO在特定环境中亦同样可诱导免疫耐受,这无疑给肿瘤的免疫治疗带来了新的挑战.EXO诱导的免疫耐受可通过下调机体免疫监视,促进肿瘤生长及转移.这一新发现逐渐平息了研究者对EXO作为抗肿瘤新方法的狂热,但却为治疗自身免疫性疾病、同种异体移植等疾病带来了新希望.EXO诱导的免疫耐受应用于相关疾病的治疗将成为研究热点.

消化系统肿瘤组织细胞来源及临床分期/病理类型与化疗药物敏感性的关系研究

目的从肿瘤组织学来源、临床病理分期及病理类型角度,探讨肿瘤细胞与化疗药物敏感性的相关性,指导临床化疗。方法通过肿瘤细胞体外药敏试验———四甲基偶氮唑盐(MTT)着色法,对480例消化系统肿瘤新鲜标本进行化疗药物敏感性检测,分析不同组织学来源、临床病理分期及病理类型肿瘤细胞与化疗药物敏感性的相关性。结果(1)4种不同肿瘤细胞对丝裂霉素(MMC)及5氟脲嘧啶(5FU)+顺铂(CDDP)的敏感性无显著性差异(P>0.05),对其余所有药物的敏感性均有显著性差异(P<0.05)。(2)在临床分期中,食管癌肿瘤细胞对阿霉素(ADM)的敏感性无显著性差异(P>0.05),其余肿瘤细胞对所有药物的敏感性均有显著性差异(P<0.05)。(3)在胃癌和大肠癌不同病理组织学类型中,肿瘤细胞对所有药物的敏感性均有显著性差异(P<0.05)。结论不同组织学来源的肿瘤细胞对化疗药物的敏感性不同。肿瘤细胞对化疗药物的敏感性与肿瘤的临床病理分期、病理组织学类型密切相关,分期越晚,分化程度越高,肿瘤细胞对化疗药物的敏感性越高。

靶向髓源性抑制细胞的叶酸循环增强肿瘤免疫治疗效果研究

目的·探究叶酸循环代谢对髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)免疫抑制作用的调控机制。方法·在C57BL/6小鼠骨髓细胞的培养体系中加入细胞因子粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),体外诱导MDSCs。利用流式细胞仪检测诱导MDSCs的程序性死亡受体配体1 (programmed deathligand 1,PD-L1)表达水平和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生水平。采用磁珠分选出小鼠脾脏CD8^(+)T细胞并用Celltrace violet或CFSE标记,再与MDSCs共培养,72 h后用流式细胞术检测CD8^(+)T细胞增殖情况。通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)检测MDSCs中叶酸循环相关代谢酶的表达水平。采用叶酸循环代谢酶亚甲基四氢叶酸脱氢酶2 (methylenetetrahydrofolate dehydrogenase 2,MTHFD2)抑制剂DS18561882(DS18)和叶酸拮抗剂培美曲塞(Pemetrexed)处理MDSCs,并用流式分析检测MDSCs产生ROS和线粒体ROS的水平。将DS18或培美曲塞处理后的MDSCs与磁珠分选出来并用Celltrace violet或CFSE标记的CD8^(+)T细胞共培养,72 h后用流式细胞术检测CD8^(+)T细胞增殖情况。利用RNA测序(RNA-seq)检测DS18和培美曲塞处理后MDSCs在转录组水平的变化。建立小鼠结肠癌(mouse colon cancer cells,MC38)和Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)皮下瘤模型。造模后第10天开始,采用Isotype抗体、抗CD8单抗(1 mg/kg,清除CD8^(+)T细胞)、培美曲塞以及抗CD8单抗联合培美曲塞处理MC38荷瘤小鼠;利用Isotype抗体、抗Gr1单抗(1.25 mg/kg,清除MDSCs)、培美曲塞以及抗Gr1单抗联合培美曲塞处理MC38荷瘤小鼠;分别给予MC38和LLC荷瘤小鼠培美曲塞(50 mg/kg)、抗PD-1单克隆抗体(250μg/kg)以及培美曲塞联用抗PD-1单克隆抗体治疗;第14天收集小鼠肿瘤组织,记录肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线。结果·流式结果显示诱导后的骨髓细胞PD-L1的表达升高,ROS的产生也增加,且明显抑制CD8^(+)T细胞的增殖。qPCR结果显示MDSCs中叶酸循环相关代谢酶MTHFD2等表达升高。给予DS18和培美曲塞处理MDSCs会影响MDSCs的累积,抑制MDSCs的ROS产生,并解除对CD8 T细胞的免疫抑制。RNA-seq结果表明2种叶酸循环抑制剂处理后,与MDSCs分化相关基因S100钙结合蛋白a8 (S100 calcium binding protein a8,S100a8)等下调,与MDSCs抑制功能相关基因如与ROS产生有关的基因细胞色素b-245β链(cytochrome b-245beta chain,Cybb)等也有所下调。与对照组相比,培美曲塞处理组的小鼠肿瘤生长明显受到抑制。与培美曲塞处理组相比,抗CD8单抗联合培美曲塞处理组肿瘤进展加剧;与抗CD8单抗处理组相比,抗CD8单抗联合培美曲塞处理组肿瘤进展受到限制。清除MDSCs能显著抑制肿瘤生长,然而在清除MDSCs的荷瘤小鼠中,培美曲塞的抗肿瘤作用显著低于培美曲塞单独处理的小鼠。与抗PD-1抗体单独治疗相比,培美曲塞联用抗PD-1抗体治疗组的肿瘤生长限制更为显著。结论·培美曲塞依赖CD8^(+)T细胞发挥抗肿瘤作用,并通过重编程MDSCs为抗肿瘤表型,进一步阻碍肿瘤生长。通过调控MDSCs叶酸循环阻断其免疫抑制能力,可增强免疫检查点阻断剂治疗肿瘤效果。

中医药调节髓源性抑制细胞失调在恶性肿瘤中的研究进展

髓源性抑制细胞(MDSCs)是一组具有免疫调节作用的髓系细胞。近年来,MDSCs在恶性肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病、妊娠等领域受到广泛关注,尤其在恶性肿瘤中研究最为深入。文章概述了MDSCs及其在肿瘤微环境及恶性肿瘤治疗中的研究,聚焦于中医药调控MDSCs介导的免疫失衡问题,总结了中医药调节MDSCs失调在恶性肿瘤中的研究进展。文章通过对已有文献的分析,揭示中药单体、中药复方等通过抑制MDSCs的扩增、限制MDSCs激活、诱导MDSCs分化成熟、阻止MDSCs的募集等方式多途径、多靶点发挥作用,改善免疫抑制状态,从而达到抗肿瘤效果,文末提出中医药对MDSCs调控作用的研究方面尚存在的问题,以期为未来的恶性肿瘤临床治疗和药物开发提供参考。

《中国肿瘤临床》文章推荐:髓源性抑制细胞在多发性骨髓瘤中的研究进展

多发性骨髓瘤(MM)是浆细胞恶性增殖性疾病,目前为血液系统第二大肿瘤。虽然蛋白酶体抑制剂和免疫治疗方案的应用改善了MM患者的预后,但大多数仍然无法被治愈,主要是因为MM细胞最终产生耐药。髓源性抑制细胞(MDSCs)是骨髓中髓系祖细胞分化受阻而形成的具有显著抑制T细胞免疫应答功能的一群异质性细胞,通过介导免疫抑制性作用促进MM的发展。

髓系来源抑制细胞及其在肿瘤免疫耐受中的作用

由于晚期肿瘤患者的免疫功能处于抑制状态,许多在动物实验中建立的肿瘤免疫疗法（如肿瘤疫苗等）应用于临床后疗效甚微。肿瘤衍生的细胞因子能诱导多种抑制性细胞。