一种人B淋巴细胞表面抗原的重组表达和纯化

人源CD20作为B淋巴细胞表面特异性表达的膜蛋白,可以作为B淋巴细胞瘤免疫治疗的有效靶点。通过分子克隆引物设计,将CD20的胞外区以重复串联的方式克隆到pET28a载体上,两者之间通过Linker连接区(-GSSGGSSG-)连接,构建表达载体pET28a-Bi20。测序正确后转化至大肠杆菌Transetta(DE3)中重组表达,优化表达条件为当菌液OD_(600)为0.6~0.8时,以IPTG终浓度1 mmol/L,37℃诱导5 h。表达产物带有C端6个组氨酸的亲和标签,以包涵体形式表达。通过包涵体洗涤条件优化,变性条件下的镍亲和层析纯化,透析复性条件的摸索和优化,最终获得纯度大于95%的可溶CD20胞外区同源二聚体Bi20,建立在大肠杆菌表达系统中规模化量产CD20胞外区多肽的方法。经Western Blot和ELISA检测证实纯化复性后CD20胞外区多肽Bi20具有良好的免疫原性。

慢性HBV感染HBsAg含量与T、B淋巴细胞亚群及NK细胞相关性

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染免疫不全状态(非活动期)乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)含量与外周血T、B淋巴细胞亚群及NK细胞的相关性。方法收集慢性HBV感染免疫不全状态(非活动期)者34例、健康者20例,采用流式细胞仪检测其外周血T、B淋巴细胞亚群及NK细胞百分比,实时荧光探针定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测HBs Ag的含量。结果 HBs Ag的含量与B淋巴细胞百分比呈正相关性(P<0.05),高HBs Ag含量组的B淋巴细胞高于健康组与低HBs Ag含量组,差异有统计学意义(P<0.05),与T淋巴细胞及NK细胞无相关性。结论在慢性HBV感染免疫不全状态(非活动期)的人群中,HBs Ag含量在一定程度上能反映患者的免疫状态,外周血淋巴细胞亚群和NK细胞检测对于了解患者免疫状态有一定的临床价值。

人源化CD25单克隆抗体对外周血T淋巴细胞活化和增殖的影响

本研究探讨人源化重组CD25单克隆抗体(rhCD25MAb)对外周血T淋巴细胞活化、增殖的影响。应用植物血凝素(PHA)刺激外周血单个核细胞,不加或同时加rhCD25MAb或环孢菌素A(CsA)进行体外培养,或先用PHA刺激T细胞活化后再加入rhCD25MAb继续进行培养。用MTT法检测淋巴细胞增殖率;流式细胞术检测T淋巴细胞表面抗原CD3、CD25的表达;ELISA方法检测细胞培养上清液中可溶性IL-2R(sIL-2R)水平。结果显示:rh-CD25MAb和CsA均能有效抑制PHA活化的T细胞的增殖,且随浓度的升高而增强,总体比较,CsA对T细胞的增殖抑制作用更强。虽然CsA和rhCD25MAb均能降低细胞培养上清中的sIL-2R的水平及CD25+/CD3+的比例,但rhCD25MAb的作用明显强于CsA。rhCD25MAb无论是在T细胞活化前还是活化后均能抑制T细胞表达CD25抗原和分泌sIL-2R。结论:rhCD25MAb具有很强的免疫抑制作用,它能抑制T细胞活化及抑制活化的T细胞增殖,临床上它不仅可用于治疗急性移植物抗宿主病(aGVHD),还可用于预防aGVHD。

HBsAg阳性患者HBcAg表达与肝组织淋巴细胞数量变化的关系

目的研究HBsAg阳性患者HBcAg表达与肝组织中T、B淋巴细胞、NK细胞、Kupffer细胞数量等临床指标变化的关系。方法选取50例HBsAg阳性表达的患者肝组织及23例肝血管瘤患者瘤旁正常肝组织,分别进行CD3、CD57、CD20、CD68及HBcAg免疫组织化学染色;用病理图像分析仪测量每例患者肝组织和正常肝组织每平方微米面积阳性细胞数。结果HBsAg阳性表达的患者肝组织中T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞和Kupffer细胞数量明显多于正常肝组织,以T淋巴细胞数量增加最为显著(P<0.05),HBcAg阳性表达组与HBcAg阴性表达组肝组织中T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞和Kupffer细胞数量变化无统计学意义(P>0.05)。HBcAg阳性表达组比HBcAg阴性表达组外周血的AFP、ALT含量高(P均<0.05),AST、GGT、ALP、白蛋白减少(P均<0.05),A/G比例降低(P<0.01)。结论各免疫细胞数量变化与膜型HBsAg的表达有关,与核型HBcAg表达无关;但核型HB-cAg的表达与各临床指标的改变密切相关。

人B淋巴细胞的分化及调节

B 淋巴细胞是人体内一类重要的免疫细胞,它与抗体的产生直接相关.众所周知,B 细胞从原始细胞到抗体分泌细胞要经过下面几个阶段:干细胞→前B细胞→不成熟B 细胞→成熟B 细胞→浆细胞.前B 细胞的特点为胞浆IgM 阳性,表面Ia 抗原阳性;不成熟B 细胞表面出现少量IgM,细胞表面Ia 抗原和补体C_3受体(C_3R)阳性.成熟B 细胞除表面Ig、Ia

94例成人急性普通B淋巴细胞白血病CD20表达与预后相关分析

急性淋巴细胞白血病（acutelymphoblasticleukemia，ALL）是淋巴细胞恶性增殖性疾病，起源于单克隆B淋巴细胞或T淋巴细胞的前体细胞，其中急性B淋巴细胞白血病根据细胞表面分化抗原的表达，依次分为早前B型、普通B型、前B型、成熟B细胞型，患者在生物学行为和预后方面有很大的异质性，对治疗反应有很大差别。

髓系抗原阳性成人B系急性淋巴细胞白血病临床分析

成人急性淋巴细胞白血病（ALL）是一组异质性疾病，不同恶性克隆来源的白血病细胞具有不同的生物学特征及预后因素，而细胞表面分化抗原的表达对ALL的精确诊断、分型以及治疗方案的选择和预后判断都有重要意义。5％～63％的ALL患者存在髓系抗原（MyAg）异常表达”，但有关MyAg在ALL中的预后意义尚有争议。

膜表面免疫球蛋白M检测对慢性淋巴细胞白血病和套细胞淋巴瘤的鉴别价值

目的探讨在慢性淋巴细胞白血病(CLL)和套细胞淋巴瘤(MCL)中诊断和鉴别诊断中,膜表面免疫球蛋白M(sIgM)的应用及意义。方法回顾性收集2016年5月至2022年8月江苏省人民医院血液科收治的首次确诊的CLL患者420例、MCL患者67例的临床资料;CLL患者中,典型免疫表型CLL(tCLL)298例,不典型免疫表型CLL(aCLL)122例。采用多参数流式细胞术(MFC)检测所有患者肿瘤细胞中sIgM和公认的CLL诊断免疫标记物分化抗原簇(CD)200表达水平,并分析sIgM、CD200以及二者联合在aCLL和MCL中的鉴别诊断价值。结果sIgM高表达率在MCL(88.1%)、aCLL(23.0%)、tCLL(8.7%)中依次降低(χ^(2)=193.218,P<0.01);而CD200高表达率反之,在MCL(10.4%)、aCLL(78.7%)、tCLL(92.9%)中依次升高(χ^(2)=261.194,P<0.01)。sIgM对MCL鉴别于aCLL的灵敏度,特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度与CD200相近。sIgM联合CD200相比于单一的CD200或sIgM指标拥有更高的诊断灵敏度(98.5%)和阴性预测值(98.7%)。结论sIgM表达水平在CLL和MCL的诊断,尤其在aCLL和MCL的鉴别诊断中具有很好的临床应用价值。

益气化瘀解毒方对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺损伤及中性粒细胞粘附分子的作用研究

目的 观察益气化瘀解毒方及拆方对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)模型大鼠的保护作用及中性粒细胞粘附分子的影响。方法 将36只SD大鼠随机分为对照组、模型组、益气清热组、益气化瘀组、益气逐饮组及中药全方组,每组6只。益气清热组、益气化瘀组、益气逐饮组、中药全方组给予对应中药浸膏12.2 g/(kg·d)连续灌胃7天,其余组均以等量蒸馏水灌胃。尾静脉注射LPS建立ARDS大鼠模型,造模后16小时麻醉处死各组动物进行取材。苏木精—伊红染色观察肺组织病理变化,采用酶联免疫吸附法法检测肺匀浆及肺泡灌洗液中Rap1b、淋巴细胞功能相关抗原1(leukocyte function-associated antigen-1,LFA-1)、巨噬细胞表面抗原-1(macrophage surface antigen-1,MAC-1)的表达水平,蛋白免疫印迹法检测肺组织Rap1b的表达水平。结果 与对照组相比,模型组大鼠Rap1b、LFA-1及MAC-1蛋白表达均有所上调。与模型组相比,益气化瘀解毒方及拆方可明显减轻ARDS模型大鼠肺损伤,显著下调肺泡灌洗液中Rap1b、MAC-1及肺匀浆中LFA-1蛋白表达。结论 益气化瘀解毒方对LPS诱导的ARDS模型大鼠具有保护作用,可能与其减少Rap1b、LFA-1和MAC-1蛋白表达水平,降低中性粒细胞粘附活性有关。

保乳术对早期乳腺癌患者术后CD19^+B细胞、NK细胞及血清IL-6水平的影响

目的分析保乳术对早期乳腺癌患者术后B淋巴细胞表面抗原(CD19+B细胞)、自然杀伤细胞(NK细胞)及血清白介素-6(IL-6)水平的影响。方法按照随机数字表法将2015年1月至2019年6月在呼和浩特市第一医院接受诊治的80例早期乳腺癌患者分为对照组(40例)和观察组(40例)。对照组患者采用改良根治术治疗,观察组患者采用保乳术治疗,两组患者均于术后随访1年。比较两组患者手术情况;比较两组患者术后1年乳房美观效果;比较两组患者术前、术后5 d CD19^+B细胞、NK细胞及血清IL-6水平;比较两组患者术后2个月并发症发生情况。结果与对照组比,观察组患者手术时间、切口长度及住院时间均缩短,且术中出血量减少;观察组患者术后1年乳房美观效果总优良率为87.50%,高于对照组的67.50%;与术前比,术后5 d两组患者CD19^+B细胞、NK细胞水平均降低,但观察组高于对照组;两组患者术后5 d血清IL-6水平均升高,但观察组低于对照组;术后2个月观察组患者并发症总发生率为10.00%,低于对照组的57.50%(均P<0.05)。结论保乳术可有效提升早期乳腺癌患者治疗效果,并提高乳房美观程度,同时抑制肿瘤进程,调节机体免疫功能,改善患者预后。

人源化与鼠源CD19 CAR-T细胞疗法治疗复发/难治急性B淋巴细胞白血病的长期随访

目的探索人源化和鼠源CD19嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)治疗复发/难治急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)安全性、短期及长期随访的疗效差异。方法分析2016年5月至2023年3月于华中科技大学同济医学院附属协和医院接受CD19 CAR-T细胞治疗的80例R/R B-ALL患者的有效性和安全性,其中接受鼠源CAR-T治疗31例,人源化CAR-T治疗49例。结果鼠源和人源化组患者发生细胞因子释放综合征(CRS)的比例分别为61.3%和65.3%,其中接受鼠源CAR-T的患者发生重症CRS的比例高于人源化CAR-T(19.4%对8.2%,P=0.174),两组中分别有1例患者死于严重CRS。1~2级免疫效应细胞相关神经毒性综合征(ICANS)的发生率为12.9%和6.1%,无患者发生高级别ICANS。鼠源组和人源化组中白血病患者的总体反应率分别为74.2%和87.8%。在中位时间为10.5个月的随访期中,两组患者中位无复发生存(RFS)期均为12个月,中位总生存(OS)期均未达到。在45例基线骨髓白血病细胞负荷>20%的患者中,接受人源化CAR-T治疗的患者1年PFS率显著高于鼠源组(43.25%对33.33%,P=0.027)。桥接移植是改善B-ALL患者OS(χ^(2)=8.017,P=0.005)及RFS(χ^(2)=6.584,P=0.010)的独立影响因素。常见高危因素(年龄、骨髓高肿瘤负荷、BCR-ABL融合基因)对长期随访结果无显著影响。3例人源化组患者多次回输后仍达完全缓解,1例鼠源组患者复发后二次回输鼠源CAR-T细胞RFS期仅1个月。结论与接受鼠源CAR-T疗法治疗的患者相比,人源化CAR-T在不影响安全性的前提下,在高肿瘤负荷患者中显示出更持久的疗效,并有效克服免疫原性导致的CAR-T耐药,为多次复发患者提供治疗选择。

哮喘患者白细胞表面分化抗原23的表达与IgE的相关性研究

目的 研究哮喘的发病机制 ,探讨哮喘患者白细胞表面分化抗原 (CD) 2 3的表达及与血清IgE的相关性。方法 用流式细胞术检测 2 2例典型哮喘、18例咳嗽变异型哮喘、2 0例喘息性支气管炎、2 0例肺炎和 2 5名正常对照者的外周血淋巴细胞CD19阳性、CD2 3阳性、CD2 3和CD19双阳性细胞 (CD19+ 、CD2 3+ 、CD19+ /CD2 3+ )的百分率 ,同时用免疫化学发光法检测血清IgE水平 ,并进行相关性研究。结果 典型哮喘、咳嗽变异型哮喘患者外周血淋巴细胞CD19+ 、CD2 3+ 、CD19+ /CD2 3+ 的百分率和血清IgE分别为 :(13.5 6± 5 .87) %、(2 6 .5 6± 7.6 1) %、(12 .86± 5 .0 1) %、(12 .6 7± 7.5 6 ) μmol/L和 (13 10± 5 .15 ) %、(2 4.6 6± 8.15 ) %、(12 .10± 4.97) %、(9.45± 4.16 ) μmol/L ,明显高于正常对照组 (7 95± 3.6 5 ) %、(14.92± 3.0 2 ) %、(6 .82± 2 .95 ) %、(3.10± 1.6 8) μmol/L和肺炎组 (P <0 .0 1) ,CD19+ 、CD2 3+ 、CD19+ /CD2 3+ 与血清IgE水平呈显著正相关。喘息性支气管Ⅰ组外周血淋巴细胞CD19+ 、CD2 3+ 、CD19+ /CD2 3+ 及血清IgE也显著高于正常对照组和肺炎组及喘息性支气管炎Ⅱ组 ,喘息性支气管炎Ⅱ组的上述指标与正常对照组和肺炎组差异无显著性。结论 淋巴细胞CD2 3的表达?

抗细胞表面抗原抗体可作为良好的免疫佐剂

目前非常需要能增强重组蛋白、合成多肽以及DNA疫苗免疫原性的优良免疫佐剂。许多尚在研究的免疫佐剂都是通过APC表面的识别受体来发挥作用，这类免疫佐剂通常会诱发细胞因子释放，从而导致注射部位或全身的不良反应。CD40和CD28是共刺激受体，分别位于B淋巴细胞和T淋巴细胞表面，它们能发出某种信号，在抗原受体受到刺激时增强淋巴细胞活化。过去的研究表明大剂量抗CD40抗体能增强机体对胸腺非依赖抗原的免疫应答，此项研究旨在确认抗原与抗CD40或CD28单克隆抗体（mAb）结合后，其免疫原性能否得到显著提高。

人参多糖联合化疗对中晚期消化道肿瘤患者疗效和免疫功能指标的影响

目的观察人参多糖联合化疗治疗中晚期消化道肿瘤的临床疗效及安全性,研究其对患者免疫功能的影响。方法60例中晚期消化道肿瘤患者随机分为治疗组和对照组,每组30例,均采用XELOX化疗方案,治疗组在化疗前2天给予人参多糖注射液。评估2组化疗前及化疗2周期后近期疗效,记录体力状况(KPS评分)及体质量变化情况,记录化疗后毒副反应发生情况,流式细胞仪检测各组血中T淋巴细胞抗原(CD_3、CD_4、CD_8)、B淋巴细胞抗原(CD19、CD20)、自然杀伤细胞表面抗原(CD_(16)、CD_(56))。结果 2组近期疗效及毒副反应发生情况无显著差异(P>0.05);化疗后,2组KPS评分、体质量均较化疗前明显降低(P<0.01);治疗组KPS评分明显高于对照组(P<0.01);2组血CD_3、CD_4、CD_(16)、CD_(56)百分比均较化疗前明显升高,CD8百分比较化疗前明显降低(P<0.05或P<0.01);治疗组较对照组升高/降低的更加明显(P<0.01)。结论人参多糖可以在一定程度上提高患者免疫功能,并改善患者一般状况,临床应用安全有效。

人源化抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa抗体库的构建及临床价值

目的筛选出抑制血小板聚集的血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa自身抗体,用噬菌体表面展示技术构建人源化抗血小板GPⅡb/Ⅲa单链噬菌体抗体(ScFv)库。方法用单克隆抗体特异性俘获血小板抗原(MAIPA)技术和血小板聚集试验筛选出血浆中含有抑制血小板聚集的血小板GPⅡb/Ⅲa自身抗体的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者。从筛选出患者的外周血淋巴细胞中提取mRNA,用RT PCR扩增出人免疫球蛋白的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片断,用DNA linker将VH和VL连接成ScFv基因片断。用限制性内切酶SfiⅠ/NotⅠ酶切ScFv后克隆到噬菌体载体pHEN2,然后转化大肠杆菌TG1。用辅助噬菌体M13K07援救转化后的TG1,产生ScFv。结果95例慢性ITP患者中41例(43.2%)血浆中抗GPⅡb/Ⅲa自身抗体阳性,强阳性患者5例(5.3%)。2例(2.1%)明显抑制血小板聚集功能。扩增出380～400bp大小的VH和VL基因,用连接肽(Gly4Ser)3成功地连接成约780bp大小的ScFv片断。ScFv克隆到pHEN2并转化大肠杆菌TG1后,形成2.1×107个克隆。用辅助噬菌体M13K07援救TG1后产生的噬菌体抗体库滴度为1.62×1010cfu/ml。结论少数抗GPⅡb/Ⅲa自身抗体可抑制血小板聚集功能。用噬菌体表面展示技术构建了ScFv库,可用来筛选人源化抗血小板GPⅡb/ⅢaScFv。

重组激活基因在免疫反应中的作用

基因的重排是淋巴细胞表面标志发生过程中的一个必要过程,对于细胞成熟后的功能和结构有着重要的作用。重组激活基因通过在组织中的表达能够激活B淋巴细胞抗原识别受体和T淋巴细胞抗原识别受体在细胞发生过程中进行重排,从而在免疫反应中发挥重要的调控作用。本文就重组激活基因的研究历史、它在免疫反应中的作用及最新的研究进展做一综述。