全人源抗狂犬病病毒糖蛋白抗体的制备及鉴定

目的:利用重组狂犬病病毒糖蛋白(RVG)免疫人源Ig M转基因小鼠,制备全人源抗重组RVG蛋白单克隆抗体,并对其免疫学特性进行初步鉴定。方法:以重组RVG蛋白作为抗原免疫人源Ig M转基因小鼠,采用杂交瘤技术制备筛选全人源抗重组RVG蛋白杂交瘤细胞株,双抗体夹心ELISA实验鉴定单抗的人源性及抗体类型,并对其特异性及与灭活狂犬病病毒CVS-11株的结合能力进行鉴定。结果:建立了5株稳定分泌抗重组RVG的全人源单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为5D1、6H11、9A3、15D6、19E6,均为人源Ig M免疫球蛋白,5株单抗均能特异性识别重组RVG蛋白,其中3株能与灭活狂犬病病毒CVS-11株特异性结合。结论:筛选制备了特异性全人源抗重组RVG蛋白的单克隆抗体,能与灭活狂犬病病毒CVS-11株特异性结合,为进一步研制用于狂犬病防治的抗体药物奠定了基础。

人抗HBs轻链基因的序列测定及序列分析

目的 :获得人源性乙型肝炎病毒抗HBs轻链基因。方法 :从已构建的人源性噬菌体抗体库中 ,用固相化HBsAg对构建的人源性噬菌体抗体库进行三轮淘筛 ,经ELISA实验 ,筛选到抗HBs噬菌体抗体 (P/N :2 .4 15 )的阳性克隆 ,根据已知序列合成一对轻链引物 ,进行PCR扩增 ,扩增出轻链目的基因片段 ,将目的基因片段定向克隆入质粒pUC18,进行序列测定及分析。结果 :筛选出的克隆具有HBsAg特异性亲和力 ,构建了pUCl8-抗HBsκ链重组质粒 ,序列分析其为κ链 ,为 6 4 3bp包括了可变区和恒定区。结论 :利用抗原抗体特异性反应从噬菌体抗体库中筛选到抗HBs轻链基因。