人源Fab抗体库的构建和抗HBsAg抗体的筛选和鉴定

目的构建人源Fab抗体文库,筛选抗HBsAg抗体片段并进行初步鉴定。方法收集20份临床检验废弃的成人乙肝感染者淋巴细胞,抽提总RNA,逆转录成cDNA,构建抗乙肝病毒人源免疫型Fab抗体文库。以HBsAg包板进行4轮循环的吸附-洗脱-扩增,挑单克隆用Phage-ELISA、DNA测序筛选阳性克隆,对阳性克隆进行可溶性表达,并用ELISA对其特异性进行鉴定。结果构建的人源Fab型抗体文库的库容为2.0×108,并具有良好的多样性。经过4轮筛选,成功获得4株能与HBsAg结合的人源抗体克隆,分别命名为hFabHB1、hFabHB2、hFabHB3和hFabHB4。对其中的hFabHB1进行可溶性表达,ELISA鉴定阳性。结论成功构建了抗乙肝病毒人源免疫型Fab抗体文库,从中筛选获得的4株人源Fab抗体片段有望在乙型肝炎的预防和治疗上发挥作用。